Диссертация (1090339), страница 4

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 4)

Далее его упаривали до полного удаления растворителя с последующейсушкой до постоянной массы. Влажность составила 4,2%. Затем сухой остатоканализировали на содержание основных групп БАВ (далее этот остатокобозначается как Э-40%Et).212.1.1 Содержание антиоксидантов в различных извлечениях из соцветийбархатцев распростертыхСуммарное содержание антиоксидантов в спирто-водных извлеченияхопределяли на жидкостном хроматографе «Цвет Яуза-01-АА».

Как рекомендованов инструкции к прибору, в качестве стандарта используется кверцетин и/иликислота галловая [61,80].Содержаниесуммыантиоксидантоввисследуемыхизвлеченияхрассчитывали по значениям площадей пиков дифференциальных кривых.Данные о содержании антиоксидантов приведены в таблице 1.Таблица 1 – Количество антиоксидантов в извлечениях,полученных из соцветий бархатцев распростертыхОбъектисследованияИспользуемыеэкстрагентысоцветиябархатцевспирт этиловый95%спирт этиловый70%спирт этиловый40%водаСодержаниеСодержаниеантиоксидантов антиоксидантовПлощадь(в пересчете на (в пересчете напика (Sn)кверцетин,кислотумг/г)галловую, мг/г)457,980,654±0,0050,306±0,002763,741,266±0,0030,765±0,0041516,452,771±0,0021,894±0,0034168,790,323±0,0040,235±0,002Как видно из таблицы 1, максимальное количество антиоксидантовсодержит извлечение, полученное спиртом этиловым 40%. Эти данные явилисьоснованием для выбора в качестве оптимального экстрагента спирт этиловый40%.2.1.2 Определение фенолокислотКачественныйанализфенолкарбоновыхкислотосуществлялихроматографически с использованием в качестве проявителей паров аммиака,реактива Паули и железа хлорида (III) [10,114].22По флуоресценции, наблюдаемой в УФ-свете, и по окраске зон адсорбциипослеобработкихроматограммхромогеннымипроявителямиопределялианализируемые соединения [10].Результаты хроматографирования, а также используемые подвижные фазы(ПФ) приведены в таблице 2.Таблица 2 – Хроматографический анализ фенолокислот в Э-40%EtЗначениякоэффициентовподвижностиСО Э-40%EtОкраска зон адсорбцииУФ-свет дообработки0,870,89желтая0,810,82светлоголубая0,690,65голубая0,580,57голубая0,180,21желтая0,030,03светлоголубая0,700,68голубаяУФ-свет+ NH3РеактивПаули*FeCl3ПФ БУВ (4:1:5)желтосветлооранжеваязеленаяоранжеваясветлокоричневаясеро-зеленаяголубаяжелтозеленаязеленаякоричневаяжелтозеленаязеленаякоричневаяПФ н-бутанол – 2М аммиак (1:1)желтосветлооранжеваязеленаяоранжеваясветлокоричневаясеро-зеленаяголубаяПФ 2% кислота уксуснаяжелтозеленаязеленаякоричневаяИдентифицированоо-кумароваякофейнаяхлорогеноваянеохлорогеноваяо-кумароваякофейнаяхлорогеноваятемногалловаяголубаяПримечание: *реактив Паули – 0,3% раствор кислоты сульфаниловой в 8% кислотехлористоводородной с 5% раствором натрия нитрита.

Хроматограмму опрыскивают сначалаэтим раствором, затем дополнительно 20% раствором натрия карбоната.0,620,64Из данных хроматографического анализа следует, что в извлечениях изсоцветий бархатцев распростертых с использованием достоверных стандартныхобразцов(СО)установленоналичиекислот:о-кумаровой,кофейной,хлорогеновой, неохлорогеновой и галловой.2.1.3 ФлавоноидыКачественный анализ данной группы соединений осуществляли методомбумажной хроматографии (БХ) с использованием в качестве проявителей пароваммиака и 5% спиртового раствора алюминия хлорида. По флуоресценции в УФ-23свете и по окраске зон адсорбции после обработки хроматограмм проявителямиопределяли анализируемые соединения (таблица 3) [8,9,114].Таблица 3 – Хроматографический анализ Э-40%EtЗначения коэффициентовОкраска зон адсорбцииподвижности в ПФСистема15%УФ-свет до УФ-свет +УФ-свет +БУВ (4:1:5)Форесталя*CH3COOHобработкиNH3AlCl3(30:3:10)темножелто0,42 ± 0,01 0,17 ± 0,02желтаяжелтаязеленаятемножелто0,51 ± 0,02 0,68 ± 0,01 0,79 ± 0,03желтаяжелтаязеленаяярко0,59 ± 0,01 0,31 ± 0,01коричневаязеленаяжелтаяяркосветло0,76 ± 0,020,44 ± 0,02желтаяжелтаяжелтаяярко0,63 ± 0,01 0,34 ± 0,02желтаяжелтаяжелтаясветлосветло0,81 ± 0,03голубаяголубаяжелто0,92 ± 0,02желтаязеленаяПримечание: *система Форесталя: кислота уксусная – кислота хлористоводороднаяконцентрированная – вода очищенная (30:3:10).Данные сравнительного хроматографического анализа свидетельствуют охорошем разделении веществ Э-40%Et в подвижной фазе БУВ (4:1:5) и о наличиипримерно 6 соединений флавоноидной природы.2.1.4 ВЭЖХ фенольных соединений Э-40%EtКачественный анализ фенольных соединений Э-40%Et определяли методомВЭЖХ [74].Врезультатеиз10веществидентифицировано7соединенийполифенольной природы, которые представлены фенолкарбоновыми кислотами(таблица 4).24Таблица 4 – Полифенольный состав Э-40%EtВремя,мин3,1663,2933,8754,3195,0205,830Высотапика, mV178,24184,78116,0078,0035,1024,70Площадьпика, mV∙сек2431,553475,184878,982261,701125,67938,40Концентрация,%15,2321,7630,6014,207,066,007,2796,39624,693,918,44116,0422,855,49216,82365,09235,992379,255812,081,4811,6128,43Названиекислота о-кумароваятанинкислота галловаяЭГКГаллаткислота хлорогеноваякислота кофейнаякислотанеохлорогеноваянеидентифицированонеидентифицированонеидентифицированоТаким образом, впервые обнаружены дубильные вещества: танин, кислотагалловая, эпигаллокатехин галлат (ЭГКГаллат).Из данных таблицы 2 видно, что в Э-40%Et обнаружено 2 вещества,которыехарактеризуютсязначительнымиплощадямипиковивысокойинтенсивностью, но не идентифицированы.

