Автореферат (Разработка способа получения субстанции антимикробного действия на основе ройлеанонов из корней шалфея лекарственного)

На правах рукописиБУЛУШЕВА МАРИЯ КОНСТАНТИНОВНАРАЗРАБОТКА СПОСОБА ПОЛУЧЕНИЯ СУБСТАНЦИИАНТИМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ НА ОСНОВЕ РОЙЛЕАНОНОВ ИЗКОРНЕЙ ШАЛФЕЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозияАВТОРЕФЕРАТдиссертации на соискание ученой степеникандидата фармацевтических наукМосква – 20182Диссертационная работа выполнена в Федеральном государственномбюджетном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательскийинститут лекарственных и ароматических растений» (ФГБНУ ВИЛАР)Научный руководитель:кандидат химических наукСавина Аэллита АлексеевнаОфициальные оппоненты:Бубенчикова Валентина Николаевна – доктор фармацевтических наук,профессор, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждениевысшего образования «Курский государственный медицинский университет»Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра фармакогнозии иботаники, заведующая кафедройПотанина Ольга Георгиевна – доктор фармацевтических наук, Федеральноегосударственное автономное образовательное учреждение высшего образования«Российский университет дружбы народов», Центр научных исследований иразработок Центра коллективного пользования (Научно-образовательный центр),директорВедущая организация:Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждениевысшего образования «Самарский государственный медицинский университет»Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СамГМУМинздрава России)Защита диссертации состоится «___» ___________ 2018 г.

в _____ часов назаседании диссертационного совета Д 208.040.09 при ФГАОУ ВО Первый МГМУим. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) по адресу:119019, г. Москва, Никитский бульвар, д.13.С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной медицинскойбиблиотеке ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России(Сеченовский Университет) по адресу: 119034, г.

Москва, Зубовский бул., д. 37/1 ина сайте организации http://www.sechenov.ruАвтореферат разослан «___» __________ 2017 г.Ученый секретарьдиссертационного совета Д 208.040.09доктор фармацевтических наукпрофессорДемина Наталья Борисовна3ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫАктуальность темы исследования Препараты антибактериального действия внастоящее время занимают большой удельный вес среди всех медикаментозных средств ипотребность в них не только не уменьшается, а с течением времени растет.

Инфекционныеболезни на протяжении всей истории были огромной проблемой для человечества. После того,как было установлено, что инфекции вызываются болезнетворными микроорганизмами, векторборьбы с такими болезнями переместился в направлении создания антибактериальных средств.Однако, в течение почти 100 последних лет эффективных в этом направлении средствпрактически не было. Положение изменилось в 30-х годах прошлого столетия с созданиемсульфаниламидов, а десятилетие спустя – антибиотиков. Была получена возможностьнаправленного и эффективного лечения. Однако, антибиотики, принеся избавление от однихпроблем, вызвали новые.

Одна из них – самая труднопреодолимая и глобально масштабная –антибиотикорезистентность. В настоящее время существует уже несколько поколенийантибиотиков, и к большинству из них появляются новые резистентные штаммымикроорганизмов. Меры преодоления, предлагаемые в нашей стране и за рубежом – комбинацииантибиотиков, замена на отдельных этапах лечения одних антибиотиков другими, ограничениеприменения антибиотиков в тех случаях, когда без них можно обойтись.

Другой путь решенияпроблемы – обращение к препаратам растительного происхождения. Антимикробные препаратыиз лекарственного растительного сырья (ЛРС), такие как Эвкалимин (из листьев эвкалипта),Сангвиритрин (из травы маклеи), разработанные в ВИЛАР как аналоги антибиотиков, имеютширокий спектр действия, практически не имеют побочных эффектов и, что самое главное, к нимне вырабатывается устойчивость микроорганизмов. Одним из перспективных растений длясоздания препарата антимикробного действия является шалфей лекарственный.Шалфей лекарственный (Salvia officinalis L.) является официнальным растением и частоприменяется в медицинской практике разных стран мира.

Он включен в фармакопеи Англии,США, Германии, Франции, Польши, Австрии и Китая. Экстракты шалфея обладаютпротивовоспалительным, антимикробным, желчегонным, тонизирующим и целым рядом другихдействий. Традиционно считалось, что биологическая активность растения связана с наличиемэфирного масла. В последнее время интерес для исследователей представляют нелетучиекомпоненты. Одной из основных групп действующих веществ являются дитерпеноидыабиетанового ряда с ароматическим кольцом С, содержащиеся в траве шалфея (корназоловаякислота и ее производные), проявляющие сильное антимикробное действие. В корнях такженайдены абиетановые дитерпеноиды, где кольцо С имеет строение хинона: ройлеанон, 7гидроксиройлеанон (горминон) и 7-ацетоксиройлеанон.

Эти соединения обладают высокой4антимикробной активностью. В настоящее время создание субстанции антимикробного действияиз корней шалфея лекарственного является актуальным.• Потребность в препарате антимикробного действия растительного происхождениясохраняется.• Возможно комплексное использование растения без дополнительных экономическихзатрат, т.к. корни шалфея лекарственного являются отходами после использования растений длязаготовки листьев в течение нескольких вегетационных периодов.• Помимо антимикробной активности в последнее время у ройлеанонов обнаруженоцитотоксическое действие на клетки опухоли кишечника и печени (Мастеровá с соавт., 2004 г.).Степень разработки темы исследования В лаборатории антимикробных исследованийВИЛР (Вичканова С.А.

