Диссертация (Иммуноморфологические ассоциации инфекции helicobacter pylori с показателями воспаления и дисфункции эндотелия в оценке течения и прогноза ишемической болезни сердца), страница 11

Использовалась негемолизированная сыворотка или плазма крови. Сыворотку и плазму отде-54ляли от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 час после забораокрови. Пробы перемешивали и инкубировали 10 минут при температуре 37 С.Измерение оптической плотности опытной и калибровочной пробы относительноконтрольной пробы при длине волны 550 нм (540-560 нм) в кювете с длиной оптического пути 1 см.

Содержание триглицеридов в сыворотке или плазме кровиопределяли по формуле:С=АпробыХ 2,25АкалибраторагдеС – концентрация триглицеридов в анализируемой пробе, ммоль/л;Апробы – оптическая плотность анализируемой пробы, ед. опт. пл.;Акалибратора – оптическая плотность калибратора, ед. опт. пл;2,25 – содержание глицерина в калибраторе, ммоль/л.При содержании триглицеридов в сыворотке или плазме крови выше 11,3 ммоль/лпробу разводили физиологическим раствором и полученный результат умножалина разведение.Определение ХС сыворотки крови проводили с использованием набора реагентов для определения концентрации холестерина фирмы «Hospitex Diagnostics»(Италия) согласно инструкции производителя. Использовалась негемолизированная сыворотка или плазма крови.

Сыворотку и плазму отделяли от форменныхэлементов крови не позднее, чем через 1 час после забора крови. Пробы перемеошивали и инкубировали 10 минут при температуре 37 С. Измерение оптическойплотности опытной и калибровочной пробы относительно контрольной пробыпри длине волны 510 нм (500-546 нм) в кювете с длиной оптического пути 1 см.Содержание холестерина в сыворотке или плазме крови определяли по формуле:С=АпробыХ 5,2АкалибраторагдеС – концентрация холестерина в анализируемой пробе, ммоль/л;Апробы – оптическая плотность анализируемой пробы, ед.

опт. пл.;Акалибратора – оптическая плотность калибратора, ед. опт. пл;5,2 – содержание холестерина в калибраторе, ммоль/л.55При содержании холестерина в сыворотке или плазме крови выше 18,1 ммоль/лпробу разводили физиологическим раствором и полученный результат умножалина разведение.Уровень ХС ЛПНП определяли с помощью диагностического набора LDLCHOLESTEROL Direct liquid reagent – Холестерин ЛПНП прямой (жидкий реагент) фирмы «Hospitex Diagnostics» (Италия) согласно инструкции производителя.Условия измерения: длина волны 630 нм в кювете с длиной оптического пути 1см. Измерить оптическую плотность стандарта и пробы против реагентного бланка. Расчёт ЛПНП в сыворотке или плазме крови определяли по формуле:А пробаХ Конц.

стандарта = ЛПНП (мг/дл)А стандартМетод линеен до 400 мг/дл. При более высокой концентрации пробу следует развести физиологическим раствором 1+9 и результат умножить на 10. Детекционный предел составляет 1 мг/дл.Уровень ХС ЛПВП определяли с помощью диагностического набора HDLCHOLESTEROL Direct liquid reagent – Холестерин ЛПНП прямой (жидкий реагент) фирмы «Hospitex Diagnostics» (Италия) согласно инструкции производителя.оСыворотку крови перемешивали и инкубировали 5 минут при температуре 37 С.Условия измерения: длина волны 630 нм в кювете с длиной оптического пути 1 смс измерением оптической плотности стандарта и пробы против реагентного бланка.Расчёт ЛПНП в сыворотке крови определяли по формуле:А пробаХ Конц. стандарта = ЛПВП (мг/дл)А стандартМетод линеен до 220 мг/дл.

При более высокой концентрации пробу следует развести физиологическим раствором 1+9 и результат умножить на 10. Детекционный предел составляет 1 мг/дл.56Для оценки соотношения атерогенных и антиатерогенных липопротеиноврассчитывали холестериновый коэффициент атерогенности по формуле [ 86]: КА(ед) = (ХС – ХС ЛПВП)  ХС ЛПВП.Активность АлАТ определяли с помощью диагностического набора реагентов фирмы «Hospitex Diagnostics» (Италия) согласно инструкции производителя.Набор обеспечивает линейную область определения активности аланинаминотрансферазы в диапазоне от 10 до 440 Ед/л, отклонение от линейности не превышает 5%.

Чувствительность не более 5 Ед/л, коэффициент вариации результатов определения – не более 5%. Для образца использовалась сыворотка крови безгемолиза не позднее, чем через 1 час после забора крови. Условия измерения:длина волны 340 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см. Измерить оптическую плотность 3 раза с интервалом в 1 минуту и рассчитать изменение оптической плотности за 1 минуту (∆ОП/мин). Активность аланинаминотрансферазы определяли по формуле:A = ∆ОП/мин х 1746, гдеА – активность аланинаминотрансферазы, Ед/л;ΔОП/мин – изменение оптической плотности пробы за 1 минуту, ед.

