Диссертация (Совершенствование методов стандартизации многокомпонентных лечебно-профилактических средств растительного происхождения, применяемых в стоматологии), страница 9

Специфичность (избирательность) проявляется вспособности аналитического испытания однозначно (достоверно) измерятьсодержание анализируемого вещества в пробе в составе других компонентов,наличие которых в препарате вполне вероятно. Специфичность принятовыражать в величине систематической ошибки или в процентах погрешностимежду измеренной и истинной величиной.53Линейность.

Линейность заключается в потенциале контрольногоисследованияполучатьпропорциональнырезультатыконцентрациииспытаний,анализируемогокоторыевеществапрямовпробе.Определение этого параметра позволяет уточнить диапазон конкретногоаналитическогоиспытания.Линейностьизмеряливвидеугловогокоэффициента линии регрессии и ее дисперсии или в виде коэффициентасмешанной корреляции (R2) и коэффициента корреляции (R). С помощьюкалибровочного графика определяли содержание анализируемого вещества виспытуемых сериях апробируемых образцовпрепарата стоматофит. Дляоценки линейности проводили 10 определений.Прецизионность.Прецизионностьпроявляетсявстепенисоответствия между серией измерений, полученных в итоге контрольногоисследования. Эту категорию принято выражать в коэффициенте вариации(% СV), который представляет собой среднеквадратическое отклонениеэкспериментальных величин, поделенное на концентрацию анализируемоговещества.Сходимость.

Сходимость (повторяемость) должна показать, чтометодика анализа при проведении в одинаковых условияхполучениесравнимыхрезультатов.Повторяемостьобеспечиваетоценивалиприпроведении в одинаковых условиях (на одном приборе, в один день, одинчеловек) 10 определений. Повторяемость выражали в % CV по отдельновзятой пробе за 1 прогон теста.ПромежуточнаяПромежуточная(внутрилабораторная)(внутрилабораторная)прецизионность.прецизионностьпозволяетопределить % СV многочисленных измерений по отдельно взятой пробе,регулируемымпараметрамисвойствамреактивов,анализкоторыхпроводили за несколько тестовых прогонов на базе одной лаборатории.Анализ промежуточной прецизионности служил для доказательства того, чтовне зависимости от изменения внешних условий анализа обеспечиваетсяполучениесогласующихсярезультатов.Дляоценкипромежуточной54прецизионностианализируемымифакторамиявлялисьопределениеисследуемого вещества на двух разных приборах в разные дни.Правильность.

Правильность выражает степень соответствияфизического параметра препарата его расчетному значению. Для измеренияправильности проводили испытания при искусственно создаваемых нагрузкахи определяли степень результативности анализов – путем добавленияизвестного количества анализируемого веществак пробам препаратастоматофит (результаты представлены в главе IV). Правильность выражали ввеличине систематической ошибки или в процентах погрешности междуизмереннойиистиннойвеличиной(экспериментальноезначение/действительное значение х 100%).Робастностьпроявляетсявспособностиконтрольногоисследования сохранять не измененными свои характеристики, несмотря навнесение искусственных изменений в различные параметры аналитическогометода, а также служит показателем надежности исследования принормальных условиях его проведения.

В качестве показателя для проверкиробастности рассматривали показатель стабильности анализируемых серийпрепарата стоматофит и стандартного образца при хранении (результатыпредставлены в главе IV) [8, 9, 65, 75, 108].Выводы1. С целью идентификации химического состава основных групп БАВ,определяющихприменяемыхподлинностьвЛРС,стоматологиииспользуемогомногокомпонентныхвпроизводствепрепаратов,иоптимизации методов анализа качества получены модельные спиртовыеэкстракты семи видов растительного сырья - коры дуба, ромашки аптечнойцветков, шалфея лекарственного листьев, травы тимьяна обыкновенного,корневищ аира, цветков арники и мяты перечной листьев, а также модельныйспиртовой экстракт из смеси указанных видов растительного сырья.Модельные спиртовые экстракты являются базовыми объектами для55проведенияпараллельныхконтрольныхисследований,статистическойобработки и интерпретации результатов, валидации методики ГХ-МСанализа многокомпонентных лекарственных препаратов растительногопроисхождения, применяемых в стоматологии.2.

