Диссертация (Влияние синтетических ноотропных средств на активность металлозависимых протеиназ), страница 6

Пробы преинкубировали 8 мин при 370С. Реакцию начиналиприбавлением 10 мкл гиппурил-агр, приготовленного на 100 мМ Трис-НСlбуфере (рН 7,6). Конечная концентрация субстрата в пробе 5 мМ. Пробыинкубировали при 370С в течение 120 минут. Реакцию останавливали34внесением в прбы 30 мкл 10% трихлоруксусной кислоты. Далее образцыцентрифугировали (4000 об/мин, 30 мин), отбирали 50 мкл надосадочнойжидкости и определяли количество образовавшегося гли-арг нингидриновымметодом [139]. Белок определяли методом Лоури [165].Активность ПДПА определяли как разность в накоплении продуктареакции в пробах, не содержащих и содержащих каптоприл, и выражали внмоль образовавшегося продукта реакции за 1 мин инкубации в пересчете на1 мг белка.Статистическую обработку результатов исследования осуществляли спомощью следующих пакетов программ: Microsoft Office Exel 2010(Microsoft, США), Statistica 6,0 (StatSoft, Inc., США) и BioStat 2009Professional.

Достоверность различий между группами определяли сиспользованием параметрического t–критерия Стьюдента (при р≤0,05) длясравнения средних независимых выборок, с учетом предварительнойпроверки выборок на нормальность распределения. Результаты представленыв виде M ± m, где M – среднее, m – стандартная ошибка среднего.Критический уровень значимости при проверке статистических гипотезпринимался равным р=0,05 (Р=95%).35ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ3.1. Активность карбоксипептидазы Е в тканях крыс привведении синтетических ноотропных препаратов3.1.1.

Активность карбоксипептидазы Е при введении пирацетамаРезультаты исследования однократного действия пирацетама наактивность КПЕ в тканях самцов крыс представлены в таблице 1.Таблица 1. - Активность КПЕ при однократном введении Пирацетама (нмольпревращенного субстрата /(мг белка*мин); N=6; М±m)Время до декапитации после инъекции препарата (часов)0,54ИсследуемыеКонтрольОпытКонтрольОпыттканиГипофиз0,788±0,035 1,180±0,194 *1,964±0,165 0,808±0,044 ***Четверохолмие 0,268±0,009 0,199±0,025 *** 0,372±0,0140,428±0,093Продолговатый0,288±0,007 0,155±0,015 *** 0,279±0,0100,229±0,029 *мозгГипоталамус 0,352±0,014 0,159±0,004 *** 0,307±0,0390,293±0,023Гиппокамп0,354±0,013 0,162±0,079 *** 0,357±0,0740,281±0,011Амигдала0,259±0,027 0,110±0,035 *** 0,432±0,052 0,312±0,043 **Стриатум0,297±0,016 0,076±0,014 *** 0,332±0,0530,232±0,055 *Надпочечники 0,050±0,001 0,015±0,004 *** 0,086±0,005 0,041±0,002 ***2472КонтрольОпытКонтрольОпытГипофиз0,680±0,073 0,829±0,025 ** 0,631±0,082 0,423±0,043 **Четверохолмие 0,574±0,069 0,228±0,004 *** 0,303±0,0180,232±0,052 *Продолговатый0,505±0,042 0,296±0,060 *** 0,292±0,0110,325±0,016 *мозгГипоталамус 0,552±0,042 0,370±0,045 *** 0,320±0,0270,290±0,034Гиппокамп0,478±0,079 0,249±0,011 *** 0,286±0,0150,266±0,003 *Амигдала0,448±0,044 0,733±0,046 *** 0,274±0,0370,261±0,061Стриатум0,315±0,055 0,182±0,024 ** 0,288±0,034 0,172±0,043 ***Надпочечники 0,081±0,015 0,062±0,003 *0,054±0,006 0,036±0,005 *** – р< 0,05; ** – р < 0,01; *** – р < 0,001 относительно контроля всоответствующем временном интервале36Активность КПЕ в гипофизе повышалась в 1,3 раза через 0,5 часовпосле введения пирацетама по сравнению с контрольной группой животных.Через 4 часа активность снизилась в 2,4 раза по сравнению с контролем.

