Диссертация (Разработка методик хроматомасс-спектрометрического определения наркотических средств, психотропных веществ и лекарственных препаратов в биообъектах), страница 8

Несмотря на то что, ТГК-кислотаявляется конечным метаболитом, при разовом пероральном употребленииканнабиноидов, в моче может присутствовать до 200 нг/мл этогопроизводного [55].Методы пробоподготовки мочи для выделения ТГК-кислоты включают всебя гидролиз, экстракцию и при необходимости дериватизацию проб [136139]. Гидролиз, как правило, применяется либо щелочной, либоферментативный. Преимущество щелочного гидролиза состоит в том, что онболее быстрый и не требует повышения температуры, а как известно [55],ТГК-кислота химически нестабильна.

Для экстракции аналита применяетсяЖЖЭ эфирами [136]. В данном случае наиболее эффективно использоватьсмесь третбутилового и диэтилового эфиров в объемном соотношении 1:9.В литературе [136, 138, 139] описано применение ГХ-МС дляидентификации ТГК-кислоты в моче. Данные методики включают в себядлительную и дорогостоящую стадию пробоподготовки мочи к ХТА −дериватизацию. Следует отметить, что получаемые производные ТГКкислоты очень быстро разлагаются, что не позволяет проводить повторныхинструментальныхисследованийполученныхпроб.Проведениедериватизации приводит к потере целевого аналита на данной стадиипробоподготовки, а с учетом небольшого его содержания в моче необходимоиспользованиеболееселективныхивысокочувствительныхинструментальных методов анализа, таких как ВЭЖХ-МС/МС.47Глава 2. Экспериментальная часть2.1 ОборудованиеВ работе использовалось следующее оборудование:Газовыйхроматограф«5890»,оборудованныйсистемойавтоматического ввода пробы, соединенный с одноквадрупольным массспектрометром «5975С» фирмы «Agilent Technologies» (США).

Газовыйхроматограф оснащен колонкой DB-5MSразмером 30 м х0.25 мм,диаметром частиц сорбента 0.25 мкм.Высокоэффективныйжидкостнойхроматограф«Accela»,оборудованный системой автоматического ввода пробы, с тройнымквадрупольным масс-анализатором «TSQ Quantum Access MAX» фирмы«Thermo Scientific» (США). Колонки для жидкостного хроматографавыбирали в зависимости от анализируемых соединений.Газовый хроматограф модели «7890», оборудованный системойавтоматического ввода пробы, соединенный с квадрупольным массспектрометром модели «7000А» фирмы «Agilent Technologies» (США).Газовый хроматограф оснащен колонкой HP-5MS размером 30 м х0.25 мм,диаметром частиц сорбента 0.25 мкм.Высокоэффективный жидкостной хроматограф серии 1200 фирмы―Agilent Technologies‖ (США), оборудованный системой автоматическоговвода пробы и соединенный с трехквадрупольным масс-селективнымдетектором TSQ Quantum фирмы ―Thermo Scientific‖ (США).

Колонки дляжидкостного хроматографа выбирали в зависимости от анализируемыхсоединений.Весы лабораторные ABT – 5M, с пределом допускаемой абсолютнойпогрешности не более ± 0,01 мг, фирмы Kern (Чехия).Дозаторы пипеточные переменного объема (0,01 - 5 см3), фирмы«Biohit» (Финляндия), ГОСТ 28311-89.Микрошприц переменного объема (0,1 - 100 см3), фирмы «AgilentTechnologies» (США).Минишейкер Reax control со сменными приспособлениями дляустановки емкостей различного диаметра, фирмы «Heidolph» (Германия).Центрифуга Centrifuge 5810R, фирмы «Eppendorf» (Германия).Испаритель под током азота D-33649 Bielefild, фирмы «LiebischLabortechnik» (Германия).Сушильный шкаф FD 115, фирмы «BINDER» (США).Станция водоподготовки, Milli-Q Integral 3, обеспечивающаяполучение деионизированной воды с остаточным сопротивлением 1848МОм/см (25 ˚С) и содержанием общего углерода < 30 ppb (мкг/дм3), фирмы«Millipore» (Франция).Фото объектов получены с помощью стереомикроскопа Dynascope Lynxфирмы «Vision Engeneering» (Великобритания) и фотоаппарата Nikon D 5000.Параметры пористой структуры образцов волос и их удельнаяповерхность были определены из изотерм адсорбции паров азота при 77 К,измеренных на автоматической вакуумной установке ASAP-220MP фирмыMicromeritics (USA).2.2 Материалы и реагентыВ работе использовались:Исследуемые вещества в следующих видах:1.аналитический стандарт – метанольный раствор с массовойконцентрацией 1,00±0,05 мг/см3: морфина гидрохлорид, кодеинагидрохлорид, амфетамин, МДМА («ФГУП ГосНИОХТ»);2.аналитический стандарт – метанольный раствор с массовойконцентрацией 0,10±0,05 мг/см3: фентанил («ФГУП ГосНИОХТ»);3.аналитический стандарт – порошок с чистотой 99,0 %: МДЕА,МДА, метамфетамин, мефедрон, метадон, РСР, фампрофазон, стрихнин;4.медицинские препараты – таблетки с содержанием действующеговещества 10 мг чистотой 99,0 %: амитриптилин, карбамазепин;5.образцы сравнения PB-22, PB-22F, NM-2201, QCBL-BZ-F, THJ2201, AM-1220 AB-Pinaca-F, AB-Chminaca, AB-Fubinaca, AB-Pinaca, AM2201 и JWH-210 («Cayman Chemica») с чистотой не ниже 98,0 %;6.11-нор-∆9-тетрагидроканнабиноловая кислота – аналитическийстандарт, фирмы «Fluka» (США), кат.

