Диссертация (Эколого-гигиеническая оценка органоминеральных удобрений на основе отходов животноводства), страница 7

Coli, Salm. Dublin, St. Aureus, микобактерии В-5),отличающиесяразличнойстепеньюустойчивостикдействиюнеблагоприятных факторов.Тест-объектами служили мешочки из бязевой ткани с навескойорганоминерального субстрата, контаминированного 2-х млрд. суспензиейэнтеропатогенными культурами бактерий группы кишечных палочек (E.

Coli– O 139 ), сальмонеллами (Salm. dublin), стафилококком (St. aureus – 209-Р) и42микобактериями — атипичный штамм В-5, в дозе 1 мл на 1 г навески. Тестобъект изучали по окончании технологического процесса подготовкиорганоминерального удобрения, через 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36,39, 42 часа и подвергали микробиологическим исследованиям. Каждая серияопытов сопровождалась контролем.

Контролем служил навоз крупногорогатого скота, контаминированный индикаторными микроорганизмами безформалина и мочевины. Жизнеспособность микроорганизмов определяли помикробиологическимисследованиямосновываясьна«Ветеринарно-санитарные правила подготовки к использованию в качестве органическихудобрений навоза, помета и стоков при инфекционных и инвазионныхболезнях животных и птиц».Уровень микробной контаминации нативного навоза крупного рогатогоскота, влажной органоминеральной смеси из навоза, мочевины, суперфосфата,калий магнезии и высушенного органоминерального субстрата из навоза иминеральных компонентов, а также гранулированного органоминеральногоудобрения определяли общепринятыми методами, учитывая количествомезофильных аэробных и факультативных анаэробных микроорганизмов(КМАФАнМ), индекс санитарно-показательных микроорганизмов (колиформы,энтеробактерии), наличие патогенных и болезнетворных микроорганизмов, втом числе энтеробактерий (патогенных серовариантов бактерий группыкишечных палочек, сальмонелл), энтерококков.Дляопределениябактерийгруппыкишечныхпалочек(БГКП)использовали трехэтапный бродильный метод.

Пробы подстилочного навоза,компоста (исходный материал и его разведения) вносили в пробирки сглюкозопептонной средой (ГПС). Посев 100 мл и 10 мл производили вофлаконы и пробирки с 10 мл и 1 мл концентрированной среды, 1 мл и 0,1 млзасевали в пробирки с 10 мл среды нормальной концентрации. Флаконы ипробирки с засеянными средами инкубировали в течение 24 ч в термостатепри 37°С.43Из каждой пробирки с глюкозопептонной средой, где отмеченопомутнение, кислотообразование или образование газа, делали посевыпетлей штрихами на поверхности среды Эндо, разделенной на 3-4 сектора.Посевной материал брали с таким расчетом, чтобы получить изолированныеколонии. Чашки с посевами помещали в термостат и инкубировали 16-18 чпри 37°С.При отсутствии роста колоний на среде Эндо, а также при наличиинехарактерных для БГКП колоний получали отрицательный результатисследований на БГКП.При росте на среде Эндо темно-красных колоний с металлическимблеском (или без него) их принадлежность к БГКП подтверждалимикроскопированием и постановкой оксидазного теста.

Рост мелких,неспорообразующих грамотрицательных палочек в мазках и отрицательныйоксидазный тест свидетельствовали о наличии БГКП.При росте на среде Эндо нехарактерных для БГКП колоний из 2-3разных типов колоний приготовили мазки, окрашивали их по Граму,микроскопировали и проверяли на оксидазную активность. При наличиитолькограмположительныхспорообразующихбактерийполучалиотрицательный результат. Наличие активной оксидазы у всех изучаемыхкультур бактерий также позволяло заключить об отсутствии БГКП ванализируемом объеме исследуемого материала.При росте на среде Эндо грамотрицательных бактерий засевали по 2-3изолированные колонии разного типа с каждого сектора в полужидкую средус глюкозой и инкубировали 24 ч при 37°С. Ферментация глюкозы собразованием кислоты и газа свидетельствовала о наличии БГКП.Результаты исследований выражали в виде Коли-титра в абсолютныхчислах, пользуясь специальными таблицами с последующим определениемих индекса.Также нами проводилось выделение патогенных серовариантов БГКП,Для этого колонии бесцветных оксидазоотрицательных и грамотрицательных44бактерий засевали в полужидкую глюкозную среду и инкубировали 24 ч при37°С.

