Диссертация (Антибластомная активность и безопасность 4-алкил-замещенного производного аминохромена), страница 13

Результаты исследования фагоцитарной активности нейтрофилов крови, представленные на рис. 5.17, свидетельствуют о том, что фармацевтическая субстанция АХ-554 при пероральнойсенсибилизации экспериментальных животных в течение 10 дней в дозах 225мг/кг и 550 мг/кг не влияет на фагоцитарную активность нейтрофилов крови.87Введение разрешающей дозы овальбумина после однократной внутримышечной сенсибилизации экспериментальным животным в дозе 100 мг/кг,усиливало фагоцитарную активность нейтрофилов крови.Таким образом, на модели системной и кожной анафилаксии лекарственное вещество из группы 4-алкил-замещенных производных аминохроменаАХ554 не оказало анафилактогенного действия.62,93*мкг восстановленного формазана706050403017,92019,5318,12100Исследуемая группаКонтрольАХ-554 225 мг/кгАХ-554 550 мг/кгОвальбумин 100 мг/кгПримечание: *- различия достоверны по сравнению с группой контроля прир<0,05 (U-критерий Манна-Уитни)Рисунок 5.17 – Показатель НСТ-теста в крови у самцов и самок морскихсвинок через 24 часа (12 суток) после сенсибилизации, мкг восстановленногоформазана (M±m, n=10 в каждой группе)На модели реакции гиперчувствительности немедленного (ГНТ) и замедленного типа (ГЗТ) при эпикутанном и конъюнктивальном нанесениивещества АХ-554 морским свинкам оно не оказало сенсибилизирующегодействия.

Также оно не оказало сенсибилизирующего действия на моделиГЗТ у мышей.88Определение количества эозинофилов, процента лизированных лейкоцитов и степени фагоцитарной активности нейтрофилов крови у морскихсвинок, сенсибилизированных 10-дневным внутрижелудочным введениемлекарственного средства АХ-554 (225 мг/кг и 550 мг/кг), показало отсутствиевлияния соединения на данные показатели.Суммируя полученные данные, можно заключить, что кандидат в лекарственное средство АХ-554 в терапевтических дозах не обладает аллергеннойактивностью.5.2 Исследование иммунотоксических свойств АХ-554Основная задача данного раздела нашего исследования состояла втом, чтобы в эксперименте на животных доказать или исключить возможность развития иммунотоксического действия, вызванного внутрижелудочным введением 5- и 10-кратных терапевтических доз 4-алкил-замещенногопроизводного2-амино-N-хромена АХ-554или его метаболитами.Иммунотоксические свойства АХ-554 в виде фармацевтической субстанцииоценивались при помощи следующих методов: предварительнаяоценка иммунотоксичности при однократном введении с помощью определения уровня гемагглютининов и гемолизинов в сыворотке крови; оценкаиммунотоксичности при курсовом введении, включавшая оценку влияния нагуморальное звено иммунитета с помощью определения уровня гемагглютининов и гемолизинов в сыворотке крови; оценку влияния АХ-554 на состояние клеточного иммунитета с помощью постановки реакции гиперчувствительности замедленного типа и оценку влияния на неспецифический иммунитет с помощью НСТ-теста.Проведенное исследование показало, что однократное внутрижелудочное введение соединения АХ-554 в 5-кратной СТДдозе688 мг/кг и высшейтерапевтической дозе 1376 мг/кг не влияет на антиген-индуцированное фор89мирование гемагглютининов (рис.

5.18)в сыворотке крови лабораторныхмышей.Однократное введение соединение АХ-554 в виде фармацевтическойсубстанции мышам не влияло также на антиген-индуцированное формирование гемолизинов у экспериментальных животных (рис. 5.18).Полученные результаты позволяют заключить, что однократное внутрижелудочное введение АХ-554 в дозах 688 мг/кг и 1376 мг/кг не оказываеттоксического действия в отношении гуморального звена иммунной системы.Влияние АХ-554 на гуморальное звено иммунитетапри однократном в/ж введении65log2T43210Количество гемагглютининовКонтрольАХ-554 688 мг/кгКоличество гемолизиновАХ-554 1376 мг/кгРисунок 5.18 – Количество гемагглютининов и гемолизинов в сывороткекрови мышей после однократного внутрижелудочного введения АХ-554(log2T, M±m, n=10 в каждой группе)Иммунотоксикологические эффекты АХ-554 в отношение гуморального звена иммунитета определены и при курсовом введении соединения.Результаты определения уровня гемагглютининов в сыворотке кровимышей, получавших фармацевтическую субстанцию АХ-554 один раз в сутки в течение 21 дня, представлены на рис.

5.19.90Курсовое введение вещества АХ-554 в дозах, эквивалентных 5- и 10кратной СТД, определенной на модели сингенной опухоли – карциномы легкого Lewis, не вызывало статистически значимых изменений уровня гемагглютининов в сыворотке экспериментальных животных, как не приводило кзначимым изменениям концентрации гемолизинов в биологической средеэкспериментальных мышей (рис. 5.19).Следовательно, курсовое введение исследуемого производного аминохромена не оказывает негативного влияния на гуморальный компонент иммунной системы интактных животных.Влияние АХ-554 на гуморальное звено иммунитетапри многократном в/ж введении876log2T543210Количество гемагглютининовКонтрольАХ-554 688 мг/кгКоличество гемолизиновАХ-554 1376 мг/кгРисунок 5.19 – Количество гемагглютининов и гемолизинов в сывороткекрови мышей после многократноговнутрижелудочного введения АХ-554(log2T, M±m, n=10 в каждой группе)Влияние внутрижелудочного введения субтоксических доз АХ-554 насостояние клеточного иммунитета изучили в реакция гиперчувствительностизамедленного типа.

