Диссертация (1090339), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Нерастворим вводе.Хорошо растворим в кислотеуксусной. Медленно растворимв воде и спирте этиловом.Растворим в воде и спиртеэтиловом. Трудно растворим вдиэтиловом эфире.Растворим в воде, нерастворимв спирте этиловом.Растворим в спирте этиловом(40-95%), ацетоне, хлороформе.Нерастворим в гексане, воде.БУВ (4:1:5)15% кислотауксусная0,66±0,020,1±0,010,64±0,030,59±0,020,12±0,010,14±0,020,78±0,040,04±0,010,79±0,020,49±0,020,43±0,010,2±0,020,67±0,030,09±0,01Двумерная хроматография в ПФ:БУВ (4:1:5),15% кислота уксуснаяОкраска зон адсорбции до и послепроявленияВ УФ-свете – пятно желтого цвета. Послеобработки 5% спиртовым раствором AlCl3:в видимом свете – пятно желтого цвета; вУФ-свете – пятно ярко-желтого цвета.В УФ-свете – два пятна желтого цвета,которые при обработке 5% спиртовымраствором AlCl3: в видимом свете – пятнажелтого цвета; в УФ-свете – пятна яркожелтого цвета.В УФ-свете – пятно желтого цвета.
Послеобработки 5% спиртовым раствором AlCl3:в видимом свете – пятно желтого цвета; вУФ-свете – пятно желто-зеленого цвета.В УФ-свете – пятно голубого цвета, а послеобработки реактивом Паули приобретаеткоричневый цвет.В УФ-свете – пятно желтого цвета. Послеобработки 5% спиртовым раствором AlCl3:в видимом свете – пятно желтого цвета; вУФ-свете – пятно ярко-желтого цвета.В УФ-свете – пятно желтого цвета. Послеобработки 5% спиртовым раствором AlCl3:в видимом свете – пятно желтого цвета; вУФ-свете – пятно ярко-желтого цвета.46II) ТемножелтыйосадокТемператураплавленияЗначения коэффициентовподвижности473.2 Идентификация выделенных веществВ условиях антоцианидиновой реакции вещества I, III, V и VI приобретаюткрасное окрашивание, что свидетельствует об их принадлежности к флавонолам,а на основании реакции Брианта исследуемые вещества I, III и VI отнесены кагликонам, вещество V является гликозидом [8,9].Идентификация анализируемых соединений осуществлена по совокупностиданных хроматографического анализа, температур плавления, а также УФ-, ИК-,ЯМР-1Н-спектроскопии.Вещество II, выделенное из фракции 2, состоит из двух веществфлавоноидной природы, но из-за малого количества исходной суммы их неудалось разделить и идентифицировать.Анализ УФ-спектров поглощения выделенных веществ (рисунок 11)показал, что вещества I, III, V и VI следует отнести к флавонолам, так как онихарактеризуются двумя полосами поглощения в области длин волн 250-270 нм (IIполоса) и 350-390 нм (I полоса) [8].Оптическая плотность, А1,41,2110,820,630,440,20200-0,2250300350400450500Длина волны, нмРисунок 11 – УФ-спектры выделенных веществ: 1 – вещество VI, 2 – вещество I,3 – вещество V, 4 – вещество IIIКак видно из рисунка 11, вещество I характеризуется двумя максимумамиполос поглощения при 258, 372 нм; вещество III – 255, 374 нм; вещество V – 258,368 нм; вещество VI – 259, 372 нм.