Сбраживание сахара с образованием кислоты и газа указывало наналичие БГКП. Выделенные БГКП подвергались серологическим реакциям.С указанными культурами ставили реакцию агглютинации с О-колисыворотками.Определениебактерийизродасальмонеллосуществлялисиспользованием среды обогащения - магниевой среды. После 18-20 чинкубации при 37°С из культур, выращенных в обогатительных средах,проводили посевы бактериологической петлей на чашки с твердымидифференциально-диагностическими средами (висмут-сульфитный агар иагар Плоскирева). Посевы инкубировали при 37°С в течение 48 ч.

Засеянныечашки просматривали через 16, 24, 48 ч.Выделение стафилококков осуществляли методами с использованиемжидких и плотных питательных сред: солевого мясопептонного бульона,агара Чепмена, щелочно-полимиксиновой среды, глюкозо-дрожжевой среды.Для выделения стафилококка высевали по 0,5 мл центрифугата и 5 млмясопептонного бульона с последующим пересевом на 7%-ный солевоймясопептонный агар и на среду Чепмена. Из выросшей культурыприготавливалимазки,окрашивалипоГрамуиисследовалиподмикроскопом.Одновременно при изучении санитарно-бактериологического состоянияопределяли рН, влажность органического субстрата и температурныепараметры. рН определяли потенциометрическим методом в соответствии сГОСТ 27-979-88 с помощью рН-метра. Влажность определяли в соответствиис ГОСТ 26-713-85.Массовуюдолювлагивыражаливпроцентах.Температурныепараметры учитывались с помощью термометра и самопишущих суточного инедельного термографов.45При выполнении научно-исследовательской работы, в подготовленнуюкомпостную смесь, загруженную в резервуар на нижнем, среднем и верхнемеё уровнях нами в каждой серии экспериментов закладывались тест-объекты.Схема расположения тест-объектов в резервуаре при полученииорганоминерального субстрата представлена на рисунке 3.Тест-объектытехнологическогоизэтапарезервуараполученияизвлекалипослеорганоминеральногоокончанияудобренияиподвергали микробиологическим исследованиям.Рис.

4. Схема расположения тест-объектов в резервуарепри получении органоминерального удобренияИзучение влияния органоминерального удобрения на основе отходовживотноводства на рост и развития овощных культур (на примере огурца)проводили в вегетационном опыте в сосудах при выращивании рассадыогурца в фитотроне Федерального государственного бюджетного научного46учреждения «Всероссийский научно-исследовательский институт агрохимииимени Д.Н.

Прянишникова» при консультативной помощи заведующейлабораторией агрохимии органических и известковых удобрений, докторасельскохозяйственных наук, профессора, заслуженного деятеля науки РФГ.К. Мерзлая в соответствии с методическими указаниями Аринушкина Е.В.«Руководство по химическому анализу почв» (1961) и Доспехова Б.А.«Методика полевого опыта» (1979) и Программы и методик исследований вгеографической сети полевых опытов по комплексному применению средствхимизации в земледелии (1990), а также методических и организационныхосновыпроведенияагроэкологическогомониторингавинтенсивномземледелии (1991).Семена огурца среднеспелого сорта «Засолочный» были высеяны всосуд. К моменту учета урожая – апрель месяц 2016, 2017 гг. – в каждомсосуде было оставлено по одному растению огурца.Уборка надземной и корневой массы растений огурца в каждом сосудеосуществлена в апреле 2016 и 2017 гг.Опыт выполнялся по схеме:1 – Контроль (без удобрений);2 – ОМУ N общ 1003 – ОМУ N общ 2004 – ОМУ N оьщ 3005 – ОМУ N общ 4006 – Минеральные удобрения N общ 200 Р 2 О 5 200 К 2 О 2007 – ОМУ N общ 100 + N общ 100 Р 2 О 5 200 К 2 О 200Схема опыта включала контроль без внесения удобрений, четыреварианта (вар.

