Диссертация (Разработка, стандартизация и изучение биологической активности плёнки спермицидного действия, на основе сапонинов Styrax Officinalis L), страница 13

3.19. Эндокарп в плане (а,с) и поперечные срезыэндокарпа (б, д)794. Плодоножка:Плодоножка имеет цилиндрическую форму и густо покрыт звезчатымитрихомами (рис. 3.20: а, б).а (СЭМ)б (СЭМ)Рисунок. 3.20. Плодоножка покрыта волосками.5. Семенная кожура:Семеннаякожураоченьтвердаяидажепослеразмачиваниямикропрепараты из нее можно приготовить только соскабливанием с помощьюскальпеля.

Клетки семенной кожуры крупные, толстостенные, вытянутые поформе и заостренные с 2-х концов. (рис. 3.21: а, б, рис.3.22: а). Внутренняя частьсеменной кожуры (соскобленные кусочки были перевернуты) состоит изполигональных,иногдаокруглыхклетоксхорошозаметнымипорами(рис. 3.22: б).Клетки, формирующие слой семенной кожурыРисунок. 3.21. Клетки семенной кожуры Стиракса лекарственного80а – наружная поверхность (СЭМ)б – внутренняя структура (СЭМ)Рисунок. 3.22. Семенная кожура.6. Эндосперм и зародыш:Эндосперм покрыт тегменом, тонкой пленкой, выполняющей механическуюфункцию (рис 3.23.).Рисунок 3.23.

Тегмен эноспермаКлетки эндосперма мелкие, полигональные, содержат капли масла масла(рис. 3.24: б).а (ОМ) КлеткиэндоспермаКапли маслаб (ОМ)81с (СЭМ)д (СЭМ)Рисунок.3.24. Эндосперм и зародыш Стиракса лекарственного.7. Пленка между семенамиПленка между семенами состоитиз сильно вытянутых тонкостенныхклеток под которыми ведны очертанияподлежащих тканей (рис 3.25).Рисунок. 3.25. Пленка между семенамиПолученные нами данные представлены в проекте НД на изученное сырье(Околоплодники стиракса лекарственного) представлены в приложении 4.Следующий, после раздела «Подлинность» в ФС на ЛСР идет раздел«Определение основных групп биологически активных веществ» (БАВ). Дляразработки этого раздела мы применили различные современные методыхимического и физико-химического анализа состава БАВ в околоплодникахстиракса лекарственного.3.2.ИзучениехимическогосоставаоколоплодниковстираксалекарственногоНормативная документация разрабатывается нами для того, чтобы сырьестиракса лекарственного можно было использовать в качестве источника дляполучения растительной субстанции – сухого экстракта околоплодников стираксалекарственного, содержащего сумму сапонинов.82Нами были проведены основные качественные реакции на БАВ воколоплодникахстираксалекарственного(StyraxofficinalisL).Условияпробоподготовки: Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц,проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,5 мм.

Около 1 гизмельченного сырья помещают в плоскодонную колбу вместимостью 50 мл иприбавляют 20 мл спирта этилового 70%. Содержимое колбы нагревают наводяной бане в течение 30 мин с обратным холодильником. Колбу с содержимымохлаждают до комнатной температуры, фильтруют через складчатый бумажныйфильтр в пробирку вместимостью 20 мл. Результаты представлены в таблице(3.1).Таблица 3.1. – Качественное определение наличия БАВ в околоплодникахстиракса лекарственногоГруппа БАВСапониныАлкалоидыФлавоноидыДубильныевеществаРезультат позитивной реакцииреакцияпенообразованияНаличиегруппыБАВобразование пена+реакция гемолизаобразовалась лаковая кровь+Шейблеражелтоватый осадок-Драгендрофаоранжево-бурая окраска-Вагнера-бушардабурый цвет-Раствор танина 1%белый осадок-Натрия нитропруссидкрасновато-коричневый осадок-С железа (III) хлоридомтемно-зеленое окрашивание+С раствором щелочижелтое окрашивание+Вид реакцииЦианидиновая реакцияпо БриантуС раствором белка(желатина)С железоаммониевымиквасцамиразделение на 2 фазы: водныйслой – более интенсивное окрашивание+проявление мути+черно-зеленого окрашивания+Как видно из представленной таблицы, реакции подтверждающие наличиесапонинов – положительные, а также флавоноидов и дубильных веществ.833.3.Изучениехарактеристиксырья«околоплодникистираксалекарственного» для составления раздела НД "испытания".Раздел ФС Испытания, состоит из нескольких покозателей: Влажность; золаобщая; зола, нерастворимая в 10 % растворе хлористоводородной кислоты;размер частиц; посторонние примеси; тяжелые металлы; радионуклиды;остаточные количества пестицидов; микробиологическая чистота; количественноеопределение; упаковка, маркировка и транспортирование; хранение.Мы изучили характеристики сырья и разработали нормы для некоторых изэтих показателей.