УФ-спектр вещества IV характеризуется тремямаксимумами полос поглощения при длинах волн 215, 290 и 315 нм (рисунок 12).48Оптическая плотность, А10,80,60,40,20200250300-0,2350400450500Длина волны, нмРисунок 12 – УФ-спектр вещества IVПредварительный анализ структур соединений I, III, V и VI проводилиметодомУФ-спектроскопиисдобавлениемионизирующихикомплексообразующих добавок [8,89]. Результаты приведены в таблице 16.Таблица 16 – Максимумы поглощения выделенных веществ в спирте этиловом вприсутствии ионизирующих и комплексообразующих добавокИонизирующие и комплексообразующие добавкиВеществоC2H5OHICH3COONaIIλmaxICH3COONa + H3BO3IIIAlCl3IIIIIλmax∆λλmax∆λλmax∆λλmax∆λλmax∆λλmax∆λ372 258 396+24275+17392+20267+9437+65276+18III374255395+21271+16394+20272+17460+86270+15V368258377+9260+2382+14267+9466+98277+19VI372259394+22275+16390+18268+9435+63280+21IДанные таблицы свидетельствуют, что значительный батохромный сдвиг Iи II полос поглощения при добавлении алюминия хлорида указывает на наличиесвободных гидроксигрупп в положениях С-3 и С-5 у всех соединений.Добавление свежеплавленного натрия ацетата приводит к батохромному сдвигу Iполосы поглощения, что указывает на свободную гидроксигруппу в положении С7 у веществ I, III и VI, а добавление кислоты борной вызывает батохромный сдвигдлинноволновой полосы, что говорит о наличии орто-дигидроксигруппировки вбоковом фенильном радикале.
По отсутствию батохромного сдвига I и II полос49поглощения при добавлении натрия ацетата, можно говорить о гликозидномхарактере вещества V в положении С-7.ДляопределенияфункциональныхгруппизмерялиИК-спектры(таблица 17).Таблица 17 – Спектральные характеристики выделенных соединенийВеществаIIIIIVVI-OH3282332331763277C=O1658166116641655ИК-спектр, υmax, см-1Ароматическое ядро1619; 1554; 15281619; 1602; 15811613; 15751619; 1549; 1521C-O131513061285; 11281321Так как молекулы флавоноидов наряду с межмолекулярными водороднымисвязями образуют внутримолекулярные водородные связи, то валентныеколебания гидроксигрупп значительно смещены в сторону низких частот.
Вобласти 3323-3176 см-1 проявляются валентные колебания гидроксигрупп вположениях С3 и С5. Для подобных флавонов карбонильная группа поглощает при1660 см-1. В области 1616-1521 см-1 проявляются полосы, принадлежащиеароматическим связям С=С. Валентные колебания связи С-О проявляются вобласти около 1300 см-1 (рисунки 13, 14, 15, 16) [57,89].5050Рисунок 13– ИК-спектр вещества I5151Рисунок 14 – ИК-спектр вещества III5252Рисунок 15 – ИК-спектр вещества IV5353Рисунок 16 – ИК-спектр вещества VI54Предварительный хроматографический и спектральный анализ соединенийI и VI показал идентичность этих веществ, поэтому для их дополнительнойхарактеристики нами проведен анализ методом ВЭЖХ, где в качествестандартного образца, полученного нами, использовали 0,0196% растворпатулетина в спирте этиловом (условия проведения описаны в главе 4).
ВЭЖХхроматограммы исследуемых веществ I и VI представлены на рисунках 17, 18.Рисунок 17 – ВЭЖХ-хроматограмма вещества IРисунок 18 – ВЭЖХ-хроматограмма вещества VI55Время удерживания исследуемых веществ составляет 22,85 мин. Такимобразом, сопоставляя результаты проведенных нами исследований можно сделатьвывод, что вещества I и VI идентичны между собой.ЯМР-1Н-спектр вещества III включает сигналы пяти ароматическихпротонов при Н-2′, Н-6′, Н-5′, Н-8, Н-6, которым соответствуют численныезначения 7,67 (s), 7,54 (d), 6,89 (d), 6,41 (s), 6,18 (s) соответственно (таблица 18,рисунок 19) [18,109,136].Таблица 18 – ЯМР-1H-спектральные характеристики вещества IIIПоложение протонов вструктуре молекулыН-2′Н-6′Н-5′Н-8Н-6Вещество IIIDMSO-d6 400MHz7,67 (s, 1H)7,54 (d, J=8,4 Hz, 1H)6,89 (d, J=8,5 Hz, 1H)6,41 (s, 1H)6,18 (s, 1H)В ЯМР-1Н-спектре вещества V прописываются сигналы ароматическихпротонов – 6,89 (d, 1H, Н-5′), 6,93 (s, H-8), 7,55-7,71 (2Н, Н-2′,6′), фенольныхгидроксилов – 9,2-9,8 (s, 2H, OH-3′,4′), 12,5 (s, 1H, OH-5).
