Диссертация (Разработка, стандартизация и изучение биологической активности плёнки спермицидного действия, на основе сапонинов Styrax Officinalis L), страница 14

– Выход СЭСЛ в пересчете на абсолютно - сухое сырье % (w/w) сиспользованием разных растворителей с различными концентрациями.12339,3539,5039,55спирт96%31,5031,7032,10Ср. знач.39,4631,76Экстрагентвыход СЭСЛ %метанолспирт90%32,1733,0932,62спирт70%35,7035,1734,8032,6235,22Из данных таблицы 4.1. следует, что оптимальная концентрация этиловогоспирта для экстрагирования сапонинов 70% и обеспечивает самый высокий выходсухого экстракта, по сравнению с другими концентрациями спирта. При том, чтовыход СЭСЛ при извлечении метанолом 78,90%, а при извлечении 70% спиртом 70,45%, последний выбран в качестве экстрагента из соображений безопасности.4.1.3. Изучение влияния степени дисперсности сырья:Поскольку полнота извлечения БАВ зависит, в том числе, и от степенидисперсности экстрагируемого материала, была проведена оценка влиянияразмера частиц околоплодника стиракса на выход СЭСЛ. Измельченные спомощью ножевой лабораторной мельницы околоплодники стиракса просеивалина виброустановке через набор сит с отверстиями 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,25 мм.Основная масса частиц при ситовом анализе оставалась на ситах 1,0 и 0,5 мм.Частиц, не проходящих сквозь сито с размером отверстий 2,0 мм, менее 15%;частиц, проходящих сквозь сито с размером отверстий 0,25 мм, менее 16%(Таблица 3.4.).В ходе экстракции, среднее значение выхода СЭСЛ-36,99% наблюдаетсядля фракции частиц 0,25-0,5 мм.

Близкие к максимальному выходу значения мыполучили для фракций 1,0-2,0 мм –35,06% и 0,5-1,0 мм – 32,38%. Работа скрупными частицами удобней, особенно при использовании аппарата Сокслета,поскольку экстрагирование сырья с размером частиц меньше 0,25 мм приводило куплотнению материла, что являлось препятствием проникновению растворителя,поэтому мы наблюдали среднее значение минимального выхода 8,35% (Рис. 4.1.).90выход СЭСЛ %403530252015105036.9935.0632.38на сите 0,25на сите 0,5на сите 18.35сквозь сито0,25размеры частиц (мм)Рисунок 4.1. Среднее значение выхода СЭСЛ в пересчете на абсолютно - сухоесырье% (w/w) из сырья с различной степенью измельченностиДальнейшая работа проводилась с сырьем измельченном до показателя:частиц размером более 2 мм, не более 15%; частиц размером менее 0,25 мм, неболее 20%.4.1.4.

Изучение влияния времени экстракции:Поскольку существенным экономическим показателем технологическогопроцесса является скорость экстракции, была оценена полнота извлечения взависимости от времени и количества сливов. Об истощении материала мысудили по отсутствию окраски сливающегося раствора. Первый слив былнасыщенногокоричневогоцвета.Скоростьпрохожденияодногоциклаэкстракции составляла 1 слив в 40 минут (1,5 слив/час).В ходе эксперимента было установлено, что обесцвечивание вытяжкинаступает к 8-10 циклу, что соответствует 6-7 часам экстрагирования, сиспользованием ТСХ для оценки полноты экстракции. Для этого промежуткавремениустановленмаксимумвыходаСЭСЛ.Припродолжительностиэкстракции менее 6 часов мы фиксировали низкий выход сухого экстракта, и приувеличении времени экстракции до 8, 9, 10, 11, 13 часов, не происходилоповышения выхода СЭСЛ, что говорит о нерентабельности увеличения времениэкстракции.

Результаты данного исследования представлены в таблице (4.2.).91Таблица 4.2. – Выход СЭСЛ в пересчете на абсолютно - сухое сырье % (w/w)Время экстракции, часыВыход СЭСЛ, %430,70531,81634,07834,29934,661034,641134,581334,43Таким образом, из полученных экспериментальных данных следует, чтооптимальное количество циклов экстракции 8-10 и время 6-7 часов.4.2. Разработка методики выделения СЭСЛЗа основу методики принята циркуляционная экстракция в аппарате типаСокслетаиранееустановленныетехнологическиепараметры:степеньизмельченности сырья и время экстракции, а в качестве экстрагента использован70% этанол.Масса навески измельченных высушенных околоплодников стираксалекарственного составляла 60,0 г. Объем растворителя по отношению к сырью1:5. Точную навеску измельченного сырья помещали в патрон из фильтровальнойбумаги и опускали в экстрактор аппарата Сокслета с рабочим объемом 250 мл.Экстракцию проводили при температуре 55-60°С до полного извлеченияэкстрактивных веществ, которое контролировалось по обесцвечиванию сливов.Полученную в колбу-приемник смесь полностью упаривали на ротационномиспарителе в вакууме (230 мБар) при 66°С.

