Диссертация (Антибластомная активность и безопасность 4-алкил-замещенного производного аминохромена), страница 9

Полученные дозы, позволили рассчитать показатели ЛД50 и ЛД10 при помощи пробит-анализа методом Finney.При внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении АХ-554 в видефармацевтической субстанции была зарегистрирована гибель животных.Данные приведены в таблицах 3.2 и 3.3.Таблица 3.2– Смертность в группах самцов и самок мышей при внутрижелудочном введении вещества АХ-554 в виде фармацевтической субстанции№группыДозаNмг/кгГибельn%№группыДозаNСамкиn%Самцы1(конт-мг/кгГибель60002640000036500000роль)1 (кон-600026400000365000116,7троль)Не отмечали экспериментальной летальности в группе самцов и самокмышей, которым вводили соединение АХ-554 в дозе 4000 мг/кг внутрижелудочно, а при том же пути введения в дозе 5000 мг/кг не регистрировали экс51периментальной летальности у самок, тогда как у самцов на 2сутки послевведения вещества регистрировали гибель 1 подопытной мыши (табл.3.2).Таблица 3.3– Смертность в группах самцов и самок мышей при внутрибрюшинном введении вещества АХ-554№ группыДозаNмг/кгГибельn%№ группыДозаNСамкиn%Самцы4(конт-мг/кгГибель46000роль)(конт-6000роль)56500005650000661000116,7661000233,3762000466,7762000466,7Не отмечали экспериментальной летальности в группе самцов и самокмышей, которым вводили соединение АХ-554 в дозе 500 мг/кг внутрибрюшинно, а при том же пути введения в дозе 1000 мг/кг на 2-3сутки после введения вещества регистрировали гибель подопытных мышей, при введении вдозе 2000 мг/кг отмечали гибель 66,7% животных у самцов и самок преимущественно на 1-2 сутки после введения (табл.3.3).На основании полученных данных были определены и рассчитаныинтегральные токсикологические показатели ЛД50, ЛД10, ЛД84 и ЛД100(табл.3.4).В результате проведения вычислений, показатель ЛД504-алкилзамещенного соединения аминохромена АХ-554 был равен 1567,5±34,6 мг/кг(самцы мышей) и 1694,0±28,6 мг/кг (самки мышей) при парентеральном(внутрибрюшинном) введении.

При внутрижелудочном введении показатель52ЛД50соединения АХ-554 в виде фармацевтической субстанции былболее 5000мг/кг для грызунов обоего пола.Таблица 3.4– Параметры острой токсичности самцов и самок мышей привведении АХ-554 в виде фармацевтической субстанцииСамцыСамкиПараметрыВнутри-Внутрибрю-Внутрижелу-Внутрибрю-острой ток-желудоч-шинноедочное введе-шинноесичностиное введе-введениениевведениениеЛД100, мг/кг-2839,9-2747,5ЛД84, мг/кг-2415,7-2396,4ЛД16, мг/кг-719,3-991,6ЛД10, мг/кг-480,3-793,8ЛД50, мг/кг>50001567,5±34,6>50001694,0±28,6(M±m)Поскольку в соответствие с требованиями регулирующего органа припроведении доклинических исследований оригинальных лекарственныхсредств требуется исследование острой токсичности на двух и более видахлабораторных животных, острую токсичность производного аминохроменаАХ-554 в виде фармацевтической субстанции изучили также в опытах набеспородных белых крысах при внутрижелудочном и внутрибрюшинном путях введения.