Диссертация (Ветеринарно-санитарная характеристика и оценка продуктов убоя овец при дерматофилезе), страница 11

Сверху навеску накрывали такой жепластинкой, как и нижняя, устанавливали на нее груз массой 1 кг ивыдерживали 10 минут. После этого фильтр с навеской освобождали от груза инижней пластинки, а затем карандашом очерчивали контур пятна вокругспрессованного мяса.Внешний контур вырисовывается при высыхании фильтровальной бумагина воздухе. Площади пятен, образованных спрессованным мясом и адсорбированной влагой, измеряли планиметром.Размер влажного пятна (внешнего) вычисляли по разности между общейплощадью пятна и площадью пятна, образованного мясом. Экспериментальноустановлено, что 1 см площади влажного пятна фильтра соответствует 8,4 мгводы.Содержание связанной влаги вычисляли по формуле:X1 = (А – 8,4В) × 100/m,58Содержание связанной влаги в % к общей влаге определяли по формуле:Х2 = (А – 8,4Б) × 100/А,где:X1 – содержание связанной влаги, % к мясу;Х2 – содержание связанной влаги, % к общей влаге;А – общее содержание влаги в навеске, мг;Б – площадь влажного пятна в см;m – масса навески мяса, мг.Проба варкой.

В колбу помещали 20-30 кусочков мяса по 2-3 г безвидимого жира, заливали их водой, накрывали стеклом и нагревали докипения. При закипании стекло приподнимали и оценивали запах пара,обращали внимание на прозрачность бульона и состояние жира на егоповерхности. При варке свежего мяса бульон прозрачный, ароматный, наповерхности его большое скопление жира. У мяса начальной стадии порчибульон неароматный, мутный, на поверхности мелкие скопления жира. Бульониз испорченного мяса имеет затхлый запах, грязный цвет, содержит хлопья, наповерхности мало мелких жировых скоплений.2.1.5. Методы микробиологических исследований мясаМикробиологические исследования продуктов убоя проводили согласнометодике, приведенной в ГОСТ 21237-75 «Мясо.

Методы бактериологическогоанализа», который основан на изучении количества микроорганизмов и ихсостава, в том числе бактерий родов Salmonella, Escherichia, Proteus, бактерийкокковых форм и Cl. perfringens.Идентификациювыделенныхмикроорганизмоввыполнялисприменением методов, описанных в известных руководствах с использованием«Краткого определителя бактерий Берги» (1980).Из исследуемого материала делали мазки-отпечатки, а также посевы наобщие и специальные питательные среды. Мазки-отпечатки окрашивали по59Грамму, определяли количество и морфологию бактерий в нескольких поляхзрения.Каждую пробу перед посевом освобождали от видимой соединительной ижировой ткани, погружали в спирт и обжигали поверхность. Затем ножницамииз глубины каждого образца вырезали кусочки размером 2,5×1,5×2,5 см (масса25 г).

Лимфоузлы обжигали и следовали целиком. Вырезанные кусочкипомещали в стерильную ступку и добавляли 80 мл физиологического раствора.Ножницами измельчали до получения кашицеобразной массы, в которойисследуемый материал находился в соотношении к общему количеству 1:5.Полученную взвесь отстаивали не менее 5 мин, после чего из поверхностинадосадочной жидкости пипеткой объемом 1 мл набирали жидкость, вносили вчашки Петри с последующей заливкой МПА для изучения общего количествамикроорганизмов и на поверхность других питательных сред для изучениямикроорганизмов. По 0,2 мл взвеси вносили на МПА, Эндо и тщательнорастирали шпателем по поверхности питательной среды в чашке Петри.Выявление бактерий рода Salmonella проводили в соответствии сГОСТ Р 50480-93 «Продукты пищевые.

Метод выявления бактерий родаSalmonella», который основан на высеве определенного количества продукта вжидкуюпитательнуюсреду,инкубированиипосевов,последующемвыявлении в этих посевах бактерий, способных развиваться в жидкихселективных средах, образующих типичные колонии на агаризованныхдифференциально-диагностических средах, имеющих типичные для бактерийрода Salmonella биохимические и серологические характеристики.ВыявлениебактерийБГКП.Сущностьвыявлениябактерийзаключается в определении морфологии, характера роста на элективныхпитательных средах с лактозой и отсутствия способности образовыватьцитохромоксидазу, утилизировать цитрат, образовывать сероводород испособности продуцировать индол.60Посев на элективные питательные среды осуществляли отпечаткомпробы или внесением 1-2 капель взвеси на среду Эндо, Плоскирева илиЛевина.

При наличии колоний, характерных для бактерий группы кишечныхпалочекEscherichiacoli,ихдифференцировалиотдругихсходныхмикроорганизмов по биохимическим свойствам.Выявление бактерий рода Proteus. Сущность метода выявлениябактерий из рода Proteus заключалась в определении морфологии, роста напитательных средах, способности гидролизовать мочевину, образованиисероводорода и отсутствии ферментации маннита.Наличие на чашках вуалеобразного налета (Н-форма), при микроскопиикоторогообнаруживаютсяполиморфныеподвижныепалочки,окрашивающиеся по Грамму отрицательно, указывает на присутствиевульгарного протея.