№ 39382.Для каждого целевого вещества готовили рабочие метанольные растворыс концентрацией аналита 100 мкг/см3.Органические растворители: гексан «Sigma-Aldrich» (США) кат.№ 34859-1L; метанол «Merck» (Германия) кат. № 1.06035.2500; этилацетат«Sigma-Aldrich» (США) кат. № 270989; эфир метилтретбутиловый «Merck»(Германия) кат.

№ 1.01845.2500; изопропанол «Fluka» (США) кат. № 34965;ацетонитрил«Sigma-Aldrich» (Германия) кат. № 34967; хлороформ «SigmaAldrich» (Германия) кат. № 372978; диэтиловый эфир «Acros» (Германия)кат. № 11790.Химические реактивы: N-methyl-bis(trifluoroacetamide), «Sigma-Aldrich»(США) кат. № M0789-5ML; калия гидроксид, «Sigma-Aldrich» (США) кат.№ 656054-6x1L; соляная кислота «Sigma-Aldrich» (США) кат.

№ 84415100ML; кислота муравьиная 99% «Ч» ГОСТ 5848-73; дихромат калия «SigmaAldrich» (США) кат. № P5271-2КG; серная кислота «Sigma-Aldrich» (США)кат. № 320501; додецилсульфат натрия «Merck» (Германия) кат.№ 8.22050.0100; гелий газообразный марки А ТУ 51-946-80; магния сульфат49безводный «Merck» (Германия) кат. № 1.06067.1000; натрия ацетатбезводный «Sigma-Aldrich» (Германия) кат. № S2889; сорбент С18 «AgilentTechnologies» (США) кат. № 12213012; сорбент PSA «Agilent Technologies»(США) кат. № S2002; глюкуронидаза из E.coli «Roche» (Германия)кат.

№ 3707601001;натриясульфатбезводный«Sigma-Aldrich»кат. № 238597;натриягидрофосфат12-водный«Sigma-Aldrich»кат. № 71636;калиядигидрофосфатбезводный«Sigma-Aldrich»кат. № 60218; азид натрия «Sigma-Aldrich» кат. № S2002; карбонат калия«Sigma-Aldrich» кат. №209619; калия гидрокарбонат «Sigma-Aldrich»кат. № 237205.Колонки для ВЭЖХ: Hypersil Gold Biphenyl размером 75 4.6мм, сдиаметром частиц сорбента 3.5мкм «Thermo Scientific» (США); Hypersil GoldBiphenyl размером 50 4.6мм, с диаметром частиц сорбента 1.9мкм «ThermoScientific» (США); Zorbax Eclipse Plus C18 размером 2.1 мм х 150 мм сдиаметром частиц сорбент1.8 мкм (Agilent, США).Колонки для ГХ: HP-5MS и DB-5MS размерами 30 м х0.25 мм, толщинанеподвижной фазы 0.25 мкм (Agilent, США).Во всех экспериментах использовалась ультрачистая вода, полученная сиспользованием системы Milli-Q Integral 3 «Millipore» (Франция).Фильтрование подвижной фазы осуществлялось при использованиисистемы для фильтрации элюентов фирмы Agilent с нейлоновыммембранным фильтром диаметром 45мм и размером пор 0,45 мм.Глава 3.

Изучение адсорбции экзогенных веществ на волосахПрирода адсорбции экзогенных веществ на волосах человека позволяетсделать вывод о том, какие способы и методы экстракции таких соединенийиз волос следует применять при проведении химико-токсикологическогоанализа данного биообъекта. Так как основными веществами, отвечающимиза соединения экзогенных соединений с волосами, являются меланины, зарубежом проводятся исследования, посвященные изучению адсорбциивеществ различной природы на подложку из меланинового полимера.Задачей было изучить адсорбцию веществ непосредственно на волосах.Для исследований нами был выбран (1-пентил-1Н-индол-3-ил)(4этилнафталин-1-ил)метанон (JWH-210).

Данное соединение представляетпрактический интерес в области химико-токсикологического анализа, т.к.входит в состав курительных смесей типа «Spice». Поэтому оно способно какадсорбироваться на поверхности волос из дыма, так и проникать в ихструктуру из кровотока после курения смесей.503.1 Методика выполнения экспериментаВ ходе проведения эксперимента в качестве адсорбентов использовалирусые и темные волосы, отмытые от посторонних примесей и измельченныев порошок с помощью шаровой мельницы Fritsch Pulverisette 23.

Дляпроведения адсорбции брали навески измельченных волос массой 150,0±5,0мг и помещали и чистые полимерные пробирки. К навескам волос добавлялипо 5 мл метанольных растворов JWH-210 в различных концентрациях.Растворы аналита были приготовлены из стандартного образца фирмыCayman Chemical (кат. № 10644) с чистотой ≥ 98%. Для проверки адсорбциина стенки пробирок проводили холостой опыт на чистой полимернойпробирке, не содержащей волос. Отбор проб для анализа проводили синтервалами 0,5; 1; 2; 3; 5; 10; 15; 20; 30; 60; 90; 120 и 360 мин.