с сотр., 1969 г.) впервые показано наличие у ройлеанонов антимикробногодействия и на основе этих данных (Романова А.С. с соавт.) была разработана субстанция подрабочим названием «Донелвин» как полуфабрикат для получения лекарственных форм.Действующими веществами субстанции являлась сумма горминона и 7-ацетоксигорминона.Балластными веществами были неполярные компоненты липофильного характера, стерины,линейные углеводороды типа козана. Состав субстанции отличался нестабильностью: долягорминона и 7-ацетоксигорминона колеблется от 20 до 80 % в зависимости от сырья. Другиминедостатками технологии являются необходимость нагрева пожароопасных растворителей(петройленый эфир), а также трудновоспроизводимый и длительный процесс кристаллизациицелевого продукта с возможностью образования смолистой субстанции, поэтому работа былиприостановлена, а субстанция не зарегистрирована.В связи с вышеизложенным разработка субстанции антимикробного действия из корнейшалфея лекарственного по новой технологии является актуальной.Цель исследования – разработать способ получения субстанции антимикробногодействия на основе углубленного изучения химического состава корней шалфея лекарственногои метод стандартизации субстанции.Задачи:1.

Изучить морфолого-анатомическое строение корней шалфея лекарственного, установитьлокализацию ройлеанонов в корнях, диагностические признаки сырья.2. Определить количественное содержание и химический состав ройлеанонов в корняхшалфея лекарственного, включая минорные компоненты.3. Разработать новый способ получения субстанции антимикробного действия, основанныйна преобразовании суммы ройлеанонов в наиболее активный горминон.4. Изучить химический состав веществ, сопутствующих горминону в субстанцииантимикробного действия.55. Установить числовые значения параметров контроля подлинности и качества субстанцииантимикробного действия, оформить нормативную и технологическую документацию насубстанцию антимикробного действия и на стандартный образец горминона для количественногоопределения (проект НД, методики количественного определения, лабораторный регламент).Научная новизнаВпервые выделены биологически активные вещества: 7-оксоройлеанон, таксохинон и 6,7дегидроройлеанон в дополнение к ранее известным горминону, 7-ацетоксигорминону иройлеанону в ходе углубленного изучения содержания ройлеанонов в корнях шалфеялекарственного.Установлена связь строения молекул и биологической активности ройлеанонов,содержащихся в корнях шалфея.

Наиболее активный горминон предложен в качестве основы длясубстанции антимикробного действия.Изучена стабильность горминона в щелочной среде и реакция гидролиза ацетоксигорминонакак обоснование нового способа получения субстанции антимикробного действия из корнейшалфея лекарственного.Оптимизированы параметры экстракции сырья на головной стадии и на стадии жидкофазныхэкстракций в ходе технологического процесса.Впервые выделены из корней шалфея лекарственного пентациклические тритерпены:эускафиковая, 19-дезоксиэускафиковая кислоты и новое соединение 2α, 21β, 22αтригидроксиолеаноловая кислота и установлено ее строение.Отмечено наличие антимикробной активности у выделенных тритерпеновых кислот.Впервые в ходе изучения ройлеанонов с помощью масс-спектрометрии установленазакономерность распада молекулы ройлеанона под действием электронного спрея ESI.Теоретическая и практическая значимость исследования Результаты работы:Разработан лабораторный регламент на производство субстанции антимикробного действияиз корней шалфея лекарственного «Ройлевин» ЛР 04868244-01-2016.Разработаны технические условия на стандартный образец 7-гидроксиройлеанона(горминона) ТУ 9369-188-04868244-2015.Разработан проект нормативного документа (проект НД) на субстанцию антимикробногодействия Ройлевин.Разработаны методики количественного определения 7-гидроксиройлеанона при получениисубстанции Ройлевин из корней шалфея лекарственного №М-04868244-52-2016.На основе полученной субстанции антимикробного действия разработана фармацевтическаякомпозиция антимикробного действия.

Получен Патент №2596500 от 10 августа 2016 года.6Основные положения, выносимые на защитуРезультаты морфолого-анатомического исследования сырья, изучения компонентногосостава ройлеанонов в корнях шалфея лекарственного и сравнительной оценки их антимикробнойактивности.Технологическая схема получения субстанции антимикробного действия Ройлевин из корнейшалфея лекарственного на основе наиболее активного ройлеанона – горминона ЛР 04868244-012016.Результатыисследованияхимическогосоставапентациклическихтритерпенов,сопутствующих горминону в субстанции антимикробного действия Ройлевин.Результаты определения параметров стандартизации субстанции антимикробного действияРойлевин (проект НД), промежуточных продуктов технологического процесса получениясубстанции Ройлевин (№М-04868244-52-2016) и стандартного образца горминона (ТУ 9369-18804868244-2015).Методология и методы исследования Методология исследования построена на анализе иобобщении литературных данных по изучению ботанических характеристик корней шалфеялекарственного, химических свойств, медико-биологических характеристик, распространенияройлеанонов в природе и включала изучение химического состава корней шалфеялекарственного, изучение химического состава субстанции антимикробного действия из корнейшалфея лекарственного, изучение биологической активности субстанции и индивидуальныхвеществ.