Попрошествии 24 часов после введения препарата активность исследуемогофермента в гипофизе повысилась в 1,2 раза, а через 72 часа снизилась в 1,5раз по сравнению с контрольной группой самцов.В четверохолмииактивность карбоксипептидазы Е снижалась в 1,4, 2,5 и 1,3 раза посравнению с контрольной группой через 0,5, 24 и 72 часа соответственно.Через 4 часа после введения пирацетама достоверных отличий активностиКПЕ в четверохолмии по сравнению с контролем не наблюдалось. Впродолговатом мозге наблюдалось снижение активности КПЕ в 1,9, 1,2 и 2,5раза по сравнению с контрольной группой животных через 0,5, 4 и 24 часасоответственно. По истечении 72 часов активность исследуемого фермента впродолговатом мозге была выше в 1,1 раз по сравнению с контрольнойгруппой животных.

Активность карбоксипептидазы Е в гипоталамусеснижалась в 2,2 и 1,5 раза по сравнению с контрольной группой самцов через0,5 и 24 часа соответственно. В гиппокампе активность исследуемогофермента снижалась в 2,2, 1,9 и 1,1 раз через 0,5, 24 и 72 часа соответственнопо сравнению с контрольной группой животных. Активность КПЕ в амигдалебыла снижена в 2,4, 1,4 раза через 0,5 и 4 часа, а по истечении 24 часоввозрастала в 1,6 раза по сравнению с контрольной группой.

В стриатумеактивность КПЕ была снижена в 3,9, 1,4, 1,7 и 1,7 раза по равнению сконтролем через 0,5, 4, 24 и 72 часа соответственно. В надпочечникахактивность исследуемого фермента оказалась сниженной в 3,3, 2,1, 1,3 и 1,5раза через 0,5, 4, 24 и 72 часа соответственно по сравнению с контрольнойгруппой животных.Результаты исследования длительного действия пирацетама наактивность КПЕ в тканях самцов крыс представлены в таблице 2.37Таблица 2. - Активность КПЕ при введении Пирацетама каждые 24 часа втечение 14 суток (нмоль превращенного субстрата /(мг белка*мин); N=6; М±m)Время до декапитации после последней инъекции препарата(часов)2472Отделы мозгаКонтрольОпытКонтрольОпытГипофиз0,776±0,010 1,207±0,092 *** 0,404±0,010 0,590±0,048 ***Четверохолмие 0,340±0,014 0,584±0,097 ** 0,482±0,0170,390±0,082 *Продолговатый0,426±0,0190,353±0,050 *0,316±0,017 0,181±0,007 ***мозгГипоталамус0,356±0,0240,296±0,052 *0,295±0,023 0,370±0,035 **Гиппокамп0,269±0,0220,331±0,049 *0,279±0,0290,268±0,024Амигдала0,454±0,0490,395±0,0660,394±0,1010,288±0,013 *Стриатум0,278±0,0070,240±0,0590,221±0,033 0,162±0,009 **Надпочечники 0,040±0,007 0,104±0,007 *** 0,059±0,0130,066±0,004* – р< 0,05, ** – р < 0,01, *** – р < 0,001 относительно контроля всоответствующем временном интервалеАктивность карбоксипептидазы Е через 24 часа после последнейинъекции препарата была выше в 1,6 раза по сравнению с контрольнойгруппой животных.

Через 72 часа после последней инъекции активность КПЕбыла выше в 1,5 раза по сравнению с контрольной группой самцов. Вчетверохолмии активность фермента повышалась в 1,7 раза через 24 часа иснижалась в 1,7 раза через 72 часа по сравнению с контрольной группойживотных. В продолговатом мозге активность КПЕ снижалась в 1,2 и 1,8 разачерез 24 и 72 часа после последней инъекции препарата соответственно.

