И.П. Ашмарин, А.А. Каменский, Г.С. Сухова - Руководство к практическим занятия по физиологии человека и животных (1128356), страница 27
Текст из файла (страница 27)
Важна также последовательность выполнения тестов — начинают с наименее эмоциогенных, заканчивают более стрессирующими. Важно соблюдение стандартности условий содержания и времени эксперимента, поэтому контрольных и опытных животных в опыте чередуют. При регистрации обязательно составляют стандартный лротокол экспсримГйий. Раздел У1. Физиологические механизмы поведения животных 133 Протокол эксперимента аРОДЭО» Дата: время: ОБРАБОТЕА И ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ Результаты работы представляют в виде средних значений или (и) медиан. Часто для наглядности вычисляют выраженность эффекта в процентах к контролю.
Данные представляются как в виде таблиц, так и в виде гистограмм; для отображения динамики изменений строят графики. Как правило используется непараметрическая статистика (критерии Вилкоксона — Манна-Уитни, Фишера и др.). Особое внимание следует обратить на то, что недостоверно различающиеся данные не принимаются для дальнейшей ной и ориетировочно-исследовательской активности "РОДЭО" 1-1а 5 мин. По окончании времени регистрации крыса высаживается в индивидуальную клетку для следующего тестирования. Показатели горизонтальной и вертикальной активности, а также количество заглядываний в верхние и нижние норковые отверстия записываются в журнал наблюдений. Камера прибора очищается бумажной салфеткой, после чего в нее помещают олытное животное ~Ко ] 2.
Вертикальная сетка. После тестирования в "РОДЭО" крыса помещается на вертикальную сетку. Фиксируется время удержания животного на сетке в каждом подходе; отмечается максимальное и определяется суммарное время удержания. Тест проводится троекратно с интервалом в 1 мин. Часть 1. Малый практикум по физиологии человека и животных Протокол экснеримента»вертикальна» сетка» Дата: время: интерпретации. Для выявления связанных переменных вычисляют коэффициент корреляции и дисперсии.
Далее проводится поиск сонаправленных изменений в разных тестах и выявляется общий паттерн "знака" эффекта. Соотнесение результатов с теоретическими данными дает возможность сделать заключение о нейрохимических и физиологических механизмах, лежащих в основе наблюдаемых изменений. Рекомеидуемая литерптура 1. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и'поведения./Под ред. Я, Буреш, О. Бурешова. М., 1991. 2. Физиология животных/Под ред. Т.Зкккерта: В 2 т.Т. 1. М., 1992.
3. Физиология человека/Под ред. Р.Ф.Шмидта, Г.Тевса: В 3 т. Т 1.М., 199б. Часть 11. Практические задачи по патофизиологии няются этаноловая, индометациновая и стрессорная модели повреждений в СОЖ. Этаноловые иовреждения проявляются в эксперименте у крыс при внутрижелудочном введении 60 -го спирта и выше уже через час после начала воздействия в виде хорошо заметных даже невооруженным глазом темных, большой протяженности геморрагических областей на гребнях складок слизистой оболочки. Одним из основных механизмов язвообразования при действии спирта считается нарушение кровотока в его слизистой и подслизистой оболочках. Из нестероидных противовоспалительных соединений в экспериментах чаще всего применяют индометацин — индометациновая модель.
Его вводят внутрижелудочно или внутрибрюшинно. Повреждения возникают через 6 ч уже при дозе 25 мг/кг. Они обычно также локализуются на гребнях складок слизистой, чаще всего имеют форму, близкую к круглой или овальной. Ульцерогенное действие нестероидных противовоспалительных соединений связывают с их способностью уменьшать синтез простагландинов. Последние в свою очередь обладают способностью увеличивать резистентность СОЖ путем активации репаративных и энергетических процессов, нормализации кислотности в желудке и его моторики. Стрессорные модели отличаются большим разнообразием: стресс, вызванный геморрагическим и ожоговым шоком, иммобилизационно-холодовой и иммобилизационный водоиммерсионный стрессы, стресс, спровоцированный плаванием и др.
В одном из предлагаемых ниже заданий описана методика иммобилизационного водоиммерсионного стресса. Повреждения слизистой при этой модели проявляются в виде небольших геморрагических областей на гребнях складок. Их суммарная площадь у контрольных животных обычно не превышает 4 — 6 мм' на желудок и сильно варьирует у различных животных. Основными патогенными факторами при стрессе обычно считают нарушение кровотока и кислой секреции в желудке. Все вышеописанные модели являются способом вызова острых повреждений СОЖ. Они затрагивают лишь верхние слои слизистой, быстро возникают, но могут так же быстро через несколько часов заживать. На таких моделях изучают, например, профилактические свойства различных противоязвенных препаратов.