2, 3, 4, 5) с последовательно возрастающими дозамиорганоминерального удобрения, составляющими по содержанию азотасоответственно 100, 200, 300, 400 кг/га. Вариант с минеральнымиудобрениями в дозе N общ 200, который эквивалентен по содержанию азотаварианту 3 и вариант совместного применения минеральных удобрений и47испытываемогоорганоминеральногоудобрениянаосновеотходовживотноводства, также эквивалентный по содержанию азота варианту 3.Повторность опыта – 3-х кратная.Температура воздуха в период опыта поддерживалась на уровне 24-25°Сднем и 20°С – ночью.

Световой режим обеспечивался люминесцентнымилампами. Освещенность составляла 12 люкс, а фотопериод 14 часов.С одной дозой органоминерального удобрения на основе отходовживотноводства в почву поступало 100 кг/га азота. Варианты 6 и 7 поколичеству внесенных основных питательных элементов эквивалентныварианту 3, где был внесено органоминеральное удобрение на основеотходов животноводства в дозе 200 кг/га азота.Почвадляопытахарактеризоваласькакдерново-подзолистаятяжелосуглинистая и имела следующие агрохимические показатели: рН - 5,6,содержание органического углерода – 1,19% (или 2,4 гумуса), содержаниеподвижного фосфора (Р 2 О 5 ) по Кирсанову 526 мг/кг, калия (К 2 О) 386 мг/кг,N общ 0,18%.В опыте для испытания использовали органоминеральное удобрение наоснове навоза крупного рогатого скота после обработки электрическимтоком, содержащее (в расчете на сухую массу) 39,2% С, 79,9 %органического вещества, 3,2% общего азота, 5,6% фосфора, 5,1% калия,влажностью 2,0%.За период эксперементальных исследований было проведено три серииэкспериментов и более 200 анализов проб нативного навоза крупногорогатогоскота,органоминеральногоорганоминерального удобрения.субстратаигранулированного482.2.2.Изучениесанитарно-бактериологическогосостоянияорганоминеральных удобрений на основе навоза крупного рогатого скотаВкачествеминеральныхкомпонентовдляполученияорганоминерального удобрения на основе отходов животноводства быливзятымочевина(карбамидИспользованиевкачествеформальдегида(формалинамаркиБ),суперфосфа,калимагнезия.минеральныхкомпонентовмочевины37%)обоснованотем,чтоипродуктыполиконденсации этих элементов превосходят стандартные удобрения.

Онисоздают наиболее оптимальный режим питания растений, характеризуютсявысокой эффективностью действия на интенсивность микробиологическихпроцессов в почвах, благоприятно сказываются на интенсивность развитияважнейшихфизиологическихгруппмикроорганизмов,принимающиеучастие в трансформации азота и разлагающих труднодоступные растениямифосфаты кальция, аммония и железа. Способствуют накоплению в почвеаммиачных и нитратных форм азота, а также подвижного фосфора,необходимых для оптимального удовлетворения потребности растений вэтих элементах, а следовательно, и обеспечивающих получение высокихурожаев.К тому же формальдегид в виде газа или водных растворов способеноказывать губительное действие на споровые формы микробов, нанеспорообразующие микроорганизмы, на вирусы и на некоторые плесневыегрибы, что позволяет его использовать как дезинфицирующее средство.

Онвесьмаэффективеннетолькодлядезинфекцииживотноводческихпомещений, но и для обеззараживания навоза и навозных стоков присоответствующей экспозиции и гомогенизации.Способ получения органоминеральных удобрений предусматриваетвключениеисмешиваниеорганическихотходовживотноводствасформалином и мочевиной. Причем смесь мочевины и формалина нагреваютдо 92 – 105°С в течение 6-8 минут с последующим добавлением источникаорганического вещества.49Выживаемость индикаторных микроорганизмов в органоминеральномсубстрате приведена в таблице 3.Результатысанитарно-бактериологическихпредставленныевтаблице3,показывают,чтоисследований,использованиеприпроизводстве органоминеральных удобрений на основе навоза крупногорогатого скота, мочевины и формалина в количестве 0,1% к объему массыинактивация бактерий группы кишечных палочек (E.