Результаты исследования представлены в таблице 5.23.91Таблица 5.23– Индекс реакции гиперчувствительности замедленного типа умышей после внутрижелудочного введения АХ-554в течение 21 дня (%,M±m, n=10)ГруппаИндекс реакции, %Контроль51,01±1,63АХ-554(688 мг/кг)47,08±1,24АХ-554(1376 мг/кг)51,10±2,23Из таблицы 5.23 видно, что 21-дневное внутрижелудочное введениеАХ-554 мышам в дозах, в 5 и 10 раз превышающих среднюю терапевтическую дозу, определенную для мышей на сингенной опухолевой модели, невлияет на формирование реакции гиперчувствительности замедленного типау животных.

Полученные данные позволяют заключить, что вещество АХ554 в виде фармацевтической субстанции не оказывает токсического влиянияна клеточное звено иммунитета.Влияние на неспецифический иммунитет изучили при оценке НСТтеста. Результаты изучения фагоцитарной активности нейтрофилов крови,представленные в таблице 5.24, свидетельствуют о том, что АХ-554 при введении мышам в течение 21 дней в дозах 688 мг/кг (5 средне-терапевтическихдоз) и 1376 мг/кг (10 средне-терапевтических доз) не влияет на неспецифический иммунитет животных.Таким образом, однократное внутрижелудочное введение АХ-554мышам в дозах в 5 и 10 раз превышающих СТД для данного вида животныхне влияло на формирование гемагглютининов и гемолизинов у мышей.

Курсовое внутрижелудочное введение (в течение 21 дня) вещества мышам в техже также не влияло на синтез антител, не оказывало действия на реакцию гиперчувствительности замедленного типа и не изменяло фагоцитарной активности нейтрофилов, выделенных из крови.92Таблица 5.24– Показатель НСТ-теста после внутрижелудочного введенияАХ-554 в течение 21 дня (в мкг восстановленного формазана, M±m, n=10)ГруппаПоказатель НСТ-тестаКонтроль35,98±2,09АХ554(688 мг/кг)33,21±2,37АХ554(1376 мг/кг)39,86±2,10Полученные результаты позволяют заключить, что АХ-554 не оказывает иммунотоксического действия.93ГЛАВА 6.ИЗУЧЕНИЕ МУТАГЕННЫХ, КАНЦЕРОГЕННЫХ СВОЙСТВ АХ-554И ВЛИЯНИЯ ВЕЩЕСТВА НА РЕПРОДУКТИВНУЮ СФЕРУ6.1 Исследование мутагенных свойств 4-алкил-замещенногопроизводного аминохромена АХ-554Основной задачей настоящего раздела являлась экспериментальнаяоценка мутагенной безопасности АХ-554 в виде фармацевтической субстанции.

Выявление мутагенного действия соединения было осуществлено намив 2 этапа:1) Исследование мутагенности в тесте учета хромосомных аберраций вклетках костного мозга при однократном и курсовом внутрижелудочном введении субстанции АХ-554 мышам линии CBA×C57Вl/6;2) Исследование генотоксичности субстанции в тесте Эймса на штаммах Salmonella typhimurium.Результаты исследования мутагенного действия АХ-554 в тесте хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей представлены в таблице 6.25.Из таблицы 6.25 хорошо видно, что однократное внутрижелудочноевведение референтного противоопухолевого препарата циклофосфамида линейным мышам в дозе 20 мг/кг вызывало увеличение уровня хромосомныхаберраций до 18,6%, что соответствовало уровню статистической значимостипри сравнении с контрольной группой животных.

Это также не противоречитлитературным данным, характеризующим отрицательный цитогенетическийэффект препарата.Внутрижелудочное введение исследуемого соединения АХ-554 в видефармацевтической субстанции животным, как в однократном, так и в 5-тикратном режиме в 10-кратной СТД, определенной для данного вида животных, не увеличило долю аберрантных метафаз в клетках костного мозга мышей СВА×C57Вl/6. Полученные данные позволяют заключить, что АХ-554 не94оказывает цитогенетического действия в отношении делящихся клеток млекопитающих.Таблица 6.25 – Результаты оценки цитогенетической активности АХ-554 вклетках костного мозга мышей линии СВА×C57Вl/6Пол жи-ГруппавотныхКоличествоКоличествооцененныхаберрантныхметафазметафаз% аберрантныхметафазОднократное внутрижелудочное введение АХ-554Контроль –растворительАХ554(137,6 мг/кг)АХ55450020,450020,450030,650096*18,6*самцы(1376 мг/кг)Циклофосфамид (20 мг/кг)Внутрижелудочное введение АХ-554 в течение 5 днейКонтроль –растворительАХ554Контроль –АХ554(1376 мг/кг)30,650030,650020,450030,6самцы(1376 мг/кг)растворитель500самкиПримечание: * различия при сравнении с контролем и соединением АХ-554статистически значимо при р<0,05 (критерий «Хи-квадрат»)95ИзучениемутагенногодействиявтестеЭймсапроведеносиспользованием трех штаммов – ТА97, ТА98 и ТА-100 грамотрицательногопатогена Salmonella typhimurium.