Автореферат (Диагностика неонатальных пневмоний - клинико-микробиологические и иммунологические аспекты), страница 3

Махачкала и ООО НПП «Питательные среды». Материалы диссертациивнедрены в учебный процесс, используются в лекциях и на практических занятиях приобучении студентов и врачей-бактериологов, на курсах последипломного образованиякафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГБОУ ВО «Дагестанскийгосударственный медицинский университет» МЗ РФ, ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) и ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздрава России.Соответствие диссертации паспорту научной специальностиДиссертационнаяработа«Диагностиканеонатальныхпневмоний:Клинико-микробиологические и иммунологические аспекты» соответствует формуле научныхспециальностей: 03.02.03 — «Микробиология» со следующими областями исследованийуказанной специальности по пунктам: 2 - выделение, культивирование, идентификациямикроорганизмов; 3 - морфология, физиология, биохимия и генетика микроорганизмов и14.03.09 — «Клиническая иммунология, аллергология» со следующими областямиисследований этой специальности: изучение патогенеза иммунозависимых заболеваний(иммунодефицитных состояний, аллергической и аутоиммунной патологии) и разработка и11усовершенствование методов диагностики, лечения и профилактики аллергических ииммунопатологических процессов».ПубликацииРезультаты проведенного диссертационного исследования в полном объеме изложеныв 60 научных работах, опубликованных автором, из которых 17 работ опубликованы визданиях, включенных в Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданийВАК Министерства образования Российской Федерации.Объем и структура диссертацииДиссертация изложена на 298 страницах машинописного текста и состоит из введения,основного текста (обзоралитературы,главы, посвященнойописанию материалов иметодов исследований, и 6 глав собственных исследований), заключения, выводов, спискасокращений и условных обозначений и списка литературы.

Диссертация иллюстрирована 37таблицами и 44 рисунками. Библиографический указатель включает216источниковлитературы, в том числе 122 ссылки на отечественных авторов и 94 ссылки на зарубежныхавторов.СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериал и методы исследованияОсновная часть работы выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии ииммунологии ФГБОУ ВО «Дагестанский государственный медицинский университет» МЗРФ,в лаборатории «Клиническая микробиология» ООО НПП «Питательные среды» г.Махачкала (Договор о сотрудничестве № 5 от 15 декабря 2011г.), в лабораториимолекулярной иммунологии ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин исывороток им.

И.И. Мечникова», Москва (Договор о сотрудничестве и научныхисследованиях № 56 от 19 сентября 2012). Биоматериал от новорожденных был получен вотделенииреанимациииинтенсивнойтерапииноворожденных РодильногодомаРеспубликанской клинической больницы г. Махачкала (заведующий отделением - М.Д.Джанбеков). Клинические наблюдения проведены у 579 пар «родильница-новорожденный».При формировании групп придерживались общепринятой классификации неонатальныхпневмоний (Н.Н.Володин, 2009; Н.А.Геппе, 2009; А.А.Баранов, 2015). Первую группусоставили 230 новорожденных, у которых была диагностирована внутриутробная пневмония(развитие в первые 72 часа после рождения).

Во 2-ю группу включено 246 младенцев сранней неонатальной пневмонией, поступивших в ОРИТН родильного дома. В контрольнуюгруппу включены здоровые новорожденные (103 детей), которые находились с первых сутокжизни в отделении физиологии.12Ретроспективно проведен анализ медицинской документации 150 новорожденныхдетей с респираторными нарушениями, отобранных методом выкопировки в период с 2010по 2014 годы.Критерии включения в исследование: - наличие письменного информированногосогласия на участие в исследовании, подписанного родильницей; - верифицированныйдиагноз ВУП и РНП у новорожденных; наличие дыхательных расстройств с первых часов отрождения до 72 часов; - потребовавших проведение респираторной поддержки; подтвержденнойрентгенологическимисследованием иклиническими проявлениямипневмонии.

Критерии исключения из исследования: синдромальная форма множественныхврожденных пороков развития.Группу сравнения составили здоровые младенцы изотделения физиологии новорожденных родильного дома. Сроки гестации, в среднем,составили 36,8 ± 3,36 нед., с массой при рождении - 2900 ± 450,5 г.Анализ возможных рисков развития НП изучали на основе медицинской документации325 рожениц, в которой были отражены особенности течения беременности, наличие впериод беременности различных соматических и инфекционных заболеваний, в том числехронических, а также результаты выполненных лабораторных исследований.