Густой экстракт последовательнообрабатывали этилацетатом (1:10 вес/объем) и н-бутанолом (1:30 вес/объем). Приподкислении концентрированной хлористоводородной кислотой выпадал осадок,который отфильтровывали на воронке с бумажным фильтром и сушили на92воздухе при комнатной температуре в течение 24 ч в сухую погоду и до 48 ч привлажном воздухе до полного испарения растворителей.Технологическая схема отражает этапы экстракции и очищения сапониновиз сырья «околоплодники стиракса лекарственного» и представлена в виде схемы(рис.

4.2.).Высушенные околоплодникистиракса лекарственногоМетанол*/спирт**Экстракция циркуляционная ваппарате СокслетаОтработанное сырьеСпиртовая вытяжкаОтгон метанола*/спирта**Упаривание на роторномиспарителеЭтилацетатГустой экстрактФильтрацияРекуперацияЭтилацетатный слойОтгонэтилацетатаУпаривание на роторномиспарителен-бутанол 10%Очищенный экстрактВода очищеннаяОсаждение сапонинов в фильтратепри подкислении раствором конц.HCl до pH= 1,0ПримесиПримесиОтделение осадка сапониновфильтрациейВода + HClОтгон воды, сушкаВодаВыход СЭСЛ 32%** до 39%*Суммарное содержание сапонинов не менее27%Рисунок 4.2.

Технологическая схема выделения СЭСЛ из высушенныхоколоплодников стиракса лекарственногоСухой очищенный экстракт стиракса представляет собой аморфныечастицы от светло-кремового до кремового цвета с серым оттенком, соспецифическим запахом.93Для подтверждения наличия в полученном экстракте сапонинов, былипроведены пробы, ранее использованные для установления их наличия воколоплодниках. Реакции пенообразования и гемолиза эритроцитов показалиположительный результат, что подтверждает правильность процедуры выделениясапонинов из околоплодников стиракса.Разработан проект НД на полученный экстракт «Стиракса лекарственногоэкстракт сухой (СЭСЛ)» в приложении № 5.4.3.Изучение химического состава сухого экстракта околоплодниковстиракса лекарственногоПолученный из околоплодников стиракса лекарственного по предложеннойсхеме сухой экстракт необходимо изучить с использованием различных методовдля установления его состава, определения содержания сапонинов и выбораметодикстандартизации.Предварительнобылипроведеныосновныекачественные реакции на сапонины.

Результаты представлены в таблице (4.3.).Таблица 4.3. – Качественное определение сапонинов в СЭСЛкачественныереакции,основанные на1.физическихсвойствах сапонинов2.биологическихсвойствах сапониновреакцияреакцияпенообразованияобразовалась пена, равная в обеих пробирках(0,1М HCl, 0,1М NaOH) по объему иустойчивости, что говорит о наличии в пробетритерпеновых сапонинов.реакция гемолизаобразовался белый опалесцирующий раствор«лаковая» кровь, в котором через несколькоминут выпал осадок в виде белых хлопьев.Надосадочная жидкость стала прозрачной. Впробирке с контролем не наблюдалосьизменений.хлороформа + конц.серной кислоты3.химическихсвойствах сапониновРезультатРеакция СаньеРеакцияСальковского+H2SO4концентрированнаяпоявиться желтое окрашивание, постепеннопереходящее в красное.образовалось красное окрашивание, котороеподтверждает наличие в пробе тритерпеновыхсапонинов.нижний слой окрашен в оранжевый цвет.красно-фиолетовое окрашивание94Как видно из представленной таблицы, все реакции, подтверждающиеналичие сапонинов, – положительные.

По реакции пенообразования и реакцииСанье можно сделать вывод, что в изучаемом экстракте преобладаюттритерпеновые сапонины.Для более глубоко изучения сухого экстракта околоплодников стираксалекарственного была выделена сумма сапонинов стиракса (ССС) из сухогоэкстракта с помощью препаративной ТСХ и в дальнейшем все исследованияпроводились образца СЭСЛ и ССС.4.3.1. Качественное определение сапонинов в СЭСЛ и выделение суммысапонинов стиракса методом ТСХРаствор стандартного образца (СО PQS). Около 0,05 г (точная навеска)стандартного образца Purified Quillaia Saponin HRS, EP standart растворяют в 2 млметанола, перемешивают.Испытуемый раствор СЭСЛ. Около 0,6 г (точная навеска) СЭСЛрастворяют в 2 мл метанола, перемешивали в течение 1 мин, затем фильтровали.На линию старта аналитической хроматографической пластинки «MerkKGaA, Германия, 1.05626.» со слоем силикагеля с флуоресцентным индикаторомразмером 10 × 20 см на алюминиевой подложке наносят 10 мкл (0,010 мл)испытуемого раствора СЭСЛ и 10 мкл раствора стандартного образца (СО PQS).Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, ее помещают в камерупри температуре 20°С со смесью растворителей: хлороформ-метанол-вода (6:3:1).Пластину вынимают из камеры после прохождения фронта растворителей 15 см,сушатвтечение5минут,затемопрыскиваютрастворомвзвесидефибринированной крови.После проведения эксперимента, на основании полученных результатов,рассчитывали показатели Rf (рис.