Оценка качества объектов исследования (МЭ и МЭС) проведена всоответствии с требованиями ГФ XIII. Для МЭС определены следующиепоказатели: плотность 0,915±0,002 г/см3, сухой остаток 5,36±0,25%,содержание эфирных масел 0,25±0,01%, содержание спирта 72,42±3,77%.3. Обоснована целесообразность выбора методики ГХ-МС анализа дляисследования многокомпонентных лекарственных препаратов на основеэфирномасличного растительного сырья, которая позволит оптимизироватьпроцессы определения подлинности и анализа качества указанной группыпрепаратов.4. На основании алгоритма выбора характеристик аналитической методикиопределен перечень валидационных характеристик методики ГХ-МС с цельюдемонстрацииеепригодностидляопределениятерпеноидоввмногокомпонентных лекарственных препаратах.

Перечень параметров,подлежащихвалидации,включает:прецизионность, правильность и робастность.специфичность,линейность,56Глава3.Исследованиехимическогосоставаосновныхгруппбиологически активных веществ модельных спиртовых экстрактоврастительногосырьяметодомгазовойхроматографии/масс-спектрометрии3.1. Анализ модельных спиртовых экстрактов семи видов растительногосырья, используемого при производстве многокомпонентных препаратов,применяемых в стоматологии3.1.1 Исследование химического состава основных групп биологическиактивных веществ модельных спиртовых экстрактовВ ходе ГХ-МС исследования химического состава основных группБАВМЭсемивидов растительногосырья,относящегосякпятиморфологическим группам ЛРС, которое традиционно используют припроизводстве применяемых в стоматологии многокомпонентных препаратов,были получены следующие результаты.При исследовании МЭ цветков арники было идентифицировано 12соединений (таблица 10), в частности: сесквитерпены – спатуленол,кариофиллена оксид; ароматические соединения – карвакрол; триацетин,сквален; жирные кислоты, их амидыи эфиры: миристиновая кислота,лауриноваякислота,кислота,пальмитиноваяпальмитамид,олеамид,этиловый эфир пальмитиновой кислоты, линолевая кислота.

Общий видхроматограммы представлен на рис. 4.57AbundanceTIC: [BSB1]ARNICA.D\data.ms15000001400000130000012000001100000100000090000080000070000060000050000040000030000020000010000015.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.0011.0012.0013.0014.0015.0016.00Time-->Рис. 4. - Общий вид хроматограммы образцов модельного экстракта цветков арникиВремена удерживания: 6,14 – триацетин; (1) 6,86-6,89 – карвакрол; 7,39-7,40 –спатуленол; 7,42-7,43 – кариофиллена оксид; 7,98 – миристиновая кислота; 8,07 –лауриновая кислота; 8,63 – пальмитиновая кислота; 8,73 – этиловый эфир пальмитиновойкислоты; 9,19 – линолевая кислота; 9,32-9,35 – пальмитамид; 9,87-9,92 – олеамид; 11,47 –сквален.58Таблица 10.Состав идентифицированных химических соединений в модельномэкстракте цветков арникиИдентифицированное соединениеВремя удерживания, минтриацетин6,14карвакрол6,86-6,89спатуленол7,39-7,40кариофиллена оксид7,42-7,43миристиновая кислота7,98лауриновая кислота8,07пальмитиновая кислота8,63этиловый эфир пальмитиновой кислоты8,73линолевая кислота9,19пальмитамид9,32-9,35олеамид9,87-9,92сквален11,47При исследовании МЭ мяты перечной листьев было идентифицировано18 химических соединений (таблица 11).

