Отзыв на автореферат 1 (Разработка технологий получения рекомбинантного тимозина бета-4 человека и его аналогов)

ОТЗЫВ на автореферат диссертационной работы Макарова Дмитрия Александровича «Разработка технологий полу гения рскомбинантного тимозина бета-4 человека и его аналогов» на соискание ученой степени кандидата химических наук по специальности 03.01.06 — биотехнология(втл!. бионанотехнология) Одних! из успехов фундаментальных исследований в области молекулярной биологии и биохимии во второй половине ХХ века является открьгзз)е биолоп)чески актнвных пептидов и их роль в жизни млекопитак)щих, Особое внимание этому направлению уделяется из-за возможности использования таких природных рег)ч)взоров метзоолизмз В мед1гцинских целях.

К сожалению, естественное содержание пептндОВ в Орга!еах и тканях кра!1не ограничено и д1!я медицинских исследоВаниЙ, тем Оолее для терапии, выделение целевых соединений из природных источников — задача чрезвычайно з)пратная и малоэффективная. Днссертационная работа Д.Л. Макарова «Разработка технологий получения рекомбинантного тимознна бета-4 человека и его аналогов» является прикладным технологическим исследованием, цель которого — создание эффективной тсхноло!.Ии пол) 1!ения Онологичсски активного пептида.

Природный ть!мозин Оста-4 1! 1)-4) — Оо:шлаез уннкальнымн свойствамн: принимает участие в стимулировании ангиогенеза в условиях ишемии сердечной мышцы„блокирует в кардном)юцнтах проапоптотические каскады. 1'егеперационный потенциал Т~-4 проявляется при лечении трофических язв, ожогов н ран. Востребованность в эффективной технологии получения этого пептида очень Высока. поэгом! Зктуа:!ьность представленной раооты не вьг)ывает ни малейшего сомн!.Ння. В диссертационной работе Д.А. Макарова представлена масштабируемая биотехнологня получения Тр-4 человека.

Собственно разработка биотехнологии кроме сделанного ранее в лаборатории биотехнологии конструирования штамма-продуцента !'И01Л!Диого Оелка и Оптимизации условий к)льтиВи1)овання, Вкчк)чала следующие этапы! а)шггнмпзацня условий разрушения биомассы, б) подбор условий выделения гибридно!.о белка и оптимизации ус)!Олий его протеолитического расщепления, в) подбор условиЙ хромзтографической Очистки пептида, г) подбор условий ацетнлирования пептида н окончательной очистки целевого продукта. Важно отметить, что разработанная :шоорагор)шя методика бьша успешно доработана н масштабированз до стадии пилотного производства. Как итог — наработка 2,5 г целевого пептида для доклнннческих исследований. что является фактическим признанием эффективности разработашюй ав«ором оиогехиологни.

1'азработанная биотехнология получения дезацетнлтимозина р-4 фактически является технологией получения ценного промежуточного продукта, после апетндирования которого получается природный Т~3-4. Однако, в работе пролсмонсгрировагш возможность других. пепрнродных модификаций: пре>шо>кено апелнрование ангидридом гексановой кислоты, конъюгирование с полисналовой кислотой и конъгирование с полиэтиленгликолем. Эта часть работы проведенная на высоком уровне, является скорее научно-исследовательской, чем технологической. Автором затрачены серьезные усилия по оптимизации реакции получения целевых продукте>в и сшс большие усилия по их очистке н анализу, В результате получены даннь«е о возросшей стабильности модифицированных пептидов в сыворотке крови, т,е.

такие пептиды обладшот улучшенными фармакологическими показателями. Тем нс менее. эти результаты могут быть важными для технологии только после биологических «кспернментов с модифицированными пептидами 1п «1«т>„в которых оудсг показана их эффск пнин«сть по сравнению природным Тр-4. Наиболее интересной частью работы является разработка метода получения 'Г11-4 из ~ нбридного белка, ацетилированного 1п ««1««о. Здесь автору пришлось не только заново сконструировать штамм-продуцент, способный продуцировать гибридный белок. 1Зажно, чтобы в штамме происходило ацетилнрование гибридного белка, которое возлагалось на >4-а«ипнлтрансферазу.

В работе представлены результаты экспериментов по выбору оптимального фермента (между аланнновой нли сернновой Х-ацетилтрансферазой1. а также обоснована необходимость модификации классической последовательности Шайно-Далы-арно для сии>кения уровня экспрессии гена Х-ацстнлтрансферазы. Восле оптимизации условий было установлено, что в процессе посттрансляционной модификации происходит полное удаление формилметпоннна с Х-конца целевого пептпда, а также уровень ацетилнрования 1п «ч«т> достигает 93;4. Выход пелевого пептнда после окончателыюй очистки достигает 20 мг Т~3-4 с 1 л культуральной среды.

Заключительная часть диссертационной работы Д.А. Макарова посвящена тестировани>о биологической активности Тр-4, полученного по разработанной яютехнологии. Фактически эга часть является наиболее строгим и однозначным показателем нет«явности полученного препарата и относится скорее к методам контроля к««пс«пш«ГО продукга, чем к технологии его получения. В целом диссертационная работа Д.Л.

Макарова является хорошо продуманной закопченной технологической работой, с ясно и четко сформулированной целью. Задачи исследования сформулированы четко и по~атно, правда исследование биологической акпивности полученного рекомбинантного Т))-4, скорее следует отнести к методам ко»»троях. Рапота вьшолнена на высоком методическом уровне, с использованием совремегпплх методов и средств, особенно в части очистки и анализа получаемых п)»одуктов, Спитак», что диссертапионпая работа Д.А.

Макарова «Разработка техно:.авгий »н»лу»е»»ия рекомби»ьзнтного тимозина бета-4 человека и его аналогов» полностью отвечает требованиям в п. 9 «Положения о порядке присуждения ученых степепейа, утвержденного Постановлением Правительства РФ от 24.09.2013 г., а ее автор. Макаров Дх»итри»3 Александрович, заслуживает присвоения ученой степени кандидата химических паук по сиена»»льности 03.01.06- Биотехнология 1в т.ч. бионанотехнологии).

3авелу»огип й лаоорато)»ией изотопных методов авали~а ИБХ РАН, д,х,н. Скоблов 1О.С, ечпа»1 пг'и 11»сЬлн Федеральное государственное б»оджетное учреждение науки Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук ( ИБХ РАН ) ул. Миклухо-Маклая, 16Л0, ГСП-7, Москва, 117997.

телефон: (495) 335-01-00 (канн.), 1»-»»»а)1: о11)се'~ЙЬсЬ.ги, »к»х»к.)1»сЬ,гп Ученый секретарь ИЬХ РАН. д. ~».-и.н. .