В группах самцов и самок крыс, которым фармацевтическая субстанцию АХ-554 вводили внутрижелудочно в дозе 5000 мг/кг, гибели подопытных животных не наблюдали (табл.3.5).В группах самцов и самок крыс, которым вещество АХ-554 вводили внутрибрюшинно в виде фармацевтическойсубстанции в дозе 500 мг/кг, гибели животных не наблюдали; при введении вдозе 1000 мг/кг у самцов регистрировали гибель на 2-3 сутки после воздейст53вия, у самок − на 5-12 сутки, при введении в дозе 2000 мг/кг у самцов наблюдали гибель на 2-3 сутки после введения вещества, у самок – на 2-10 сутки(табл 3.6).Таблица 3.5– Смертность в группах самцов и самок крыс при внутрижелудочном введении АХ-554 в виде фармацевтической субстанции№Количе-групппы,полГибельствоДозаживот-мг/кгных вКоли-№групп-%вчество группегруппе1♀пы,полКоли-Гибельчество Дозаживот- мг/кг Колиных в%вчество группегруппе1♂(кон-6000троль)(кон-60006500000троль)2♀65000002♂Таблица 3.6– Смертность в группах самцов и самок крыс при внутрибрюшинном введении вещества АХ-554Количе№ груп- ство жипы, пол вотных вДозамг/кг Количествогруппе3♀ (кон-ГибельКоличе-% в № груп- ство жигруп- пы, пол вотных в0004♀6500005♀6100056♀620006троль)3♂ (кон-Гибельмг/кг Количествогруппепе6Доза%вгруппе60004♂65000083,35♂610003501006♂62000583,3троль)На основании полученных данных были определены и рассчитаны интегральные токсикологические показатели ЛД50, ЛД10, ЛД84 и ЛД100 при помощи пробит-анализа (метод Finney, программное обеспечение Biostat 2009)(табл.3.7).54Таблица 3.7–Интегральные показатели острой токсичности самцов и самоккрыс при введении вещества АХ-554 в виде фармацевтической субстанцииПараметрыСамцыСамкиВнутриже-Внутрибрю-Внутриже-Внутрибрю-лудочноешинное вве-лудочноешинное введе-введениедениевведениениеЛД100, мг/кг-2266,7-1615,5ЛД84, мг/кг-1918,7-1360,6ЛД16, мг/кг-626,5-340,9ЛД10, мг/кг-330,4-197,3ЛД50, мг/кг>50001222,6±28,4>5000850,8±29,4ипробит-анализаострой токсичности(M±m)СогласнорезультатамэкспериментаданнымЛД50соединения аминохромена АХ-554 в виде фармацевтической субстанциидля самцов и самок крыс при внутрижелудочном введении составляет более5000 мг/кг; при внутрибрюшинном введении для самцов показатель составляет 1222,6±28,4 мг/кг; для самок – 850,8±29,4 мг/кг.При внутрижелудочном введении субстанции АХ-554 самкам и самцаммышей в дозах 4000 мг/кг и 5000 мг/кг наблюдалось статистически значимоеотставание в приросте массы тела относительно контрольной группы практически во все сроки наблюдения (табл.3.8).В таблицах 3.9 и 3.10 показанысредние значения прироста массы тела мышей самцов и самок, выраженногов процентах от массы тела в первый день эксперимента при внутрибрюшинном введении.

