Диссертация (Лиганды рецептора NKG2D в комплексной оценке иммунитета у онкологических больных и разработка метода адоптивной иммунотерапии)
Описание файла
Файл "Диссертация" внутри архива находится в папке "Лиганды рецептора NKG2D в комплексной оценке иммунитета у онкологических больных и разработка метода адоптивной иммунотерапии". PDF-файл из архива "Лиганды рецептора NKG2D в комплексной оценке иммунитета у онкологических больных и разработка метода адоптивной иммунотерапии", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "медицина" из Аспирантура и докторантура, которые можно найти в файловом архиве МГМУ им. Сеченова. Не смотря на прямую связь этого архива с МГМУ им. Сеченова, его также можно найти и в других разделах. , а ещё этот архив представляет собой докторскую диссертацию, поэтому ещё представлен в разделе всех диссертаций на соискание учёной степени доктора медицинских наук.
Просмотр PDF-файла онлайн
Текст из PDF
Медицинский радиологический научный центр имени А.Ф. Цыба –филиал федерального государственного бюджетного учреждения«Национальный медицинский исследовательский центр радиологии»Министерства здравоохранения Российской ФедерацииНа правах рукописиАБАКУШИНА ЕЛЕНА ВЯЧЕСЛАВОВНАЛИГАНДЫ РЕЦЕПТОРА NKG2D В КОМПЛЕКСНОЙ ОЦЕНКЕИММУНИТЕТА У ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ И РАЗРАБОТКАМЕТОДА АДОПТИВНОЙ ИММУНОТЕРАПИИ14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология14.01.12 – онкологияДиссертацияна соискание учёной степени доктора медицинских наукНаучные консультанты:Козлов И.Г. – доктор медицинских наук, профессорКудрявцев Д.В.
– доктор медицинских наукМосква – 2018СОДЕРЖАНИЕВВЕДЕНИЕ ........................................................................................................... 5Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ....................................................................... 161.1. Иммунобиология развития опухоли ...........................................................
161.1.1. Механизмы ускользания опухоли из-под иммунного надзора .............. 161.1.2. Противоопухолевый иммунный ответ и адоптивная иммунотерапия ... 181.2. Характеристики и рецепторы NK-клеток ................................................... 211.2.1. Лектиноподобный активирующий рецептор NKG2D и его лиганды ....
331.3. Обучение NK-клеток ................................................................................... 351.4. Функции и роль NK-клеток в организме .................................................... 361.5. Регуляция функциональной активности NK-клеток.................................. 421.6.
Взаимодействие NK-клеток c клетками микроокружения опухоли ииммуносупрессия................................................................................................ 441.7. Применение NK-клеток в терапии ..............................................................
481.8. Аллогенные NK-клетки для адоптивной иммунотерапии......................... 541.9. Методы получения активированных NK-клеток in vitro ........................... 591.10. Оценка активационных способностей цитотоксических лимфоцитов ... 63Глава II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ................................................................. 692.1. Характеристика клинического материала .................................................. 692.1.1.
Характеристика пациентов по изучению иммунологическихпоказателей крови............................................................................................... 702.1.2. Характеристика пациентов, получивших адоптивнуюиммуннотерапию ................................................................................................ 732.1.3. Критерии отбора пациентов в исследование ........................................... 782.1.4. Оценка общего состояния онкологического больного ........................... 812.2. Методы исследования .................................................................................
822.2.1. Выделение мононуклеарных клеток из периферической крови ............ 822.2.2. Фенотипирование мононуклеаров периферической крови .................... 832.2.3. Проточная цитофлуориметрия .................................................................
842.2.4. Методы культивирования клеток ............................................................ 8522.2.5. Флуоресцентная микроскопия ................................................................. 892.2.6. Иммуноферментный анализ ..................................................................... 902.2.7.
Определение показателей информативности выявления sMICAметодом ИФА ..................................................................................................... 942.2.8. Оценка жизнеспособности и пролиферативной активностилимфоцитов ......................................................................................................... 952.2.9. Оценка цитотоксической активности лимфоцитов.................................
962.2.10. Выделение NK-клеток методом магнитной сепарации ........................ 982.2.11. Получение, очистка и определение физико-химическихсвойств рекомбинантного белка MICA ............................................................. 992.2.12. Иммуноблот-анализ .............................................................................. 1022.2.13. Методика адоптивной иммунотерапии ............................................... 1032.3. Статистический анализ данных ................................................................
104Глава III. Результаты оценки дисбаланса показателей иммунитета уонкологических больных ................................................................................. 1063.1. Выявление растворимых форм молекул MICA в периферическойкрови онкологических больных....................................................................... 1063.2.
Информативность выявления молекул sMICA ........................................ 1083.3. Определение молекул MICA у больных КРР и меланомой .................... 1103.4. Выявление дисбаланса лимфоцитов у больных меланомой ................... 1143.5.
Выявление дисбаланса лимфоцитов у больных КРР ............................... 1173.6. Взаимосвязь между экспрессией NKG2D и уровнем sMICA.................. 1213.7. Оценка уровня цитокинов в сыворотке крови онкологическихбольных ............................................................................................................. 1263.8.
Получение рекомбинантного белка человека MICA ............................... 1293.9. Блокирование рецептора NKG2D на NK-клетках.................................... 133Глава IV. Разработка метода длительного культивирования и активациилимфоцитов для адоптивной иммунотерапии ................................................ 1394.1. Культивирование лимфоцитов in vitro в присутствии IL-2 ..................... 1394.2. Культивирование лимфоцитов in vitro с IL-2 и IL-15 ..............................
1553Глава V. Результаты клинической апробации метода адоптивнойиммунотерапии ................................................................................................. 1645.1. Апробация метода АИТ............................................................................. 1645.2.
Результаты проведения АИТ у больных колоректальным раком ........... 1745.3. Результаты проведения АИТ у больных меланомой ............................... 179Глава VI. Мониторинг показателей иммунитета у онкологическихбольных на этапах адоптивной иммунотерапии .............................................
1986.1. Изменение фенотипа лимфоцитов у больных после первогокурса АИТ ......................................................................................................... 1986.2. Мониторинг субпопуляционного состава лимфоцитов у больныхс ОЖКТ на этапах АИТ .................................................................................... 2026.3. Мониторинг субпопуляционного состава лимфоцитов у больныхмеланомой на этапах АИТ ............................................................................... 2086.4. Оценка влияния АИТ на уровень цитокинов у больных .........................
2136.5. Изменение концентрации молекул MICA у больных после АИТ .......... 214ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ .................................................................... 221ЗАКЛЮЧЕНИЕ ................................................................................................ 249ВЫВОДЫ .......................................................................................................... 256Практические рекомендации ........................................................................... 257Список цитируемой литературы ......................................................................
259Перечень сокращений ...................................................................................... 2954ВВЕДЕНИЕАктуальность работыПроблема ранней диагностики и лечения опухолей все еще остаётся в значительной степени нерешенной, несмотря на огромные многолетние усилия ученых и врачей. Современные методы терапии, которые предусматривают использование хирургических, лекарственных и лучевых методов терапии, часто бывают недостаточно эффективны. Кроме того, эти воздействия сами по себе вызывают иммуносупрессию.