Были обнаружены следующиетерпеноиды – неоментол, ментол, пиперитон, ментен; спатуленол икариофиллена оксид; дитерпеновый спирт фитол и монотерпеновый лактонлолиолид. Кроме того, были идентифицированы ментил ацетат, триацетин,дигидроактинолид, миристиновой кислоты этиловый эфир, пентадекановойкислоты этиловый эфир, пальмитиновая кислота, пальмитиновой кислотыэтиловый эфир, миристиновой кислоты этиловый эфир, 2-метилтрикозан,линолевой кислоты этиловый эфир, стеариновой кислоты этиловый эфир.Общий вид хроматограммы представлен на рис. 5.59AbundanceTIC: [BSB1]MENTHA2.D\data.ms30000002800000260000024000002200000200000018000002160000014000001200000100000080000060000040000020000015.0036.007.008.009.0010.0011.0012.00Time-->Рис. 5. Общий вид хроматограммы образцов модельного экстракта мяты перечной листьевВремена удерживания: (1) 4,93 – неоментол; (2) 4,99 – ментол; (3) 5,64 –пиперитон; 5,85 – ментил ацетат; 6,13 – триацетин; 7,21 – дигидроактинолид; 7,39 –спатуленол; 7,42 – кариофиллена оксид; 8,06 – миристиновой кислоты этиловый эфир;8,14 – лолиолид; 8,41 – пентадекановой кислоты этиловый эфир; 8,63 – пальмитиноваякислота; 8,73 – пальмитиновой кислоты этиловый эфир; 9,10 – 2-метилтрикозан; 9,12 –фитол; 9,29 – линолевой кислоты этиловый эфир; 9,33 – стеариновой кислоты этиловыйэфир; 9,40 – ментен.60Таблица 11.Состав идентифицированных химических соединений в модельномэкстракте мяты перечной листьевИдентифицированное соединениенеоментолментолпиперитонментил ацетаттриацетиндигидроактинолидспатуленолкариофиллена оксидмиристиновой кислоты этиловый эфирлолиолидпентадекановой кислоты этиловый эфирпальмитиновая кислотапальмитиновой кислоты этиловый эфир2-метилтрикозанфитоллинолевой кислоты этиловый эфирстеариновой кислоты этиловый эфирментенВремя удерживания, мин4,934,995,645,856,137,217,397,428,068,148,418,638,739,109,129,299,339,40Анализ модельного экстракта корневищ аира позволил обнаружить 19химических соединений (таблица 12).

Были идентифицированы, такиевещества как: шиобунон, альфа-калакорен, бета-азарон, азарон, акоренон,изокаламендиол– характерные соединения эфирного масла аира. Крометого, обнаружены жирные кислоты, ароматические соединения, стероиды [1,31, 58, 101]. Общий вид хроматограммы представлен на рис. 6.61AbundanceTIC: AIR.D\data.ms1.6e+071.5e+071.4e+071.3e+071.2e+071.1e+071e+079000000800000070000006000000500000034000000230000001200000010000006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.00Time-->Рис.

6. Общий вид хроматограммы образцов модельного экстракта корневищ аираВремена удерживания: 6,56 – ванилин; 6,61 – кадин-1,4-диен;6,90 – альфа-куркумен; 7,01 – шиобунон (изомер); (1) 7,06-7,66 – шиобунон; (2) 7,21-7,25 – альфакалакорен; 7,27 – бета-азарон; 7,32 – 9-метокси-каламенен; 7,40 – спатуленол; (3) 7,46 –азарон; 7,61-7,66 – дегидроксиизокаламендиол; 7,87 – акоренон В; 8,01 – изокаламендиол;8,27 – 5-гидроксикаламенен; 8,65 – пальмитиновая кислота; 8,72-8,74 – пальмитиновойкислоты этиловый эфир; 9,35 – пальмитамид; 9,89 – олеамид; 15,20 – бета-ситостерол.62Таблица 12.Состав идентифицированных химических соединений модельногоэкстракта корневищ аираИдентифицированное соединениеванилинкадин-1,4-диенальфа-куркуменшиобунон (изомер)шиобунональфа-калакоренбета-азарон9-метокси-каламененспатуленолазарондегидроксиизокаламендиолакоренон Визокаламендиол5-гидроксикаламененпальмитиновая кислотапальмитиновой кислоты этиловый эфирпальмитамидолеамидбета-ситостеролВремя удерживания, мин6,566,616,907,017,06-7,127,21-7,257,277,327,407,467,61-7,667,878,018,278,658,72-8,749,359,8915,20В экстракте коры дуба было идентифицировано 26 соединений: 2метокси-4-пропилфенол – продукт некаталитической конверсии лигнина вэтаноле;левоглюкозан,меллеин,антиарол;продуктыокислительнойдеградации лигнина – 3,5-диметокси-4-гидроксибензальдегид (сиреневыйальдегид) и ванилин; 1-дезоксиинозитол и сцилло-инозитол; скополетин;сквален; гамма-ситостерол; пентациклические тритерпеновые соединения бета-амирин, лупеол, фриделин; ситостенон; жирные кислоты, их эфиры иамиды.