У самок, которым ФС вводили в дозах 500 мг/кг, 1000 мг/кг и2000 мг/кг наблюдалось значительное снижение прироста массы тела в течение всего периода наблюдения. У самцов, которым ФС вводили в дозах 500мг/кг и 1000 мг/кг, также наблюдали снижение прироста массы тела в течение всего периода наблюдения. При введении АХ-554 в дозе 2000 мг/кг наблюдалось55Таблица 3.8 – Прирост массы тела в группах самок и самцов мышей при внутрижелудочном введении ФС АХ-554 (% к1-ому дню) (n=6)ДеньнаблюденияСамкиКонтрольСамцыАХ-554,АХ-554,4000 мг/кг5000 мг/кгКонтрольАХ-554,АХ-554,4000 мг/кг5000 мг/кг12345671100±0100±0100±0100±0100±0100±02102,4±1,1996,9±2,1*94,1±0,58*105,2±1,19100,2±0,55*91,4±2,5*(n=5)3101,9±296,3±2,4*97,5±0,4*109,7±299,3±1,1*92±2,8*(n=5)4106,3±2,4597,5±2,5*94,3±0,8*112,3±2,498,9±1,4*92,4±4,2*(n=5)5109,7±3,597,9±2,5*96,9±1,2*119,1±3,598,9±1,7*95,8±5,5*(n=5)6112,7±3,3100,7±2,4*100,7±1,2*123,4±3,398±2, 7*98±6,7*(n=5)7115,8±3,3106,2±2*104,9±1,5*124,4±3,397,1±3,6*101,2±6,9*(n=5)8119,3±3,8108,6±1,9*108,6±2,1*124,2±3,896,4±4, 3*105±6,7*(n=5)9122,2±4,3111,7±2,2*111,4±2,4*125±4,395,9±4,9*111,1±5,5(n=5)10122,2±4,2114,4±2,1*114±2,4126,4±4,295,8±5,1*114,8±4,9(n=5)11125,9±4116,9±2,1*115,7±2,3*128,7±496,2±5,2*115,8±4,1*(n=5)12128,4±3,6118,1±2*116,1±2,0*130,1±3,696,8±5,3*115,8±4,1*(n=5)123456713131,3±3,3121,1±2,2*121,3±2,3132,2±3,397,6±5,5*118,2±2,9*(n=5)14133,9±3,5122,9±1,9*122,3±2,5*126,9±3,597,9±5,6*119±2,1(n=5)Примечания: *- различия достоверны относительно контрольной группы при р<0,05 (ANOVA)57Таблица 3.9 – Прирост массы тела в группах самок мышей при внутрибрюшинном введении ФС АХ 554 (% к 1-омудню) (n=6)День наблюденияКонтрольАХ554,АХ554,АХ554,500 мг/кг,1000 г/кг,2000 мг/кг,1100±0100±0100±0100±02103,1±0,996,9±0,6*90,6±1,7*89,2±0,3*(n=3)3105,1±1,497,5±0,6*99,2±1,7*87,1±2,0*(n=3)4108,1±1,098,3±0,7*97,7±2,6*(n=5)87,35±4,1*(n=2)5110,1±1,1101,0±0,8*103,2±2,4*(n=5)86,65±5,9*(n=2)6114,2±1,5103,1±0,8*100,9±2,5*(n=5)87,25±9,3*(n=2)7122±2,2104,4±0,7*106,1±3,2*(n=5)89,7±9,3*(n=2)8123,5±2,5105,9±0,67*109,5±3*(n=5)91,05±11,3*(n=2)9126,7±2,7107±0,45*114,4±2,4*(n=5)93,65±11,2*(n=2)10129,2±3,2110,2±0,8*118,2±1,9*(n=5)93,8±10,4*(n=2)11131,5±3,4112,7±1,1*120,9±1*(n=5)95,1±13,6*(n=2)12134,5±3,8114,8±0,9*122,5±0,6*(n=5)96,95±16,9*(n=2)13138,9±4,7117,2±1,3*124,9±1,3*(n=5)97,3±16,5*(n=2)14141,9±4,4119,4±1,1*124,7±2,6*(n=5)100,1±19,5*(n=2)Примечания: *- различия достоверны относительно контрольной группы при р<0,05 (ANOVA)58Таблица 3.10 – Прирост массы тела в группах самцов мышей при внутрибрюшинном введении ФС АХ-554 (% к 1-омудню) (n=6)День наблюденияКонтрольАХ-554,500 мг/кгАХ-554,1000 мг/кгАХ-554,2000 мг/кг123451100±0100±0100±0100±0299,3±0,188,1±1,2*86±0,9*94,2±0,8*(n=2)399,6±0,285,9±1,2*81,9±1*(n=4)93,1±2,5*(n=2)4101,2±0,390,7±1,2*80,3±1,2*(n=4)92,6±3,5*(n=2)5102,2±0,492,4±3,1*80±1,6*(n=4)93,6±4,3*(n=2)6102,5±0,493,2±3,2*80,2±1,5*(n=4)94,9±3,2*(n=2)7103,9±0,594,6±3,1*80,7±1,5*(n=4)94,9±5,5*(n=2)8105,5±0,797,1±3,3*82,7±1,9*(n=4)94,9±3,6(n=2)9105,8±0,698,3±3,5*83,9±1,9*(n=4)98,7±6,8(n=2)10110,4±3,299,7±3,6*85,6±2*(n=4)99,2±6,9(n=2)11111,3±3,2101±3,1*86,7±2,3*(n=4)103,3±7,5(n=2)12113,6±3,1101,9±3,3*88,9±3,1*(n=4)108,6±10,3(n=2)13116,4±3,4102,2±3,8*91,1±3,3*(n=4)110,0±9,8(n=2)14118,7±3,7102,2±3,7*92,9±2,8*(n=4)112,7 ±8,8(n=2)Примечания: *- различия достоверны относительно контрольной группы при р<0,05 (ANOVA)59Таблица 3.11 – Прирост массы тела в группах самок и самцов крыс при внутрижелудочном введении ФС АХ-554 (% к1-ому дню) (n=6)СамкиДеньСамцынаблюденияКонтрольАХ-554,1000 мг/кгКонтрольАХ-554,1000 мг/кг1100±0100±0100±0100±02103,2±0,697,5±1,5*103±0,694,9±2,2*3103±0,398,1±1,5*104,7±0,694,1±2,1*4103,8±0,3100±1,3*105,8±1,094,3±2,2*5104,3±0,399,7±0,9*107,3±1,494,5±2,4*6104,9±0,7100,2±0,5*109,8±1,693,9±2,5*7106,6±0,6102,2±0,8*111,7±1,793,4±2,6*8107,3±0,7103±0,6*113,1±1,993,2±2,6*9107,9±0,5105,2±0,4*114±2,193,1±2,8*10108±0,9106,4±0,5115,4±2,193,3±3,1*11108,6±0,7106,3±0,5*116,6±2,293,4±3,112110,2±0,4106,6±0,7*117,8±2,293,8±3,2*13110,2±0,4109,3±0,8119,4±2,294,8±3,3*14111,2±0,5111,4±0,8120,8±2,395,5±3,5*Примечания: *- различия достоверны относительно контрольной группы при р<0,05 (ANOVA)60Таблица 3.12 – Прирост массы тела в группах самок крыс при внутрибрюшинном введении ФС АХ-554 (% к 1-ому дню)(n=6)День наблюденияКонтрольАХ-554,500 мг/кгАХ-554,1000 мг/кгАХ-554,2000 мг/кг1100±0100±0100±0100±0298,4±0,697,2±0,297,4±0,9100,3±1 (n=5)398,4±0,895,2±0,3*93,2±0,7*99,1±1*4102,3±0,794,5±0,2*89,2±0,8*95,9±1*5104,8±1,894,2±0,18*87,7±1*(n=5)91,6±1,4*6105,1±194,5±0,17*84,1±1,2*87,5±2,6*7106,7±1,695,5±0,2*81,2±2,0*87,4±4,6*(n=3)8109,7±1,597±0,1*81,7±2,7*90±6,9*(n=2)9113,5±1,798±0,1*83,9±3,5*(n=4)88,8±10,0*(n=2)10114,9±1,899,3±0,3*84,2±2,7*(n=3)87,5±12,1*(n=2)11116,2±1,8100±0,3*78,9(n=1)100(n=1)12117,2±1,7101±0,3*78,4(n=1)91,0(n=1)13118,8±1,6101,6±0,4*77,5(n=1)-14120,3±1,8102,6±0,3*77,9(n=1)-Примечания: *- различия достоверны относительно контрольной группы при р<0,05 (ANOVA)61Таблица 3.13 – Прирост массы тела в группах самцов крыс при внутрибрюшинном введении ФС АХ-554 (% к 1-омудню) (n=6)День наблюденияКонтрольАХ-554,500 мг/кгАХ-554,1000 мг/кгАХ-554,2000 мг/кг1100±0100±0100±0100±0295,4±1,396,5±1,693,1±0,3(n=3)96,5±1,1(n=4)3101,5±1,785,9±1,2*91,9±0,9*(n=3)92±2,5*(n=2)4103,2±1,795,6±3*89,7±1,6*(n=3)89,1±1,8*(n=2)5106±1,897,5±3*89,2±2*(n=3)89,3±0,7*(n=2)6110±2,699,7±3,2*89,1±2*(n=3)89,3±0,7*(n=2)7112,6±2,6100,7±3,4*88,8±2,3*(n=3)91,6±2,5*(n=2)8115,2±3101,6±3,7*88,5±2,8*(n=3)93,4±2,5*(n=2)9116,6±3102,7±3,9*88±3,2*(n=3)93,4±2,5*(n=2)10119,6±3,3103,6±4*87,9±3,5*(n=3)96,9±3,7*(n=2)11121,8±3,7104,1±4,2*87,8±4*(n=3)100,9±5*(n=2)12125,2±4,1104,2±4,7*89,2±2,9*(n=3)106,2±6,6*(n=2)13127,4±4,8106,3±4,8*89,3±3,1*(n=3)109,8±8(n=2)14128,2±4,5108,3±4,4*90,1±3,6*(n=3)112,3±7,8(n=2)Примечания: *- различия достоверны относительно контрольной группы при р<0,05 (ANOVA)62снижение прироста массы тела до 7 дня наблюдения, затем прибавка массытела у самцов существенно не отличалась от контроля.В таблице 3.11 показан прирост массы тела у крыс самок и самцов, выраженный в процентах от массы тела в первый день эксперимента при внутрижелудочном введении.