Диссертация (Клиническое значение эндотелиальной дисфункции в развитии акушерских и перинатальных осложнений), страница 31

Индекс Керногана также показалдостоверное отличие в исследуемых группах: 0,05±0,008 в основной группе и0,06±0,017 в контрольной группе (р<0,0001). Индекс апоптоза эндотелиоцитов восновной группе превысил показатель контрольной группы в 2 раза: в группе снесостоявшимся выкидышем этот показатель составил 7,1±2,49%, в контрольнойгруппе 3,9±1,49% (р<0,0001). По данным Tertemiz et al. (2009), апоптоз играетважную роль в регуляции васкулогенеза фетоплацентарного комплекса: висследованиибылопродемонстрированоповышение экспрессиимолекулэндотелиальной клеточной адгезии CD 31 (PECAM-1) в ангиогенных клеточныхостровках [199], при цитологическом исследовании в препаратах были выявленыморфологические стигмы апоптоза – кариопикноз и апоптозные тельца, а степеньактивности апоптоза и нарушений васкулогенеза была прямо пропорциональна.По данным Levy et al.

(2009), индукция апоптоза часто сопровождает патологию202гестации [169]. Дифференцировка цитотрофобласта, ангио- и васкулогенез вворсинах требуют адекватного доступа кислорода. Индуцированный апоптозэндотелиоцитов нарушает межклеточные взаимоотношения, вызывает гипоксию,что инициирует развитие фетоплацентарной недостаточности – основногопатогенетического звена акушерской и перинатальной патологии.Достоверное отличие большинства изученных нами параметров позволяетутверждать, что морфометрические показатели сосудов ворсинчатого хорионамогут являться маркером патологических изменений в микроциркуляцииформирующегося фетоплацентарного комплекса и их применение правомочно врусле изучения сосудистых нарушений во время беременности.В исследуемых группах первого этапа исследования проведена диагностикаклассическихбиохимическихмаркеровпораженияэндотелия.Вработеиспользовались те показатели, которые доступны в повседневной практике иобъективно отражают нарушения сосудистой системы при рассматриваемойпатологии.

Данный этап исследования был необходим для оценки достоверностиразработанных морфометрических показателей эндотелиальной дисфункции иопределениякорреляциимеждуизучаемымимаркерамипораженияэндотелиоцитов.Поданнымрепродуктивнымилитературы,потерямиубольшинстваобнаруживаетсяженщинизменениесраннимиконцентрациибиохимических маркеров эндотелиальной дисфункции: снижение уровней оксидаазота в два-три раза, Е-селектина – в полтора раза и увеличение эндотелина-1 впять раз [3; 79], отмечается повышение экспрессии сосудистого эндотелиальногофактора роста (СЭФР), ФНО-α [131].

Локальные геморрагии в хорионе,сопровождающие самопроизвольный аборт, способствуют накоплению тромбина,который увеличивает экспрессию рецепторов сосудистого и плацентарногофакторов роста в децидуальных клетках трофобласта [34; 156; 206]. При угрозепрерывания беременности у женщин с урогенитальной инфекцией отмечаетсяувеличение экспрессии молекул адгезии, усиление продукции провоспалительныхцитокинов IL-1, IL-6, TNF-α и т.п., что инициирует процессы апоптоза и203увеличивает количество клеток с цитотоксической активностью, а такжеповышает содержание маркеров апоптоза CD95 и AnnexinV [59].Для изучения эндотелиальной дисфункции в исследуемых группах мыиспользовали определение концентрации С-реактивного белка в сыворотке крови(hsCRP), фактора фон Виллебранда в сыворотке крови (vWf), а также определениемикроальбуминурии (МАУ).

Кроме того, мы изучили концентрацию в сывороткекрови белка р53 – маркера апоптоза, что позволило проанализировать механизмпоражения эндотелиоцитов в свете проводимого исследования.Средний показатель С-реактивного белка в нашем исследовании составил3,3±2,12 мг/мл в основной группе, и 1,8±0,84 мг/мл – у пациенток в контрольнойгруппе (р=0,0056).

Средний показатель концентрации фактора фон Виллебранда вплазме крови в основной группе также превышал соответствующий результатконтрольной группы: 120,0±20,18% в группе с неразвивающейся беременностью,и101,6±9,47%–вконтрольнойгруппе(р=0,0005).Показательмикроальбуминурии был почти в 2 раза выше в основной группе: в группе снесостоявшимся выкидышем этот показатель составил0,02±0,011 мкг/мл, и0,01±0,006 мкг/мл – в контрольной группе (р=0,0003). Маркер апоптоза белок р53сыворотки крови в основной группе составил 0,01±0,011 Ед/мл, и 0,003±0,013Ед/мл в контрольной группе (р=0,0009).Полученные данныепродемонстрировалистатистически достоверноеотличие изученных параметров в сравниваемых группах, что подтверждаетинформативность выбранных показателей в качестве достоверных биохимическихмаркеров поражения сосудистой системы у женщины в I триместре беременности.Данное исследование позволило в дальнейшем использовать вышеуказанныепараметры в определении корреляционно-регрессионных отношении изучаемыхбиомаркеров эндотелиальной дисфункции у беременных с целью определенияэффективности разработанной биомедицинской технологии ранней диагностикисосудистых нарушений фетоплацентарного комплекса.Таким образом, были определены рефернтные морфометрические ибиохимические показатели состояния эндотелия при физиологическом течении204беременности, а также при нарушении гестации.

