Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 5)

Рис. 10. Хроматограмма агримониина.

Рис.11. Спектры основных пиков.

Хроматограмма свидетеля представлена на рисунке 10.Здесь агримониин ви-ден, как главный пик с несколькими минорными компонентами. Время удержи-вания агримониина 27 минут, а его УФ-спектр (рис.11) поглощения имеет мак-симумы при 220 и 280 нм.

1

2

Определили фракции, содержащие очищенный танин (рис. 10) их упарили и высушили. Получили белое с желтоватым оттенком вещество – агримониин, идентификация которого была проведена ранее. Водный раствор агримониина, полученного путем препаративной колоночной хроматографии был использо-

Рис.12. Хроматограмма водного извлечения (1) и агримониина (2)

ван в качестве свидетеля и для выявления расположения пика агримониина на хроматограмме водного извлечения. Сначала провели хроматографирование водного раствора свидетеля. Затем хроматографировали водное извлечение. По

времени удерживания и УФ-спектру поглощения в сравнении с раствором сви-детеля на хроматограмме был идентифицирован агримониин (рис. 12). При изу-чении отдельных фракций танинов нами установлено, что олигомерные танины манжетки представляют собой соединения, близкие по строению с агримонии-ном. Они имеют разное время удерживания на хроматограмме, но у них одина- ковый УФ-спектр с максимами поглощения при 220 и 280 нм, как у агримони-ина.

Таблица4. Содержание свободных аминокислот в траве некоторых

видов Alchemilla vulgaris L.

! ! Содержание свободных аминокислот, в мг на 1мл

! -----------------------------------------------------------------------

! Аминокислота ! М.изящная м.балтийская м.городчатая

В результате этого исследования определено, что в водное извлечение из сы-рья переходит весь комплекс полифенолов: фенолкарбоновые кислоты, флаво-ноиды и олигомерные танины.

Изучение аминокислотного состава.

Изучение аминокислотного состава трёх видов рода манжетка: показало его идентичность (табл. 4). Из 20-ти обнаруженых аминокислот в водном извлече- нии преобладают пролин и оксилизин (0,45 мг/мл и 0,13 мг/мл соответствен-но). Обладая высокой биодоступностью, они обуславливают, наряду с другими БАВ (полифенолы, макро- и микроэлементы) травы манжетки широту спектра фармакологической активности её препаратов и могут служить маркерами, на-ряду с другими, подлинности сырья и качества настоя. Этu и данные получен-

ные с помощью RAPD-анализа позволилu нам рекомендовать к медицинскому применению, для сбора траву всех изученных видов рода Alchemilla L., и рас-сматривать эти виды как производящие сырье – трава манжетки.

Фармакогностическое изучение травы манжетки.

Фармакогностическое изучение травы манжет позволило разработать крите-рии оценки подлинности и качества этого ценного сырья, а также разработать систему мероприятий по рациональному использованию природных ресурсов Alchemilla L.sp.Последняя включает описание производящих растений, позволя-ющее определять их в природе; и проводить выявление зарослей, пригодных для сбора сырья; даны рекомендации по условиям сбора, сушки и хранения сы-рья, а также режим эксплуатации зарослей.

Внешние признаки сырья приведены в таблице № 5: трава манжетки пред-ставляет собой смесь листьев и цветоносов с цветками и бутонами. Микроскопия травы манжетки позволила выявить особенности анатоми-ческого строения стебля, листа, черешка и чашелистиков (табл.6), опушение, строение клеток-идиобластов с друзами, одинаковые для всех изученных видов, которые могут служить диагностическими признаками подлинности сырья.

Качественный анализ сырья. На основании качественных фармакопейных ре-акций установлено, что водное извлечение травы манжетки (1:10) даёт поло-жительную цианидиновую пробу на флавоноиды с металлическим магнием или

Таблица № 5. Внешние признаки сырья манжетки обыкновенной

Таблица 6. Сравнительная характеристика микроскопических диагнос-

тических признаков травы манжетки отдельных видов

цинком и концентрированной. хлористоводородной кислотой (красное окраши-вание), с раствором хлорида окисного железа – чёрно-зелёное окрашивание –

полифенолы.

На бумажной хроматограмме ацетонового извлечения, в системах 1-БУВ 4:2:1 и П-15% уксусная кислота, детергент желтая кровяная соль проявляет большинство соединений полифенольного комплекса – самое яркое –агримо-

ниин.

На ВЭЖХроматограмме идентифицированы пики фенолкарбоновых кислот, флавоноидов, в частности- рутина (рис. 9); олиготанина–агримониина (рис.12).

Экспериментально подобранные нами требования к пробоподготовке для

RAPD-анализа позволяют проводить идентификацию цельного и высокой сте-пени измельчения,как свежего так и высушенного сырья, соответственно ха-рактеризующегося набором из шести-восьми фрагментов амплифицированной ДНК, причем, нижние две полосы, имеют длину менее 500 пар нуклеотидов, (определённую относительно маркёра _Hind-lll).

Числовые показатели для цельного и измельченного сырья, а также для по-рошка из него: сумма флавоноидов в пересчёте на рутин, влажность, зола об-щая, зола, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, пожел-тевшие и блёклые листья; черешки листьев и цветоносы длиннее 10 см, органи-ческая примесь, минеральная примесь, характеризующие качество сырья, определены нами экспериментально и установлены их нормы.

Количественное определение суммы флавоноидов в пересчете на рутин проведено по подобранным нами и адаптированным фармакопейным спектро-фотометрическим методикам. Ошибка метода составила 5,16%.” При изуче-нии вопросов стандартизации нами установлены нормы содержания основной группы БАВ.

Результаты валидации методик качественного и количественного анализа

Характеристики

Список файлов диссертации