Для оценки их лечебного эффекта обычно используют модели хронических язв. В эксперименте хронические язвы можно вызвать с помощью аппликации ледяной уксусной кислоты на серозную оболочку желудка. По литературным данным, формирование такой язвы в СОЖ под местом аппликации идет в среднем пять дней, потом Часть 11. Практические задачи по патофизиологии Рис.
1. Домик для иммобилизации крысы (А— вид сверху, Б — вид сбоку). 1 — передняя подвижная камера; 2 — винт; 3 — задвижка; 4 — зажим для закрепления задвижки; 5, 6 — отверстия для хвоста пластмассовым наконечником для введения растворов в желудок через пищевод; спирт 96'; 0,9%-й раствор ХаС1; индаметацин; домики для обездвиживания животных; емкость для воды (клетка или ведро); термометр; ножницы; пинцет; подложки для желудков (например, чашки Петри); бинокулярная лупа с окуляр-микрометром.
ХОД РАБОТЫ 1. За сутки до начала эксперимента крыс лишают пищи. Животных помещают в клетку, предварительно взвесив их и пометив. В клетки ставят специальные перфорированные поддоны, чтобы исключить поедание опилок и экскрементов и чтобы при этом животное оставалось чистым. 2. Перед началом эксперимента готовят зонды для внутрижелудочного введения. Для этого у металлической иглы диаметром 1,5 — 2 мм и длиной 9 см стачивают заостренный конец и надевают на него мягкий пластмассовый наконечник (его можно изготовить, например, из катетера подходящего диаметра).
Иглу слегка изгибают (рис. 2). 3. Животных ра:деляют методом случайного отбора на три равные группы; одну крысу оставляют для контроля и знакомства с анатомией интактного желудка. 4. Животным первой группы в желудок вводят спирт, второй— внутрибрюшинно индометацин, контрольной крысе — внутрижелудочно физраствор (1 мл/200 г веса). Для введения препарата в желудок крысу держат вертикально левой рукой в перчатке таким образом, чтобы ее голова находилась между средним и указательным пальцем; остальные пальцы удерживают передние лапы (рис.
2). Зонд, надетый на шприц, вводят в ротовую полость и осторожно проталкивают в глотку и дальше в пищевод. Зонд вводится на всю его длину. Он должен проходить без усилий, при этом животное свободно Тема 1. Патологические состояния, связанные с поражением желудка дышит. Конвульсивные дыхательные движения говорят о том, что зонд введен неправильно и попал в дыхательные пути.
Если животное задыхается или на пути зонда ощущается препятствие, зонд необходимо извлечь и через некоторое время попытку введения повторить. 5. Животных третьей группы помещают в иммобилизационные домики и погружают в холодную воду. 6. Через час после введения спирта Рис. 2. Положение крысы проводят эвтаназию контрольного во время введения зонда животного и крыс, получивших в желудок спирт. Для извлечения желудка крысу укладывают брюшной стороной вверх на препаровальном столике и ножницами разрезают брюшную стенку слева под ребрами. Пинцетом вытаскивают желудок, перерезают пищевод в месте его перехода в желудок и двенадцатиперстную кишку — в области пилорического сфинктера.
Желудок разрезают по большой кривизне, выворачивают слизистой оболочки наружу и промывают слизистую проточной водой. Желудок размещают на подложке слизистой оболочкой вверх и под бинокулярной лупой подсчитывают его площадь и площадь повреждений простым умножением длины на ширину (т.е. условно принимая их за прямоугольники). Все полученные значения суммируют. 7. Через три часа после начала стресса проводят эвтаназию животных, помещенных в холодную воду; а через шесть часов — крыс, которым был введен индометацин.
Желудки извлекают и подсчитывают площадь повреждений. ОБРАБОТКА И ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ Подводя итоги работы, необходимо дать описание внешнего вида повреждений, их локализации и интенсивности в каждой из моделей. Количественные данные сводятся в таблицу. Вид воздейст- вия тп Вес йю животного Тяжесть поражения (ТП) — определяется делением суммарной площади повреждений в желудке (Я ) на общую площадь желудка (Г,):ТП=Г /Я,. Для каждой групйй животных вычисляют также среднюю тяжесть поражения СОЖ в группе (ТП ) и частоту поражения (ЧП).
Часть 11. Практические задачи по патофизиологии 140 ТП равна сумме ТП у всех животных в группе, поделенной на колйчество животных в группе: ТП =ХТП /л. ЧП в группе рассчитывается как частное от деления количества животных с повреждениями на общее количество животных в группе (если все животные имеют повреждения, то ЧП равна 1): ЧП=л„„,/л. Результаты вычислений заносят в другую таблицу и/или представляются в виде диаграмм. При обсуждении результатов проводят анализ характера, локализации и интенсивности повреждений в слизистой оболочке желудка при разных моделях язвообразования. Задача 2. Изучение профилактических противоязвенных свойств некоторых лекарственных препаратов на этаноловой модели язвообразования Цель работы.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