Особоевнимание уделяли наличию в анамнезе инфекций, передающихся половым путем (ИППП), атакже положительных анализов на TORCH - инфекции.У детей с диагнозом «пневмония», находившихся на лечении, в соответствии ссоответствующими инструктивными материалами исследовали кровь, ТБА, мазок из зева.Забор материала от новорожденных производили соответственно в 1,3 - 5 и 7 сутки послерождения, посев осуществляли в ближайшие 2 часа после взятия.

Всемпроспективнойгруппыпроводиликомплексноедетямклинико – рентгенологическоеобследование. Материалом для бактериологического и иммунологического исследованияпослужили образцы крови, трахеобронхиального аспирата и мазки слизистой зевановорожденных, полученных сотрудниками отделения реанимации и интенсивной терапииродильного дома Республиканской клинической больницы г. Махачкала в процесселечебного процесса и планового обследования.С целью определения специфичности и чувствительности диагностических критериевпневмонии у новорожденных проведена верификация 450 историй болезни новорожденныхдетей с диагнозом пневмония, проходивших лечение в ОРИТН Родильного дома № 3 РКБ г.Махачкала.

После ликвидации проявлений дыхательной недостаточности, интоксикации,гемодинамических нарушений дети переводились в отделение патологии новорожденныхдля дальнейшего лечения.13Основные принципы исследования: 1) Ретроспективный анализ медицинскойдокументации (истории болезни родильниц и новорожденных) по единой схеме 2)Максимально приближенные друг к другу сроки проведения микробиологических,иммунологических,молекулярно-генетическихисследований,атакжеопределениесостояния новорожденного с помощью функциональных методов исследования3) Всеисследования, носившие сравнительный характер, проводились на базе одного лечебногоучреждения, для всех групп использовались одни и те же диагностические методыСпециальные методы исследования:1.Бактериологические исследования проводили общепринятым способом вотношении основных групп микроорганизмов. Выделенные культуры микроорганизмовидентифицировали до вида, для идентификации использовали соответствующие наборытестов.

Исследование трахеобронхиальных аспиратов, крови и мазков со слизистой заднейстенки глотки осуществляли стандартным количественным методом на широкий наборпитательных сред для выделения аэробных и анаэробных факультативных микроорганизмов.Все бактериальные и грибковые культуры, полученные в аэробных и микроаэрофильныхусловиях, идентифицировали до рода и вида общепринятыми методами.2.Иммунологические и молекулярно-генетические методы: выделение РНК иДНК из биоматериала, постановка реакции обратной транскрипции, проведение ПЦР-РВ врежиме реального времени для определения экспрессии генов врожденного иммунитета,проведение ПЦР-РВ с TaqMan зондами для оценки полиморфных маркеров в генах TLR2,TLR4, DEFB1, IL10, IL17, TNFA.3.Биоинформационныйанализ-аннотациибиологическихобъектов(вчастности, белков, клеточных процессов и болезней), а также аннотации функциональныхсвязей между ними, сформированные в результате обработки текстового массиваполнотекстовых статей и абстрактов, индексированных в Medline.4.Статистическийанализ-использоваликомпьютернуюстатистическуюпрограмму BioStat, а также программу Excel.

В таблицах и рисунках результатыпредставлены в виде Х. Для сравнения групп данных использовали параметрическийкритерий Стьюдента (t), а также непараметрические методы статистической обработкиданных. В связи с разным числом наблюдений в каждой из групп для оценки статистическойдостоверностиразличийэкспрессиигеноввисследуемыхгруппахиспользовалинепараметрический критерий Манна-Уитни (С.

Гланс, 1999). Для сравнения бинарныхданных использовались точный критерий Фишера и χ2. Достоверность различий показателейопределялась при общепринятом уровне значимости p<0,05.14РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕПредикторы развития пневмонии у новорожденныхДля решения задачи по прогнозированию риска развития пневмоний у новорожденныхтребуется определение информативных критериев. В этой связи на первом этапеисследования нами проведена оценка анамнестических данных родильниц новорожденных свнутриутробными и ранними неонатальными пневмониями с группой сравнения.Учитывались факторы, указывающие на возможную реализацию инфекционногопроцесса у ребенка. Анализ анамнестических характеристик родильниц новорожденных сдиагнозом ВУП и РНП позволил установить, что факторами риска развития пневмонии уноворожденных является отягощённый акушерско-гинекологический анамнез (ОАГА),отмечавшиеся у родильниц, это: анемия, наличие воспалительных заболеваний женскойполовой сферы, хроническая фетоплацентарная недостаточность и отслойка плаценты.Еще один фактор риска – влияние длительности безводного периода более 24 часов.