Убиквитин-независимый протеолиз основного белка миелина и его роль в развитии экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (1105762)
Текст из файла
МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТимени М.В. Ломоносова__________________________________________________________________ХИМИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТНа правах рукописиКузина Екатерина СергеевнаУБИКВИТИН-НЕЗАВИСИМЫЙ ПРОТЕОЛИЗ ОСНОВНОГО БЕЛКАМИЕЛИНА И ЕГО РОЛЬ В РАЗВИТИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГОАУТОИММУННОГО ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТА.Специальность 02.00.10 – «биоорганическая химия»Диссертация на соискание ученой степеникандидата химических наукНаучные руководители:канд. хим. наук Белогуров А.А.доктор хим.
наук, профессор,чл.-корр. РАН Габибов А.Г.МОСКВА – 2015СОДЕРЖАНИЕСПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ......................................................................................................................... 5ВВЕДЕНИЕ..................................................................................................................................................
7ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ............................................................................................................................... 9Протеасома .............................................................................................................................................. 9Структура и каталитические свойства протеасомы ......................................................................... 9Иммунопротеасома ........................................................................................................................... 14Система убиквитинилирования. Убиквитин-зависимый и убиквитин-независимый протеолиз............................................................................................................................................................. 17Ингибиторы протеасомы ..................................................................................................................
20Презентация антигенов на молекулах главного комплекса гистосовместимости ...................... 25Рассеянный склероз .............................................................................................................................. 31Общая характеристика заболевания ................................................................................................ 31Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит.................................................................. 33Роль Т-клеток в развитии рассеянного склероза и ЕАЕ ................................................................ 34Основной белок миелина..................................................................................................................
37Роль протеасомы в развитии РС и EAE .......................................................................................... 40Современные подходы к терапии рассеянного склероза .............................................................. 42РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ........................................................................................................... 46Исследование роли модификации МВР убиквитином в процессе деградации протеосомой........ 46Внутриклеточная деградация MBP протеасомой в клетках млекопитающих ............................ 46Протеолиз MBP 26S протеасомой in vitro.......................................................................................
52Изучение влияния заряда МВР на эффективность убиквитин-независимого протеолиза ......... 54Анализ физиологической значимости деградации МВР иммунопротеасомой ............................... 59Изучение баланса протеасома-иммунопротеасома в ЦНС при развитии ЕАЕ. .......................... 59Локализация иммуносубъединиц иммунопротеасомы в структурах головного мозга наклеточном уровне ..............................................................................................................................
62Сравнение спектров деградации MBP конститутивной протеасомой и иммунопротеасомой .. 63Исследование образования пептида MBP83-90 под действием иммунопротеасомысубъединичного состава β1ihighβ5ilow ................................................................................................ 68Свидетельство презентации пептида MBP83-90 на MHC I и анализ цитотоксического действияMBP83-90-специфических T-клеток на олигодендроциты. ............................................................. 69Подходы к направленному подавлению гидролиза МВР протеасомой для терапии ЕАЕ ............
72Использование малых интерферирующих РНК ............................................................................. 72Использование ингибиторов протеасомы ....................................................................................... 73МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. .................................................................................................................... 79Химические реактивы и сопутствующие материалы. ....................................................................... 79Растворы.................................................................................................................................................
81Работа с белками ................................................................................................................................... 82Денатурирующий электрофорез в полиакриламидном геле. ........................................................ 823Окрашивание ПААГ Кумасси синим R-250 с усилением контраста солью меди ...................... 83Иммуноблоттинг ............................................................................................................................... 83Электрофорез в неденатурирующих условиях ...............................................................................
83Иммунопреципитация ....................................................................................................................... 84Работа с эукариотическими клетками. ................................................................................................ 84Методы работы с эукариотическими клетками линии HEK и HeLa ............................................ 84Получение культуры зрелых олигодендроцитов ...........................................................................
85Получение активированных CD8+ Т-клеток. ................................................................................. 86Определение цитотоксической активности CD8+ T-клеток. ........................................................ 86Иммуноцитохимическое окрашивание культур олигодендроцитов ............................................ 87Индукция ЕАЕ у экспериментальных мышей .................................................................................... 87Иммуногистохимия ............................................................................................................................... 87Получение очищенного препарата протеасомы .................................................................................
88Фракционирование протеасомы ультрацентрифугированием.......................................................... 89Выделение, ацетилирование и деиминирование MBP ...................................................................... 89Убиквитинилирование in vitro ............................................................................................................. 90Протеолиз белков in vitro .....................................................................................................................
90Определение кинетических параметров ингибирования протеасомы ............................................. 91Методы масс-спектрометрического анализа ...................................................................................... 92Тандемный хромато-масс-спектрометрический анализ ................................................................
92Масс-спектрометрический aнализ нативного белка (Top-down). ................................................. 93Масс-спектрометрия с мониторингом множественных реакций ................................................. 93Поверхностный плазмонный резонанс ............................................................................................... 94ЗАКЛЮЧЕНИЕ ......................................................................................................................................... 95ВЫВОДЫ ...................................................................................................................................................
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
