Диссертация (Разработка и исследование комбинированного лекарственного препарата для повышения работоспособности на основе родиолы розовой), страница 13

Результаты исследования представлены в таблице 4.5.Таблица 4.5 Числовые показатели растительного сырья шиповника собачьего№ПоказательЗначениеп/ппоказателя, %1.Аскорбиновая кислота8,0±0,12.Влажность6,8±0,13.Другие части шиповника (кусочки веточек, чашелистиков и0,51±0,03плодоножек)4.Зола общая5.Измельчённые части плодов, проходящие сквозь сито с1,27±0,032,0±0,3отверстиями диаметром 3 мм6.Минеральная примесь0,3±0,17.Органическая примесь0,2±0,28.Частицы сырья, утратившие окраску (побуревшие,0,7±0,2потемневшие, выцветшие)Учитывая характер биологически активных соединений, представленныхв плодах шиповника собачьего, применительно к данному виду растительногосырья, различными авторами разработаны разнообразные методы экстракции,основная цель которых в максимальном истощении лекарственного сырья, иувеличении выхода действующих веществ [78, 92, 93, 96].РаботамисотрудниковВИЛАРустановлено,чтооптимальнымтемпературным режимом экстракции, с учётом наличия термолабильныхвеществ, является диапазон 50-55 °С при соотношении сырьё : экстрагент, непревышающем 1:10 [34].Актуальным также остается вопрос измельчения сырья.

Алтарев С. Н.использовал измельченные плоды, в то время как, в исследованиях Мясникова86Д.Н. использованы цельные плоды [93, 94]. Данное обстоятельство может бытьобъяснено различными подходами к получению целевого продукта: доказано,что измельчение плодов шиповника приводит к повышению выхода пектинов, икобразованиюопалесцирующихизвлечений[93].Однако,данноеобстоятельство в нашем исследовании не является нежелательным, т.к.предполагалось впоследствии получение сухого экстракта.

Повышение выходапектинов и, соответственно, их присутствие в готовом продукте, не влияет наего актопротекторную активность, что доказано работами [55, 95].Среди всего многообразия схем экстрагирования БАВ из плодовшиповника был выбран метод, предложенный Давыдовой В.Н., которыйзаключается в экстрагировании измельченных плодов шиповника водойочищенной в соотношении 1:10 при постоянной температуре 50 ± 5 °С, методомдробной мацерации, где время 1-ой экстракции – 2 часа, 2-й – 1,5 часа, 3-ей – 1час 15 минут. Далее извлечения объединяют, отстаивают в течение 24 часов притемпературе 2-8 °С, фильтруют и направляют на стадию упаривания подвакуумом [34].

Технологическая схема, предложенная Давыдовой В.Н., былавзята за основу исследований, с внесением в неё некоторых изменений:использованиенеизмельчённогосырьяициркуляцияэкстрагента,присохранении соотношения 1:10.Экстракция с принудительной циркуляцией экстрагента является однимиз способов ускорения процесса мацерации и повышения выхода готовогопродукта.