В области 3,47 м.д.проявляются сигналы трех протонов группы О-СН3. О наличии β-аномерногопротона Н-1′′ свидетельствует сигнал при 5,08 м.д. (таблица 19, рисунок 20) [132].Таблица 19 – ЯМР-1H-спектральные характеристики вещества VПоложение протонов вструктуре молекулыOH-5OH-3′,4′Н-2′Н-6′H-8Н-5′Н-1′′O-CH3Вещество VDMSO-d6 400MHz12,5 (s, 1H)9,2-9,8 (s, 2H)7,71 (s, 1H)7,55 (d, J=8,4 Hz, 1H)6,93 (s, 1H)6,89 (d, J=8,5 Hz, 1H)5,08 (s, 1H)3,47 (s, 3H)5656Рисунок 19 – ЯМР-1Н-спектр вещества III5757Рисунок 20 – ЯМР-1Н-спектр вещества V58При кислотном гидролизе вещества V из фракции 5 получены агликон исахарный остаток.
Гидролизат обрабатывали диэтиловым эфиром в делительнойворонке. Эфирное извлечение хроматографировали методом БХ с использованиемполученного нами СО патулетина. В качестве ПФ использовали 15% кислотууксусную и БУВ (4:1:5). Далее после нейтрализации гидролизата бариякарбонатом, его фильтровали, упаривали до небольшого остатка на водяной банеи исследовали хроматографически на наличие сахара с использованием СО.Обнаружено одно вещество, которое по величине коэффициента подвижности ипо окраске совпало с СО D-глюкозы. В качестве ПФ использовали БУВ (4:1:5).Хроматограммы проявляли анилинфталатным реактивом [8,28,101,112].По совокупности данных хроматографического анализа, определениятемператур плавления, а также УФ-, ИК-, ЯМР-1Н-спектроскопии, кислотногогидролиза можно сделать вывод о том, что вещества I и VI – 5,7,3´,4´тетрагидрокси-6-метоксифлавонол(патулетин),веществоIII–5,7,3´,4´-тетрагидроксифлавонол (кверцетин), вещество IV – кислота кофейная, веществоV – патулетин-7-О-β-D-глюкозид (патулитрин).59Выводы по главе 31.
Используя метод препаративной колоночной хроматографии, из Э-40%Etвыделены 4 вещества полифенольной природы.2. На основании хроматографического анализа, ИК-, УФ-, ЯМР-1Н-спектроскопии,а также кислотного гидролиза выделенные вещества были идентифицированыкак патулетин, патулитрин, кверцетин и кислота кофейная.60Глава 4 Получение стандартного образца патулетина из соцветий бархатцевраспростертых (Tagetes patula L.)По данным Всемирной организации здравоохранения во всем мире оборотстандартных образцов, выпускаемых различными организациями и специальносозданными центрами, составляет примерно 3700 экземпляров. Только вРоссийской Федерации зарегистрировано около 170 стандартных образцовотечественных производителей.
К сожалению, в настоящее время большинствоэтих образцов не производится в достаточных количествах или они недоступнывообще. Кроме того, необходимо учитывать тот факт, что производство истандартизация образцов – это трудоемкий, дорогостоящий и рутинный процесс[40].В настоящей главе излагается материал по разработанной нами технологииполучения стандарта патулетина. Методика имеет свои положительные стороны,поскольку выделение патулетина из соцветий бархатцев не занимает многовремени и коммерчески выгодно, так как данное растительное сырье ширококультивируется повсеместно и не требует особых условий выращивания.4.1 Выделение патулетина из соцветий бархатцев распростертыхИзмельченные соцветия бархатцев распростертых сорта «Carmen» (100 г)исчерпывающе экстрагировали в аппарате Сокслета гексаном (растворитель недолжен далее окрашиваться). После чего сырье обрабатывали хлороформом.Растворитель из хлороформного извлечения частично удаляли.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
