Диссертация (Лиганды рецептора NKG2D в комплексной оценке иммунитета у онкологических больных и разработка метода адоптивной иммунотерапии), страница 7

Вследствие этого происходит активация тирозиновых фосфатаз SHP-1 и SHP-2, которые в свою очередь блокируют процессы фосфорилирования, связанные сактивацией клеток, что приводит к ингибированию NK-опосредованной цитотоксичности и секреции цитокинов [262]. Исключение составляет рецепторKIR2DL4, который обладает как ингибирующими, так и активирующими характеристиками.

Активирующий сигнал этот рецептор проводит за счет взаимодействия с молекулой FcεR1γ, которая содержит два мотива ITAM с последовательностью YXXLX6-8YXXL/I [108] (рис. 4). Связывание KIR2DL4 с молекулой HLA-G инициирует продукцию IFN-γ NK-клетками.Еще одну группу рецепторов NK-клеток, распознающих антигены HLA наклеточной поверхности, составляют гетеродимеры CD94/NKG2 – представителисуперсемейства лектиноподобных белков С-типа, отличающиеся значительноменьшей полиморфностью и большей консервативностью по сравнению с KIRрецепторами. Основной ингибирующий рецептор в этой группе – CD94/NKG2A,распознает неклассические молекулы гистосовместимости класса I HLA-E, представляющие пептиды, происходящие из аллелей классических молекул HLAкласса I [373], что обеспечивает дополнительный мониторинг экспрессии MHCI NK-клетками на нормальных клетках.

Связывание рецептора CD94/NKG2A смолекулой HLA-E с пептидом, приводит к передаче ингибирующего сигнала,формирующегося через посредство цитоплазматической последовательностиITIM. Гетеродимер CD94/NKG2С, также, как и CD94/NKG2A распознает HLAE, однако не содержит мотив ITIM и проводит активирующий сигнал за счет ассоциации с ITAM-содержащей молекулой DAP12 [135].29Таким образом, многие ингибирующие рецепторы NK-клеток взаимодействуют с молекулами HLA-A, -B, -C или -Е, что приводит к угнетению ихэффекторных функций. В то же время роль их двойников с активирующимисвойствами не вполне понятна.Помимо KIR-рецепторов с L-участками существуют другие ингибирующие рецепторы NK-клеток семейства LILR (leukocyte Ig-like receptor).

Онитакже имеют название Ig-подобные транскрипты (ILTs), экспрессируются намногих миелоидных клетках и распознают не полиморфные домены α3 классических и неклассических молекул HLA. Ингибирующий рецептор LAIR-1(leukocyte-associated Ig-like receptor-1), найденный на большом количестве иммунокомпетентных клеток, включая NK-клетки, участвует в распознаванииколлагена. Рецептор Siglec-7 проявляет ингибирующие свойства при взаимодействии с дисахаридом Neu5Acα2-8Neu5Ac, входящим в состав некоторыхгликопротеинов и гликолипидов [150]. Рецептор KLRG1 (killer cell lectin-likereceptor G1) обнаруживается на подавляющем большинстве NK-клеток. Интересно, что его экспрессия меняется при вирусных и паразитарных инфекциях.KLRG1 взаимодействует с кадгеринами, что приводит к предотвращению цитолиза клетки-мишени [215].Второй аспект иммунного распознавания, реализуемого NK-клетками, связан с их активацией в ответ на опухолевую трансформацию, инфекцию, либо клеточный стресс.

Выявление опасных изменений, т.е. стресс-лигандов в клетке,осуществляется с помощью активирующих рецепторов NK-клеток. Важнуюгруппу среди них составляют рецепторы естественной цитотоксичности NCR:NKp46/NCR1 (CD335), NKp44/NCR2 (CD336) и NKp30/NCR3 (CD337), принадлежащие к суперсемейству иммуноглобулинов и связывающие вирусный гемаглютинин, белки теплового шока, другие вирусные лиганды (CMV pp65), углеводы, опухолевые антигены (В7-Н6, ВАТ-3, MLL5 и ядерный антиген пролиферирующих клеток (PCNA – proliferating cell nuclear antigen) (рис. 5) [102, 113,146, 238-40, 245, 302, 326].30Виментин,VHAHSPGs, BAT3,B7-H6, HLA-BMLL5, PCNPNKp46AISLNKp80NKp30FcεRIγMICA/B, ULBP1-6NKG2DNKp44FcεRIγDAP12DAP10CD3ζCD3ζактивацияIg-SF (NCR)- ITAMлектинподобные рецепторы-YxxM (мотив связывающий PI3K)- hemi-ITAMNK-клеткаРисунок 5.

Некоторые активирующие рецепторы NK-клеток человека.Стрелками показаны семейства рецепторов NCR и лектиноподобных рецепторовС-типа [Абакушина Е.В. и соавт. Иммунология. 2012].Гликопротеин NKp46 – один из наиболее специфических маркеров NKклеток млекопитающих, хотя и присутствует на некоторых Т-клетках. Существуют данные о том, что этот рецептор играет основную роль в активацииNK-клеток при некоторых вирусных инфекциях и опухолевых заболеваниях[275]. Предполагается, что рецептор NKp46 способен идентифицировать вирусный гемагглютинин на поверхности клетки-мишени, а также белок промежуточных филаментов виментин, экспонированный на поверхности моноцитов, инфицированных микобактериями туберкулеза [182]. Трансдукция активационного сигнала рецептором NKp46 происходит за счет его ассоциации смолекулами CD3ζ и FcεRIγ, содержащими несколько активирующих последовательностей ITAM.