На производстве этот способ может быть реализован при помощимацерационного бака с ложным дном и насоса, который прокачивает экстрагентдо достижения равновесной концентрации извлечения во всем объемеэкстрактора.В ходе отработки процесса экстракции, после 2 часовой экспозициинастаивания сырья при помощи экстрагента — воды очищенной (температура50-55˚ С) в соотношении 1:10, сливали образовавшуюся концентрированнуювытяжкуобъёмом1/5отобщегообъемаизвлечения,ипроводилипринудительную циркуляцию оставшегося экстрагента с помощью насоса.87Предварительно было определено время, в течение которого должен былциркулировать экстрагент. С этой целью проводили экстракцию методом 3-хкратной мацерации как измельчённого, так и цельного сырья с циркуляциейэкстрагентавтечениеразличныхрезультаты приведены в таблице 4.6.промежутковвремени.Полученные88Таблица 4.6 - Зависимость выхода рутина, кверцетина, аскорбиновой и хлорогеновой кислот от времени циркуляцииэкстрагентаВремяСодержание аскорбиновойСодержание хлорогеновойСодержание кверцетина,циркуляции,кислоты, мкг/млкислоты, мкг/млмкг/млмин.Содержание рутина, мкг/млИзмельчённые Неизмельчён- Измельчённые Неизмельчён- Измельчённые Неизмельчён- Измельчённые Неизмельчёнплодыные плодыплодыные плодыплодыные плодыплодыные плоды2042,41±0,0238,11±0,040,08±0,040,02±0,040,055±0,040,036±0,010,103±0,020,101±0,033053,33±0,04*50,19±0,03*0,20±0,04*0,18±0,01*0,061±0,02*0,056±0,01*0,118±0,02*0,116±0,02*4049,12±0,02*47,17±0,02*0,11±0,03*0,14±0,03*0,062±0,02*0,044±0,02*0,107±0,03*0,110±0,02*Примечание.

Число наблюдений (n) = 5.* - Достоверные различия с результатом экстрагирования с циркуляцией в 20 мин. (Р<0,05)..89Исследования показали, что циркуляция сверх 30 минутной экспозициине является целесообразной, т.к. при дальнейшем увеличении временициркуляции не происходит увеличения выхода действующих веществ.Принимая во внимание результаты проведённого исследования, быловыбрано 4 варианта экстрагирования, из которых необходимо было выбратьнаиболее эффективный. Первый - проводили в соответствии с методикой,предложенной Давыдовой В.Н.

В перколятор засыпали 10,0 г предварительноизмельчённыхплодовшиповникасобачьегоизаливали100 млводыочищенной, предварительно нагретой до 50-55 °C. Настаивали в течение 2 ч.Затем декантировали полученный экстракт и снова заливали горячей водойочищенной на 1 час 30 минут, по истечении этого времени, экстрактдекантировали и проводили 3-ю стадию экстракции в течение 1 часа 15 минут.Готовый раствор снова декантировали и объединяли сливы.Второй метод являлся аналогичным первому, за исключением того, чтоиспользовали неизмельчённое сырьё. Третий метод повторял первый, но приэтом,вовремястадиимацерации,декантироваликонцентрированноеизвлечение в количестве 1/5 от общего объёма, а оставшееся извлечениеподвергали циркуляции.

Четвёртый метод был аналогичен третьему, однако,использовали неизмельчённые плоды. Различия методов экстрагированияпредставлены в таблице (табл. 4.7).Таблица 4.7- Использованные методы экстракцииНомерСпособ экстракцииИзмельчение сырьяЭкстрагентметодаЦиркуляцияэкстрагентаМетод 13-кратная мацерация+Вода очищенная—Метод 23-кратная мацерация—Вода очищенная—Метод 33-кратная мацерация+Вода очищенная30 мин.Метод 43-кратная мацерация—Вода очищенная30 мин.Затем изучали содержание действующих веществ в извлечениях методомградиентной ВЭЖХ, описанном в 3-й главе (раздел 3.1.). Результатыисследования представлены в таблице 4.8.90Полученные извлечения представляли собой жидкость тёмно-коричневогоцвета со специфическим запахом, извлечения из неизмельчённых плодовобладали меньшей опалесценцией.Результаты исследования свидетельствуют о том, что метод трёхкратноймацерации из измельчённых плодов шиповника с циркуляцией экстрагента, сточки зрения полноты извлечения действующих веществ, являлся наиболеепредпочтительным, т.к.

согласно полученным данным, в экстракте, полученномМетодом 3 содержание аскорбиновой кислоты и флавоноидов в среднем на28 % больше, чем в экстракте, полученном Методом 1 (таблица 4.8).Полученное методом 3-кратной мацерации с циркуляцией экстрагентаизвлечение отстаивали в течение суток при температуре 2-8 °С. Затем экстрактфильтровали через фильтровальную бумагу марки Ф и упаривали с помощьюваккум-выпарного аппарата (BUCHI, Швейцария) при давлении 72 мБар,температуре бани 60 °С и скорости вращения колбы 120-140 об/мин.