Наряду с колониями, которые дают расплывающийся поповерхности рост, могут встречаться изолированные колонии среднейвеличины, нежные, полупрозрачные с розоватым центром, палочки из этихколоний лишены жгутиков и неподвижны (О-форма). Для подтвержденияналичия протея (Н-форма) производили посев в конденсационную водускошенного агара (способ Шукевича).Выявление сульфитредуцирующих клостридий. Метод основан навысевеопределенногоколичествапродуктаилиегоразведениявжелезосульфитсодержащие среды (среда Вильсона-Блера), инкубированиипосевов при 37 °С не более 72 ч. При определении присутствия (отсутствия)сульфитредуцирующих клостридий посевы просматривали для обнаруженияпризнаков роста сульфитредуцирующих микроорганизмов – почернение среды.Принадлежностьвыросшихмикроорганизмовксульфитредуцирующимклостридиям определяли по культуральным и биохимическим признакам.Выявление микроорганизмов кокковых форм.

Определенную навескупродукта или его эквивалентное разведение с предварительным обогащением61вносили на одну из агаризованных селективно-диагностических сред (молочносолевой агар, яично-желточно-солевой агар, яично-желточно-азидный агар).ДляподтвержденияпринадлежностихарактерныхколонийкStaphylococcus aureus проводили микроскопию. Для установления патогенности(гемолитическойактивности)Staphylococcusaureusставилиреакциюкоагуляции плазмы крови кролика.Выявление бактерий Listeria monocytogens. Метод согласно ГОСТ Р51921-2002 основан на высеве определенного количества пищевого продукта вжидкую селективную питательную среду (с предварительным обогащением),последующем пересеве на агаризованные селективно-диагностические среды икультивировании посевов при оптимальных условиях. Принадлежностьвыявленных колоний к Listeria monocytogens определяли по биологическимсвойствам.Навеску пищевого продукта массой 25+0,1 г. вносили 225 см3 бульонФразера сред для предварительного обогащения.

Посев культивировали при30+10С в течении 24+2 ч.После инкубирования продукта в количестве 0,1 см3 пересевали в 10 см3бульона Фразера II (среду обогащения). Посев инкубировали при температуре37+10С в течение 48 ч.Из пробирок после инкубирования делали посев бактериологическойпетлей из культуральной жидкости на поверхность агаризованой селективнодиагностической среды (ПАЛКАМ агар). Посев инкубировали при температуре37+10С в течение 24-48 ч. После инкубирования чашки с посевамипросматривали и отмечали рост характерных колоний.

При отсутствии ростахарактерных колоний листерий на агаризированой среде, исследованиепрекращали и давали заключение об отсутствии Listeria monocytogens висследуемой пробе продукта.62На ПАЛКАМ агаре через 24ч. Листерии формируют мелкие сероватозеленые или оливково-зеленые колонии с черным ореолом диаметром от 1,0 до1,5 мм, иногда с черным центром.2.1.6. Метод гистологических исследований мясаДля гистологического исследования отбирали пробы мышечной ткани измест, наиболее быстро подвергающихся послеубойным изменениям, согласноГОСТ 19496-93. Образцы мышечной ткани вырезали кусочками размером30×30×30 мм, к каждому образцу прикрепляли этикетки с номером иподвергали фиксации ускоренным методом. Затем кусочки мяса промывалихолодной проточной водой в течение 2 мин и резали на замораживающеммикротоме в плоскости, параллельной продольной оси волокон.

С ножамикротома срезы переносили в чашку с водой на несколько секунд для ихраспрямления, неповрежденные образцы срезов помещали на предметноестекло, обработанное яичным белком с глицерином. Срезы на предметномстекле покрывали фильтровальной бумагой для удаления влаги и наклеиванияих на поверхность стекла. Срезы окрашивали, заключали в пихтовый бальзам инакрывали покровным стеклом. Гистосрезы просматривали при увеличении в80 и 400 раз.2.1.7. Методы определения биологической ценности и безвредности мясаОпределение биологической ценности и безвредности мяса овецпроводили на инфузориях Тетрахимена пириформис согласно «Методическимрекомендациям для использования экспресс-метода биологической оценкипродуктовикормов»«Методическим(утвержденныхуказаниямпоВАСХНИЛускоренному20.11.1989определениюг.)итоксичностипродуктов животноводства и кормов» (утвержденных ДВ МСХ РФ 16.10.2000г., № 13-7-2/2156).При определении относительной биологической ценности (ОБЦ) мяса его63навеску в количестве 2,4 мг по азоту помещали в ступку и растирали пестикомв течение 1-2 мин.