Вгипоталамусе активность карбоксипептидазы Е была снижена в 1,2 раза через24 часа и повышена 1,3 раза через 24 и 72 часа соответственно. В гиппокампеактивность исследуемого фермента повышалась через 24 часа, а через 72 часав амигдале и стриатуме снижалась в 1,4 и 1,4 раза соответственно. Внадпочечниках обнаружено повышение активности КПЕ в 2,6 раза через 24часа по сравнению с контрольной группой животных.383.1.2. Активность карбоксипептидазы Е при введении ноопептаРезультатыисследованияоднократногодействияноопептанаактивность КПЕ в тканях самцов крыс представлены в таблице 3.Таблица 3. - Активность КПЕ при однократном введении Ноопепта (нмольпревращенного субстрата /(мг белка*мин); N=6; М±m)Время до декапитации после инъекции препарата (часов)0,54Отделы мозгаКонтрольОпытКонтрольОпытГипофиз0,788±0,035 0,984±0,062 *** 1,964±0,165 0,591±0,054 ***Четверохолмие 0,268±0,009 0,984±0,062 *** 0,372±0,014 0,591±0,054 ***Продолговатый0,288±0,007 0,206±0,047 ** 0,279±0,0100,281±0,050мозгГипоталамус0,352±0,014 0,170±0,023 *** 0,307±0,0390,353±0,023Гиппокамп0,354±0,013 0,249±0,088 * 0,357±0,0740,327±0,021Амигдала0,259±0,027 0,191±0,011 ** 0,432±0,052 0,612±0,069 **Стриатум0,297±0,016 0,141±0,025 *** 0,332±0,053 0,250±0,018 *Надпочечники 0,050±0,001 0,044±0,003 ** 0,086±0,005 0,062±0,010 **2472КонтрольОпытКонтрольОпытГипофиз0,680±0,0730,644±0,0780,631±0,0820,607±0,016Четверохолмие 0,574±0,0690,644±0,0780,303±0,018 0,607±0,016 *Продолговатый0,505±0,042 0,391±0,095 * 0,316±0,0560,261±0,060мозгГипоталамус0,552±0,042 0,403±0,072 ** 0,349±0,0690,327±0,010Гиппокамп0,478±0,079 0,353±0,037 * 0,286±0,0150,274±0,065Амигдала0,448±0,044 0,392±0,009 * 0,274±0,037 0,211±0,003 *Стриатум0,315±0,055 0,169±0,013 *** 0,288±0,034 0,185±0,021 ***Надпочечники 0,081±0,015 0,114±0,008 ** 0,054±0,0060,061±0,004* – р< 0,05, ** – р < 0,01, *** – р < 0,001 относительно контроля всоответствующем временном интервалеАктивность карбоксипептидазы Е после однократного действияноопепта повышалась в 1,3 раза через 0,5 часа, снижалась через 4 часа в 3,3раза по отношению к контрольной группе животных.

В четверохолмииактивность КПЕ была повышена в 3,7 и 1,6 раза через 0,5 и 4 часасоответственнопоотношениюкконтрольнойгруппесамцов.В39продолговатом мозге активность КПЕ снижалась в 1,4 и 1,3 раза через 0,5 и24 часа соответственно после введения ноопепта по сравнению сконтрольнойгруппой.Гипоталамуснавведениепрепаратаответилснижением активности карбоксипептидазы Е в 2,1 и 1,4 раза через 0,5 и 24часа соответственно по сравнению с контрольной группой животных. Вгиппокампе активность рассматриваемого фермента оказалась сниженной посравнению с кнотрольной группой животных в 1,4 раза через 0,5 и 24 часа.Активность КПЕ в амигдале после однократного введения ноопептаснижалась в 1,4, 1,1 и 1,3 раза через 0,5, 24 и 72 часа соответственно и былаповешена в 1,4 раза через 4 часа по сравнению с контрольной группойживотных.