Затемупаренное извлечение помещали в морозильную камеру с температурой 25 °Сна 6-8 часов и высушивали в сублимационной сушилке HetoDrywinner CT/DW60E с вакуумно-роторным насосом RZ 2 (Vacuumbrand, Германия) при давлении0,010 мБар и температуре 21 °С, в течении не менее 18 часов (рисунок 4.2).91Таблица 4.8 - Cодержание биологически активных веществ в извлечениях плодов шиповникаСодержание аскорбиновойСодержание хлорогеновойСодержание кверцетина,Содержание рутина,кислоты, мкг/млкислоты, мкг/млмкг/млмкг/млМетод 149,10±0,030,143±0,020,041±0,020,112±0,03Метод 246,54±0,02*0,134±0,020,050±0,020,117±0,04Метод 354,92±0,03*0,201±0,010,063±0,030,121±0,01Метод 445,64±0,02*0,161±0,010,051±0,040,119±0,04МетодэкстракцииПримечание.

Число наблюдений (n) = 5.* - Достоверные различия с результатом экстрагирования методом 1 (Р<0,05).92ВР.1.1Подготовка водыочищеннойВР.2.1ПодготовкасырьяВР.2.2ПодготовкаперсоналаВР.2.3ПодготовкаоборудованияВР.3.1ИзмельчениесырьяВР.3.2ПросеиваниесырьяТП.4.1Подготовкаспиртаэтилового 40 %ТП.4.2ЭкстрагированиесырьяТП.4.3Очистка ифильтрованиеизвлеченияТП.4.4КонцентрированиеизвлеченияТП.5.1СушкаизвлеченияВР.1ВР.2Кт, КмВР.3Кт, КхПодготовка водыПодготовкапроизводстваПодготовкасырьяПотериТП.4ПолучениеКт, Кх жидкого экстрактаПолучениесухого экстрактаОтходыУМО.6Кт, Кх,КмУпаковка в таруиз тёмногостеклаПотериТП.6Хранение взащищенном отсвета местеТП.5Кт, КхРисунок 4.3 - Технологическая схема получения сухого экстракта изизмельчённых плодов шиповника собачьего методом 3-х кратной мацерации сциркуляцией экстрагента93Проводили определение содержания основных действующих веществ вполученном сухом экстракте шиповника собачьего по методикам, описанным в3-й главе.

Результаты исследования представлены в таблице 4.9.Таблица 4.9–Анализ содержания действующих веществ в сухом экстрактеплодов шиповника собачьегоПоказателиСодержание, мкг/мгАскорбиновая к-та52,17±0,01Хлорогеновая к-та0,188±0,02Кверцетин0,06±0,01Рутин0,11±0,01Длястандартизациисухогоэкстракташиповникасобачьегорекомендуется определение аскорбиновой кислоты, так как это соединениеспецифично для данного вида ЛРС и содержится в максимальных количествах.Кроме того, проводили изучение показателей качества сухого экстракташиповника собачьего ГФ РФ (ОФС1.4.1.0021.15 «Экстракты») (табл. 4.10).Таблица 4.10 – Результаты изучения показателей качества сухого экстракташиповника собачьегоПоказательОписаниеНасыпной объемТяжёлые металлыПотеря в массе привысушиванииРезультатопределенияМетод определенияПорошок коричневого Визуальноцветасоспецифическимзапахом0,48±0,30 г/млГФ РФ,ОФС.1.4.2.0016.15Степень сыпучестипорошков0,003±0,0008 %ГФ РФ,ОФС.1.2.2.2.0012.154,5±0,2 %ГФ РФОФС.1.2.1.0010.15СоостветствиеГФ РФСоотв.Соотв.Не более 0,01%Соотв.Соотв.Технологическая схема получения сухого экстракта из плодов шиповникасобачьего представлена на рисунке (Рис.