Рецептор NKp44 экспрессируется NK-клетками в условиях активации. Хотя известно, что за счет этого рецептора происходит усиление цитолитической противовирусной и противоопухолевой активностиNK-клеток. Недавно идентифицировали клеточный лиганд для рецептора31NKp44 (NKp44L), который исключен из ядра, но экспрессируется на клеточной поверхности. Это новая изоформа белка MLL5 (mixed-lineage leukemia-5protein) [102]. Этот белок отсутствует на поверхности клеток циркулирующихв организме здоровых индивидуумов, но экспрессируется на большинствеопухолей и трансформированных клеток. Резкое уменьшение литической активности NK-клеток продемонстрировано при добавлении антител к NKp44L,что подчеркивает роль NKp44L в цитотоксичности.Для другого рецептора NCR NKp30 к настоящему времени найдено несколько потенциальных физиологических лигандов.

Одним из них являетсямолекула BAT3 (leukocyte antigen-B-associated transcript 3), высвобождающаяся из поврежденных клеток в процессе клеточного стресса [302], другим –белок семейства B7 (B7-H6), экспрессирующийся в основном на опухолевыхклетках при лейкозах, лимфомах, саркомах и меланомах [113].К семейству лектинов относится активирующий рецептор NK-клетокNKp80 – гомодимер, состоящий из трансмембранных протеинов типа II,cпецифичный для молекул AICL (activation induced C-type lectin), экспонированных на поверхности миелоидных клеток [108, 381].

NKp80 содержит фосфопептиды, формирующие нетипичную сигнальную последовательность hemi-ITAM[157]. Функционирование этого рецептора осуществляется посредством фосфорилирования тирозина в позиции 7 и активации Syk-киназы. NKp80-зависимаяактивация NK-клеток приводит к лизису миелоидных опухолевых клеток, а такжеобеспечивает взаимодействие NK-клеток с моноцитами, оказывая влияние напродукцию провоспалительных цитокинов как NK-клетками, так и моноцитами.Молекула адгезии DNAM1 экспрессируется на NK-клетках, тромбоцитах, моноцитах и субпопуляциях Т-клеток [153]. В ее состав входят два иммуноглобулиноподобных домена, с помощью которых молекулы DNAM1 связывают белок нектин-2 (CD112), и рецептор вируса полиомиелита (PVR –poliovirus receptor, CD155), обеспечивая костимулирующий сигнал.

Лигандомрецептора CD2, экспрессирующегося на многих NK-клетках, является белокCD58. Корецепторами в активации NK-клеток служат также трансмембранные32белки NTB-A, CS1 и 2В4 (CD244), способные распознавать идентичные молекулы на клетках-мишенях (NTB-A и CS1), либо протеины того же семействамолекул (2В4/CD48) [139].1.2.1. Лектиноподобный активирующий рецептор NKG2D и его лигандыВажным представителем лектиноподобных активирующих рецептороввсех NK-клеток является гликопротеин типа II – NKG2D (CD314) (рис. 5). Помимо NK-клеток, этот гомодимер экспрессируется также на NKT-клетках, γδТклетках и CD8+-αβТ-клетках, но не на CD4+-αβТ-клетках [309]. Этот рецепторлимфоцитов не имеет собственных сигнальных последовательностей в цитоплазматической части, но функционирует в ассоциации с адаптерными молекулами DAP10 [387].

Эти молекулы воспринимают сигнал, возникающий при связывании рецептора NKG2D на поверхности лимфоцитов со стресс-индуцированными молекулами на поверхности клеток-мишеней, и осуществляют егодальнейшую передачу, индуцирующую цитотоксическое действие лимфоцита[101, 394]. Рецептор NKG2D способен узнавать высоко полиморфные молекулыMICA и MICB (major histocompatibility complex class I chain-related protein A orB), родственные антигенам МНС класса I [192, 249]. Было обнаружено, чтобелки семейства ULBP 1-6 (UL16-binding protein family member 1-6), связывающие протеины человеческого цитомегаловируса UL16, в норме не экспрессирующиеся на клеточной поверхности, также служат лигандами для NKG2D [147,245, 347].

Как и MICA/B, поверхностные белки ULBP лишь в небольших количествах представлены на клетках здоровых тканей, однако их экспрессия можетвозрастать при вирусных инфекциях или опухолевом перерождении.На поверхности нормальных клеток стресс-индуцированные лигандыMICA/B и ULBP отсутствуют, либо содержатся в незначительном количестве наклетках эндотелия и фибробластах, однако их экспрессия может индуцироватьсяпри вирусных инфекциях, а также возрастать при воспалительных заболеванияхжелудочно-кишечного тракта [115], аутоиммунных заболеваниях и при опухолеобразовании [4, 99, 192, 335, 290, 347]. Показано, что экспрессия этих молекул33активируется в результате повреждения ДНК [183], а также в результате аномального пролиферативного сигнала, возникающего при активирующих мутациях в киназных доменах цитоплазматической части рецепторов ростовых факторов [190]. Кроме этого, одним из основных факторов, индуцирующим поверхностную экспрессию молекул MICA/B, является инфицирование клетки вирусами [398].