Диссертация (1090339), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Для определенияготовили сериюрастворов патулетина различной концентрации. С этой целью точную навескувещества (0,025 г) переносили в мерную колбу вместимостью 100 мл в небольшомколичестве спирта этилового 95% и, растворяя при взбалтывании, доводилиобъем до метки (раствор А). Разные аликвоты раствора А переносили в мерныеколбы вместимостью 50 мл и доводили объем растворов до метки спиртомэтиловым 95%. Растворы использовали свежеприготовленными.
В качествераствора сравнения использовали спирт этиловый 95%. Измерения проводили наспектрофотометре «СФ-103».75УФ-спектр 0,000375% патулетина в спирте этиловом (рисунок 31) винтервале длин волн от 200 до 500 нм характеризуется двумя полосамипоглощения примерно одинаковой интенсивности с максимумами при 371 ± 2 нм(I полоса) и 258 нм (II полоса)Оптическая плотность, А1,210,80,60,40,20200250300350Длина волны, нм400450500Рисунок 31 – УФ-спектр поглощения 0,000375% раствора исследуемого веществав спирте этиловомУдельный показатель поглощения рассчитывали по формуле 7:A1%1см =A x W1 x W2Va x a x (100 - W),(7)где: A - оптическая плотность анализируемого раствора;W1 и W2 - объемы мерных колб для разведения анализируемого раствора, мл;Va - аликвота анализируемого раствора, мл;а - навеска патулетина, г;W - потеря в массе при высушивании, %.Результаты расчета удельного показателя приведены в таблице 23.76Таблица 23 – Значения удельного показателя поглощения исследуемого веществаКонцентрация,С, %Аликвота,Va0,0012500,0011250,0010000,0008750,0007500,0006250,0005000,0003750,0002500,0001252,502,252,001,751,501,251,000,750,500,25УдельныйОптическаяпоказательплотность,поглощения,А0,8610,7890,6940,6180,5290,4290,3480,2680,1820,087716,0729,0721,4734,2733,2713,5719,0742,9756,8723,5МетрологическиехарактеристикиXср = 729,0Sx = 4,2∆х = 10,9Xср±∆x = 729,0±10,9ε = 1,5%Значение удельного показателя составляет 729,0 ± 10,9.Удельный показатель поглощения с добавлением алюминия хлорида.Разные аликвоты раствора А помещали в мерные колбы вместимостью 50 мл,добавляли 1 мл 5% раствора алюминия хлорида и 2-3 капли кислоты уксуснойледяной.
Доводили объем растворов до метки спиртом этиловым. В качествераствора сравнения использовали раствор А без добавления алюминия хлорида.Измерения проводили на спектрофотометре «СФ-103». В спектрах поглощениярастворовсалюминияхлоридомнаблюдаетсябатохромныйсдвигдлинноволновой полосы поглощения, поэтому расчет удельного показателяпроводили по значению оптической плотности при длине волны 435 ± 3 нм(рисунок 32).77Оптическая плотность, А1,81,61,41,210,80,60,40,20200250300350Длина волны, нм400450500Рисунок 32 – УФ-спектр поглощения исследуемого вещества с добавлениемалюминия хлоридаУдельныйпоказательпоглощениярассчитывалипоформуле7,приведенной выше.Результаты определения удельного показателя поглощения патулетина сдобавлением алюминия хлорида приведены в таблице 24.Таблица 24 – Значения удельного показателя поглощения исследуемого веществав присутствии алюминия хлоридаКонцентрация,С, %Аликвота,VaОптическаяплотность,АУдельныйпоказательпоглощения,Метрологическиехарактеристики0,0012502,500,831691,10,0011252,250,764705,90,0010002,000,652677,8Xср = 679,90,0008751,750,573680,7Sx = 5,80,0007501,500,488676,4∆х = 15,00,0006251,250,398661,9Xср±∆x = 679,9 ± 15,00,0005001,000,311646,5ε = 2,2%0,0003750,750,255706,90,0002500,500,161669,40,0001250,250,082681,9Значение удельного показателя для исследуемого вещества в присутствииалюминия хлорида составляет 679,9 ± 15,0.Посторонние примеси.
Содержание посторонних примесей определялиметодом ТСХ и БХ в ПФ: н-бутанол – кислота уксусная – вода очищенная (4:1:2),7815% кислота уксусная и система Форесталя (30:3:10). На хроматограммах послепроявления хромогенными реагентами (5% спиртовой раствор AlCl3, парыаммиака и 5% водный раствор Na2CO3) наблюдается только одно пятно желтогоцвета (таблица 25).Таблица 25– Коэффициенты подвижности исследуемого веществаПодвижные фазыИсследуемоевещество15% CH3COOHпатулетин0,09система Форесталя30:3:100,56БУВ 4:1:20,67Потеря в массе при высушивании.
Устанавливали разность в массе до ипосле высушивания по формуле 8:X=m2 - m3x 100%m2 - m1(8)Вещество высушивали до постоянной массы (третье взвешивание) всушильном шкафу при 100°С. Результаты определения данного показателяпредставлены в таблицах 26, 27.Таблица 26 – Потеря в массе при высушивании исследуемого веществаМасса бюкса,доведенногодопостоянноймассы, гМасса бюкса сисследуемымвеществом довысушивания, гm1m214,37614,06312,84013,99512,84213,38415,39015,08513,85315,03113,86914,400Масса бюкса с исследуемым веществомпосле высушивания, гпервоевзвешиваниевтороевзвешиваниетретьевзвешиваниеm315,36115,05313,82215,00313,83414,36715,35415,04913,81714,99213,83114,363Потеря вмассе привысушивании,%X15,35215,04813,81514,98913,82914,3613,73,63,84,13,93,879Таблица 27 – Метрологические характеристики по показателю«Потеря в массе при высушивании»Потеря в массе при высушивании, % Метрологические характеристики3,7Xср = 3,83,6Sx = 0,073,8∆х = 0,184,1Xср ± ∆x = 3,8 ± 0,183,9ε = 4,73%3,8В результате испытания значение показателя составило 3,8 ± 0,18%.Количественное содержание патулетина в исследуемой субстанции.Данный показатель определяли методом ВЭЖХ (рисунок 33).