Работа над созданием норм остальных показателей будетпродолжена.Определениевлажностирастительногосырьявысушенныхоколоплодников стиракса лекарственногоПроведены измерения показателя влажность для 5-ти проб измельченногосырья стиракса лекарственного. Максимальное значение влажности составило5,2% (таб. 3.2.).Таблица 3.2. – Результаты определения влажности околоплодников стираксалекарственногоn=15p=0,95В%fTp,f142,145̅ , %3,775SSr , %0,7419,6∆0,41̅ ± ∆3,8±0,41В НД на измельченный околоплодник стиракса лекарственного предлагаемввести норму влажности – не более 4,5 %.Определение общей золы и золы, нерастворимой в растворе кислотыхлористоводородной 10%Согласно методу, приведенному в п.2.2.2.3, нами получены результатыиспытаний общей золы и золы нерастворимой в хлористоводородной кислоте для4 образцов. Данные представлены в таблице 3.3.84Таблица 3.3.

– Результаты определения золы сырья околоплодников стираксаn=4p=0,95fобщая зола3̅ , %0,93SSr , %0,044,31∆0,06̅ ± ∆0,93±0,06зола нерастворимая в 10%растворе хлористоводородной 3 0,096 0,017 17,516 0,027 0,096±0,027кислотыВ НД на измельченный околоплодник стиракса лекарственного предлагаемввести норму общей золы – не более 1,0 %, золы нерастворимой вхлористоводородной кислоте – не более 0,1 %.Изучение дисперсного состава измельченного сырья околоплодниковстиракса лекарственного с помощью ситового анализаДля контроля качества лекарственного растительного сырья обязательнонадо регламентировать степень его измельченности. Этот показатель нужен сцелью недопущения излишнего измельчения сырья на этапе разработкитехнологических процессов. Для установления нормы «степень измельченности»сырья околоплодников стиракса лекарственного необходимо провести ситовой(дисперсный) анализ.

Нами применялась аналитическая проба массой 250 г откаждой опытной партии. Ситовой анализ проводили в 6 повторностях.В результате дисперсного анализа нового вида ЛРС «Околоплодникистиракса лекарственного измельченные», было установлено, что основнуюфракцию составляют частицы размером менее 2,5 мм, таблица (3.4.).Таблица 3.4. – Фракционный состав частиц в опытных партиях околоплодниковстиракса лекарственного, %Размер частицЧастиц на сите 2,5 ммЧастиц на сите 2 ммЧастиц на сите 1 ммЧастиц на сите 0,5 ммЧастиц на сите 0,25 ммЧастиц сквозь сито 0,25 ммКоличество частиц (%)Партия 1Партия 20,013±0,0080,020±0,00911,637±0,45313,406±0,38736,599±0,39935,406±0,31222,165±0,17920,027±0,21414,946±0,29718,223±0,23514,643±0,41112,979±0,34985Основная масса частиц при ситовом анализе остается на ситах 1 и 0,5 мм.Таким образом, нами предложено установить норму измельченности: частицразмером более 2 мм, не более 15%; частиц размером менее 0,25 мм, не более20%.Коэффициентводопоглощения:определяливсоответствиистребованиями ГФ XIII РФ - ОФС 1.5.3.0012.15, результаты представлены втаблице (3.5.).Таблица 3.5.

– Определение коэффициента водопоглощенияпроба1234Квп2,352,42,32,15Врезультатепроведенных̅2,3SSr , %0,1084,696исследованийкоэффициентапоглощения̅ ± ∆0,172 2,3±0,17(таблицакоэффициент водопоглощения ЛРС, равный 2,3 ±0,17.Определение∆3.5.)летучихопределенэкстрагентов:определяли для метанола и спирта 96%, после получения извлечения всоответствии с ГФ XIII РФ - ОФС.1.4.1.0019.15 «Настойки».Таблица 3.6. – Определение коэффициента поглощения метанол/спирт 96%экстрагентКпэ (мл/г)SSr , %Метанол̅0,770,012спирт 96%0,730,011̅±∆1,590∆0,0190,77 ± 0,0191,5210,0170,73 ± 0,017Таким образом, установлено, что измельченное сырье – околоплодникистиракса лекарственного имеют Кпэ (метанол) – 0,77, и Кпэ (спирт 96%) – 0,73(табл.