опт. пл.;1746 – фактор пересчёта для выражения активности аланинаминотрансферазы вЕд/л (указывается в паспорте на набор).Примечание: 1Ед/л х 0,0167 = мкКат/лЕсли ΔОП/мин более или равно 0,200 образец следует развести физиологическимраствором 1+9 и результат умножить на 10.Активность АсАТ определяли с помощью диагностического набора реагентов фирмы «Hospitex Diagnostics» (Италия) согласно инструкции производителя.Набор обеспечивает линейную область определения активности аспартатаминотрансферазы в диапазоне от 10 до 440 Ед/л, отклонение от линейности не превышает 5%. Чувствительность не более 5 Ед/л, коэффициент вариации результатов определения – не более 5%. Для образца использовалась сыворотка крови безгемолиза не позднее, чем через 1 час после забора крови.

Условия измерения:57длина волны 340 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см. Измерить оптическую плотность 3 раза с интервалом в 1 минуту и рассчитать изменение оптической плотности за 1 минуту (∆ОП/мин). Активность аспартатаминотрансферазыопределяли по формуле:A = ∆ОП/мин х 1769, гдеА – активность аспартатаминотрансферазы, Ед/л;ΔОП/мин – изменение оптической плотности пробы за 1 минуту, ед. опт. пл.;1769 – фактор пересчёта для выражения активности аспартатаминотрансферазы вЕд/л (указывается в паспорте на набор).Примечание: 1Ед/л х 0,0167 = мкКат/лЕсли ΔОП/мин более или равно 0,200 образец следует развести физиологическимраствором 1+9 и результат умножить на 10.Определение креатинина сыворотки крови проводили с использованием набора реагентов для определения концентрации креатинина фирмы «Hospitex Diagnostics» (Италия) согласно инструкции производителя.

Набор обеспечивает линейную область определения концентрации креатинина в диапазоне от 30 до 2212мкмоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%. Чувствительность не более 25 мкмоль/л, коэффициент вариации результатов определения – не более 5%.Использовалась сыворотка крови без гемолиза. Условия измерения: длина волны505 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см.

Пробы перемешивали и через 30секунд преинкубации измеряли оптическую плотность А1 и через 60 секунд (время реакции) измеряли оптическую плотность А2. Рассчитывалась дельта оптической плотности ΔА = А2 – А1.Содержание креатинина в сыворотке крови определяли по формуле:С=ΔАпробыХ 177ΔАкалибраторагдеС – концентрация креатинина в анализируемой пробе, мкмоль/л;ΔАпробы – оптическая плотность анализируемой пробы, ед.

опт. пл.;ΔАкалибратора – оптическая плотность калибратора, ед. опт. пл;177 – содержание креатинина в калибраторе, мкмоль/л.58При содержании креатинина в сыворотке крови выше 2212 мкмоль/л анализируемую пробу разводили физиологическим раствором и полученный результат умножали на разведение.Определение мочевины сыворотки крови проводили с использованием набора реагентов для определения концентрации мочевины фирмы «Hospitex Diagnostics» (Италия) согласно инструкции производителя.

Набор обеспечивает линейную область определения концентрации мочевины в диапазоне от 2 до 50ммоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%. Чувствительность не более1 ммоль/л, коэффициент вариации результатов определения – не более 3%. Использовалась негемолизированная сыворотка крови не позднее, чем через 1 часпосле забора крови. Условия измерения: длина волны 340 нм в кювете с длинойоптического пути 1 см.

Пробы перемешивали и через 30 секунд преинкубации измеряли оптическую плотность А1 и через 60 секунд (время реакции) измеряли оптическую плотность А2. Рассчитывалась дельта оптической плотности ΔА = А2 –А1.Содержание мочевины в сыворотке крови определяли по формуле:С=ΔАпробыХ 8,325ΔАкалибраторагдеС – концентрация мочевины в анализируемой пробе, ммоль/л;ΔАпробы – оптическая плотность анализируемой пробы, ед. опт. пл.;ΔАкалибратора – оптическая плотность калибратора, ед.

опт. пл;8,325 – содержание мочевины в калибраторе, ммоль/л.При содержании мочевины в сыворотке крови выше 50 ммоль/л анализируемуюпробу разводили физиологическим раствором и полученный результат умножалина разведение.Иммунологическое исследование крови.Кровь для иммунологического исследования брали у больных из кубитальной вены с 8 ч до 9 ч утра натощак не менее чем через 12 часов после последнегоприёма пищи перед выпиской из стационара.

Для исследования использоваласьсыворотка крови без гемолиза после отделения от форменных элементов крови не59позднее, чем через 1 час после забора крови. Определение иммунологических показателей проводилось на автоматическом иммуноферментном анализаторе«TRITURUS» (Diagnostic Grifols S.A. Испания).Определение титра IgG антител к Helicobacter pylori проводилось методомтвёрдофазного иммуноферментного анализа набором «ImmunoComb® II Helicobacter pylori IgG» (“Orgenics LTD”, Израиль). В набор входит положительныйконтроль (анти-Н. pylori IgG) и отрицательный контроль, которые должны использоваться при анализе каждой группы образцов.