Генерирование полученныхданныхпозволилосистематизироватьразработанныеморфометрическиепараметры ДЭК с целью разработки новой технологии объективизациипоражения эндотелиальной системы у беременных. В основу диагностическогометода был положен показатель среднего эквивалентного диаметра ДЭК(СДДЭК), как достоверный и наиболее простой в определении морфометрическийпараметр поражения эндотелиальных клеток.Как было указано выше,апоптоз является основным механизмом гибелиэндотелиоцитов [27; 33; 40; 87; 123]. При повреждении клетка эндотелияпроходит стадии сжатия, конденсации и фрагментации. При активном теченииэндотелиальнойдисфункциибольшоеколичествоциркулирующихДЭКфиксируется при микросокпии в стадии блеббинга или апоптозных телец, чтосопровождаетсяуменьшениемосновныхморфометрическихпараметровпораженных клеток. В нашем исследовании показано статистически достоверноеуменьшение морфометрических параметров ДЭК периферической крови восновной группе.

При денситометрии препаратов ДЭК сегментация позволялавыделять оптические зоны ядер клеток, в которых фиксировались компактизация,фрагментация и маргинация хроматина, что также потверждает участие апоптозав поражении эндотелиоцитов. Кроме того, в группе с несостоявшимсявыкидышем отмечено увеличение изученных нами биомаркеров апоптоза: индексапоптоза эндотелиоцитов сосудов ворсинчатого хориона плода в группе снеразвивающейся беременностью превысил показатель контрольной группыпочти в 2 раза (р<0,0001), концентрация белка р53 у беременных основнойгруппы превысила аналогичный показатель контрольной группы в 3 раза(р=0,0009).Таким образом, средний эквивалентный диаметр циркулирующих ДЭКможет рассматриваться как маркер поражения эндотелия. Для подтвержденияправильности используемой гипотезы о достоверности выбранного параметра воценке поражения эндотелиоцитов были изучены корреляционные отношениямежду новым параметром – СДДЭК и классическими маркерами эндотелиальной205дисфункции, включенными в наше исследование.

В литературных источникахвстречаются работы по определению прогностической ценности цитологическойдиагностики эндотелиальной дисфункции. По данным литературы, количествоДЭК в сыворотке крови коррелирует с уровнем фактора фон Виллебранда (г=0,35;р=0,001),растворимогоплазменнымимаркерамиисследованииустановленоЕ-селектина(г=0,43;эндотелиальнойувеличенниер<0,001),дисфункциичислаявляющимися[180].ВциркулирующихдругомДЭКисодержания биохимического маркера воспаления С-реактивного протеина убольных с инфарктом миокарда по сравнению со здоровыми. Эти показателикоррелировали между собой (г=0,5; р=0,001) [201].

У пациентов с ИБСобнаружена значимая корреляция числа циркулирующих ДЭК и уровнямалонового диальдегида (г=0,8) в зависимости от тяжести заболевания ипроведения терапии. Выявленное соотношение показателей позволяло судить отяжестиипрогнозеИБС[203].Убольныхсзастойнойсердечнойнедостаточностью выявляется обратная зависимость между эндотелий-зависимойвазодилатацией и числом циркулирующих ДЭК (р=0,002), а также положительной– между количеством ДЭК и фактором фон Виллебранда (р=0,032) [143].Детальногоисследованиядиагностическойзначимостиморфометрическихпараметров циркулирующих ДЭК в доступной литературе нами найдено не было.Мы определили вероятностные связи между традиционным цитологическимпараметром сосудистой системы – количеством ДЭК, определенным по методикеJ.Hladovec (1978), и средним эквивалентным диаметром циркулирующих ДЭК.Расчет коэффициента Спирмена показал высокий уровень корреляции междуисследуемыми показателями.

Анализ продемонстрировал обратную зависимостьколичества десквамированных эндотелиоцитов и их среднего диаметра: сколичествомДЭКэквивалентныйдиаметрДЭКкоррелируетсильноиотрицательно (rs= - 0,95). То есть, увеличение количества ДЭК в периферическойкрови сопровождалось уменьшением их среднего эквивалентного диаметра.Были изучены вероятностные связи между СДДЭК и биохимическимимаркерами эндотелиальной дисфункции. Показатель высокочувствительного С-206реактвиногобелкавсывороткекровипродемонстрировалсильнуюотрицательную корреляционную связь со средним эквивалентным диаметромДЭК и составил rs= - 0,91. Коэффициент корреляции микроальбуминурии исреднего диаметра ДЭК также показал удовлетворительный результат rs= - 0,72.Коэффициент корреляции фактора фон Виллебранда и среднего эквивалентногодиаметра ДЭК составил rs= - 0,69.Исследованиеинформативностьэндотелиявведеннойсосудовхорионаморфометрическойтакжесистемыподтвердилообъективизацииэндотелиальной дисфункции у беременных. Были изучены вероятностные связимежду морфометрическими параметрами эндотелиоцитов у матери и плода внашем исследовании.