Далее в своих исследованиях мыосуществили препаративное выделение индивидуальных соединений (глава 3).2.1.5 Дубильные веществаИзвестно, что дубильные вещества редко накапливаются в соцветиях иосновное место их локализации – корни, корневища, древесина, плоды, листья.Однако в соцветиях некоторых растений обнаружены танины, в том числе и вбархатцах, относящихся к семейству Asteraceae. В календуле лекарственной иромашке аптечной их количество варьирует в пределах 0,25 – 1,87% [81].Методами БХ и ВЭЖХ нами установлено наличие этих веществ в соцветияхбархатцев распростертых, причем среди них преобладают гидролизуемыедубильные вещества.Локализацию дубильных веществ в соцветиях определяли с помощьюкачественных реакций [37,47,90].

Анализу подвергали извлечения, полученные25экстракцией спиртом этиловым 40% обертков и цветков бархатцев. Результатыприведены в таблице 5.Таблица 5 – Качественные реакции на наличие дубильных веществв соцветиях бархатцев распростертыхОбертка соцветияРеактив1% раствор желатина в 10% растворенатрия хлорида1% раствор хинина сульфатараствор железо-аммонийных квасцовЦветки соцветияАналитический эффектпоявление белойбелый осадокмути в растворебелый аморфныйследы осадкаосадокчерно-синееотсутствуетокрашиваниеокрашиваниеТаким образом, по результатам качественного анализа, можно сделатьвывод, что дубильные вещества сосредоточены в основном в обертках соцветийбархатцев распростертых, причем среди них преобладают гидролизуемыедубильные вещества.Количественное определение суммы дубильных веществ проводили визвлечениях из оберток соцветий бархатцев, полученных экстракцией водойочищеннойиспиртомэтиловым40%,двумяспособами–перманганатометрическим и спектрофотометрическим [41,90,96].

Результатыпредставлены в таблицах 6, 7.Таблица 6 –Содержание дубильных веществ, найденное перманганатометрически,(в пересчете на танин) в обертках соцветий бархатцевИсследуемыйобъектВодноеизвлечение40%извлечениеОбъем титрантадо осаждения,V1, мл2,482,492,522,502,542,512,702,722,682,712,672,73Объем титрантапосле осаждения,V2, мл2,282,272,312,282,332,302,362,392,342,392,352,38(V0 = 1,6 мл, W = 8,1%)Содержаниедубильныхвеществ, %0,4480,4920,4690,4920,4710,4700,7650,7420,7640,7200,7230,787МетрологическиехарактеристикиXср = 0,47Sx = 0,007∆х = 0,02Xср ± ∆x = 0,47 ± 0,02ε = 3,7%Xср = 0,75Sx = 0,01∆х = 0,03Xср ± ∆x = 0,75 ± 0,03ε = 3,8%26Таблица 7 – Спектрофотометрическое определение содержания дубильныхвеществ (в пересчете на кислоту галловую) в обертках соцветий бархатцевИсследуемыйобъектВодноеизвлечение40%извлечениеБолееОптическаяплотностьраствора доосаждения,А10,2750,2810,2790,2730,2860,2780,2970,3070,3140,3210,2990,309высокоеОптическаяплотностьраствора послеосаждения,А20,2470,2520,2520,2450,2600,2500,2490,2560,2680,2730,2500,262содержаниеперманганатометрическимопределитьсуммуметодом,дубильныхспектрофотометрическийвСодержаниедубильныхвеществ, %0,1850,1910,1780,1840,1710,1850,3200,3370,3040,3060,3260,311Xср = 0,18Sx = 0,003∆х = 0,007Xср ± ∆x = 0,18 ± 0,007ε = 4,0%Xср = 0,32Sx = 0,005∆х = 0,01Xср ± ∆x = 0,32 ± 0,01ε = 4,2%дубильныхобъясняетсявеществ,большейМетрологическиехарактеристикивеществ,тем,чтоосаждаемыхстепенинайденноеонпозволяетжелатином,отражаетасодержаниегидролизуемых дубильных веществ, которые в данном сырье являютсядоминирующими.Темнеменее,обаметодаколичественногоанализасвидетельствуют о том, что спирт этиловый 40% является лучшим экстрагентомдубильных веществ, чем вода очищенная.2.1.6 Органические кислотыНебольшую порцию Э-40%Et растворяли в воде при нагревании на водянойбане в течение нескольких минут, после чего отфильтровали, а фильтратиспользовали для определения органических кислот.О наличии соединений данного класса судили по появлению красногоокрашивания с индикатором – метиловым красным [37].Качественное определение соединений данного класса осуществлялиметодомтонкослойнойхроматографии(ТСХ,пластинки«Сорбфил»)с27использованием СО.

Характеристики

Список файлов диссертации