3.6)Количественное определение экстрактивных веществ:Для определения содержания суммы биологически активных и балластныхвеществ в сырье околоплодники стиракса лекарственного, использовали согласноГФ XIII РФ - ОФС.1.5.3.0006.15 метод 2 – многократную экстракцию (см. Г2, П.862.2.2). Анализ проводили в 4 повторностях и результаты представлены в таблице(3.7).Таблица 3.7 – Содержание экстрактивных веществ в сырьеэкстрагентМетанолСодержание экстрактивных веществ в сырье (%)̅60,2SSr , %0,5530,919∆0,017̅±∆60,2 ± 0,017Поэтому при установлении нормативных требований к содержаниюэкстрактивныхвеществ,предлагаемввестиследующиенормы:дляоколоплодников стиракса лекарственного, при проведении экстракции метанолом– не менее 60 %.Полученные нами данные представлены в проекте НД на изученное сырье(Околоплодники стиракса лекарственного) представлены в приложении № 4.87ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 31.Проведенмакроскопическийимикроскопическийанализрастительного сырья плодов и околоплодников стиракса лекарственного,выявлены диагностически значимые признаки в анатомическом строении,позволяющие устанавливать подлинность сырья.

Результаты проиллюстрированыоригинальными микрофотографиями.2.Впервые с помощью сканирующей электронной микроскопии (СЭМ)изучены и иллюстрированы оригинальными микрофотографиями плоды стираксалекарственного. В том числе изучены особенности архитектуры поверхностиоколоплодника и поперечного среза через экзокарп, мезокарп и эндокарп,диагностические признаки семени и семенной кожуры.3.В околоплодниках стиракса лекарственного установлено наличиесапонинов, что подтверждено качественными реакциями.4.Изучены показатели сырья «околоплодники стиракса лекарственного»в соответствии с требованиями ГФ XIII: влажность – не более 4,5 %, общая зола –не более 1,0 %, зола нерастворимая в хлористоводородной кислоте – неболее 0,1 %.5.Установленфракционныйсоставсухихизмельченныхоколоплодников стиракса лекарственного и предложны нормы для контроляизмельченности: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,25мм не более 20%, размером более 2 мм, не более 15%.6.Разработан проект НД на изученное сырье «Околоплодники стираксалекарственного» по ряду показателей: внешние признаки, микроскопическиепризнаки, определение основных групп биологически активных веществ,влажность, зола общая, зола не растворимая в 10% растворе НСl, измельченность,коэффициентвеществ.водопоглощения,количественноеопределениеэкстрактивных88ГЛАВА 4.

РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИЗУЧЕНИЕЭКСТРАКТА СТИРАКСА ЛЕКАРСТВЕННОГОВ целях создания контрацептивных средств для Сирийских женщин изместного сырья были изучены околоплодниках стиракса и подтверждено наличиесапонинов. Следующим этапом явилось выделение и очистка суммы сапонинов ввиде сухого экстракта, стандартизация и характеристика его биологическихсвойств.4.1. Определение технологических параметров выделения сухогоэкстракта из околоплодников стиракса лекарственногоПоскольку методика выделения сапонинов из околоплодников стираксалекарственного разрабатывалась впервые в качестве основных технологическихпараметров рассматривали: метод экстрагирования, экстрагент, дисперсностьрастительного материала и время экстрагирования.4.1.1.

Обоснование метода экстрагирования:Циркуляционные экстрагирование с помощью аппарата Сокслета являетсяодним из широко распространенных способов извлечения целевых БАС.Благодаряпостояннойциркуляциилетучегоэкстрагентадостигаетсямаксимальный выход экстракта при небольшом расходе экстрагента. Приборзанимает мало места и имеется почти в каждой химической и технологическойлаборатории. В связи с вышесказанным, мы выбрали именно этот вид экстракции.4.1.2. Выбор экстрагента:При выборе экстрагента для получения сухого экстракта околоплодниковстиракса лекарственного (СЭСЛ) исходили из литературных данных орастворителях, обладающих высокой способностью растворять сапонины – этоэтанол и метанол. Был оценен выход СЭСЛ в пересчете на абсолютно сухое сырьепри экстрагировании метанолом и спиртом этиловым с содержанием этанола70%, 90% и 96 %, результаты приведены в таблице 4.1.В ходе эксперимента нами установлено, что максимальный выход СЭСЛнаблюдался при использовании метанола (без разбавления).89Таблица 4.1.