Измеренияпроводились на жидкостном хроматографе Ultimate 3000 (Dionex). КолонкаPhenomenex Luna C-18 150×4,60 мм, диаметр частиц 5 микрон. Температураколонки 30°С. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора при длиневолны 254 нм. Градиентный режим: от 5% ацетонитрила до 60% за 40 минут. Вкачестве второго компонента ПФ использовался 2% раствор кислоты муравьиной.Патул етинСкорость потока составил 1 мл/мин.mV700600500400300200100200ch124681012141618202224262830минРисунок 33 – ВЭЖХ-хроматограмма 0,0196% раствора исследуемого вещества вспирте этиловом.80На ВЭЖХ-хроматограмме отмечается единственный доминирующий пик(98,03%), суммарное содержание других пиков не превышает 2%, значениевремени удерживания составляет 22,85 мин.4.4 Количественное определение суммы флавоноидов в Э-40%EtВ соответствии с требованиями ГФ XIII при использовании алюминияхлорида для количественного определения флавоноидов используется раствор смассовой долей 2-5%.
Количество добавляемого раствора алюминия хлорида длякомплексообразования обычно подбирается экспериментально и при этомучитывается время, за которое стабилизируется значение оптической плотности.Дляопределениявременистабилизациикомплексавзависимостиотконцентрации раствора алюминия хлорида были использованы концетрацииреагента 2%, 3%, 5%. Установлено, что максимальное значение оптическойплотности, равной 0,796, достигается при использовании раствора AlCl3 5%, исохраняется в течение 20 минут, что достаточно для осуществления анализа[32,86].Точную навеску (около 0,25 г) Э-40%Et растворяли в небольшом количествеспирта этилового 40% в мерной колбе вместимостью 50 мл, затем доводили дометки тем же растворителем.
Извлечение фильтровали через бумажный фильтр,первые 10 мл фильтрата отбрасывали. 2 мл фильтрата переносили в мерную колбувместимостью 25 мл, добавляли 3 мл спиртового раствора алюминия хлорида 5%,3-4 капли кислоты уксусной ледяной и доводили объем раствора в колбе до меткиспиртом этиловым 40%. Оптическую плотность данного раствора измеряли через20 минут на спектрофотометре «СФ-103» при длине волны 432 ± 3 нм.В качестве раствора сравнения использовали раствор, содержащий 2 млфильтрата, 3-4 капли кислоты уксусной ледяной и спирта этилового 40% дометки.Содержание суммы флавоноидов (%) в Э-40%Et в пересчете на патулетинвычисляли по формуле 9:81X=A x W1 x W2 x 100,679,9 x Va x a x (100 - W)(9)где: 679,9 - удельный показатель поглощения СО патулетина;A - значение оптической плотности анализируемого извлечения ;W1 и W2 - объемы мерных колб, для разведения анализируемого извлечения , мл;Va - аликвота анализируемого извлечения , мл;а - навеска Э-40%Et, г;W - потеря в массе при высушивании, %.Результаты количественного определения суммы флавоноидов в Э-40%Et впересчете на патулетин представлены в таблице 28.Таблица 28 – Содержание суммы флавоноидов в Э-40%Et в пересчете напатулетинНавескаОптическаяСуммаМетрологическиеЭ-40%Et, гплотность, А флавоноидов, %характеристики0,25120,7893,01Xср = 2,980,25080,7642,92Sx = 0,020,25060,7562,89∆x = 0,060,25100,7782,97Xср ± ∆x = 2,98 ± 0,060,25140,7963,04ε = 2,14%0,25140,7923,02Таким образом, при использовании разработанной нами методики,содержание суммы флавоноидов в Э-40%Et составило 2,98 ± 0,06%.4.4.1 Валидация методики количественного определения суммы флавоноидовВалидацию методики количественного определения суммы флавоноидов вЭ-40%Et проводили по следующим показателям: специфичность, линейность,правильность, прецизионность [30,32].СпецифичностьНа основании экспериментальных данных при спектрофотометрическомопределениифлавоноидовнамибылаиспользованареакциякомплексообразования с алюминия хлоридом в среде спирта этилового 40%.Нами исследованы спектры поглощения раствора Э-40%Et с алюминия хлоридом.82Установлено, что максимум поглощения находится при 432 ± 3 нм и совпадает смаксимумом поглощения комплекса патулетина с алюминия хлоридом (рисунок34).Оптическая плотность, А0,90,80,70,60,510,420,30,20,10360380400420440460480500Длина волны, нмРисунок 34 – УФ-спектры поглощения комплекса Э-40%Et (1) и комплекса СОпатулетина с 5% спиртовым раствором алюминия хлорида (2)Таким образом, данная методика определения количественного содержаниясуммы флавоноидов специфична.ЛинейностьДанный показатель определяли по результатам испытаний, которые впределах аналитической методики пропорциональны концентрации исследуемоговещества в образце.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
