Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - 2001), страница 14

ТЬе с)»ор(алли)с ргосе(ил аге Гоипд гпатп(у тп сйе юрегпасапс, Кеюарепс| сЬе рейе1, чнЫсй сои(а)пл сйе гпегпЬгапе Ггасйоп апд тпю|иЫе Епс)иаюп Ьотйей |и 100 р( о( 0.7 м ТпйнС( (рН 8.0). То ге(еате Сйе РЬоА Енл(оп рготе(пь (гоги тйе репр|аяп|с лрасе, р(еате лес тйе ране| оп райе 7 5.43. 6. Адд ап ет!иа( чо(опте о( 2х 505 де(-(оад(пд Ьи((ег Со еасЬ о( Сйе юЬсейЫаг сгасСюпл, ипх Сйе ю)одопа чтей, апс| сйеп Пеас сйе лаитр(еа со 7 00"С Гог 5 гпгоисея Сепспйлее сйе Ьо|3есl багор|ел ас гпах|гпигп ареед Сог 1 гптписе а1 гоопт 1егпрегасиге тп а пт|сгойлее.

7. Ьоад ап ес(иа( но|итие (гоги еасЬ от' сЬе Ггассюпб оп а 70% 505-ро(уасгу(апт(де ее(. В. Кип сйе ее( ас 8 — 7 5 лг(сит ипЯ сЬе Ьгогпорйепо! Ыие геасйел сЬе Ьоиогп о( сйе геаоМпд це(. 9. 5(а|п сЬе Ве( ччхсЬ Соогпаяде Вг(й(апс Вйле со де1ептипе сйе еиЬсейи|аг |осайоп о( сПе Гоге(еп ргосе|п апд 3 Ьочч ейесСЫе|у Сйе рготетп ь лесгесед тпСо Сйе репр|аяи. Рго1осо! 5 Риппсабюп ог Гиьюп Рго1е~пь Ьу Айпйу СЬгогпа1оцгарЬу оп СЫайюпе Ацагоье с|5|ом ркотнг|5 гхрк85580 гком Рсех иссток5 сомтл|м л сштлтн|омс 5-сгапхеегаае (от) пю!есу ап6 сап йегеЕоге Ье рип6ед со пеаг Ьотоцепессу Ьу аЕВпку еЬготасоцгарЬу оп ц1исайюпе-ацатье.

СВТ8 аге а с1ая оЕ епгутех сЬас и61|хе ц1шасЬюпе (у-ц1исату1сухсе!пу!ц!усспе) аа а хиЬхггаге Со шасгсчаге Сохк япа11 псо!еси1ех чса Еогп|а|юп оЕ тегсарСипс асс|)8 !!а)соЬу ап|1 Ъец1ег 1990). Вееаихе сЬе аЕВп|су оЕ СЯТ Еог сса хиЪасгасе !8 |п йе хиЪт!1!ппо!аг гапце, ппгпоЬ|1|ха6оп оЕ ц!исайюпе оп ап ацагоае п|аспх такех а Ь!цИу ейк!епс аЕВпку сЬготасоцгарЬу геяп.

Воипб СЯТ Еияоп ргосеспа аге геа6!1у г)!ар1аее6 Егогп йе со!итп Ьу е1и6оп сессЬ ЬиЕЕега сопсаспспц Егее ц1иса|Ьюпе. ТЬе ц)исасЬюпе-ацагозе геяп сап |Ьеп Ъе гецепегасе6 Ъу сгеастепс ъг!|Ь ЪиЕЕегх сопса!п)пц 3 м ЬсаС1. ТЬе сараску оЕ сЬе ц1исасЬюпе-ацагоье Еог СВТ Еияоп ргосе!пх |х ЫцЬ (ц тц оЕЕияоп ргосет рег 1 п|1 оЕЪед хо)ите оЕ геяп). |Л|1|Ь Еияоп ргосе|п ргобиес)оп !п сЬе гапце оЕ 0.1 — 10 тц7 !)сег оЕ Е. соц си)сиге, сЬ18 сараску теапа сЬас 1ухасе Егот 1 1иег оЕ Е. соц сап Ье Егассюпасег) оп 1 т! оЕгеяп.

ТЬ18 ргососо! иаех а ЬассЬ |песЬог! со Ъ!п6, сгахЬ, апд ге1еахе |Ье Еияоп ргосеш Егот сЬе аЕВпку геяп. А1йоицЬ йе теСЬо6 18 гарсй сопчепгсопа! сЬготаСоцгарЬу ияпц япа11 д|хроааЫе со1шппа |х хогпеснпе ргеЕегаЫе Ьееаихе !с а11осех япа11ег апюипсх оЕ е!и6оп Ъийег со Ъе ихей гехи16пц |и а ЫцЬег еопсепсга6оп оЕ ргосе!и 1п йе е1иасе. МАТЕИАЕЬ САС)Т1ОЬ): Р1еахе аее Аррепб!х 72 Еог арргорпа|е Ьапдс!пц оЕ та|епа18 гпаг!|есС е)СЬ <! >. Вс|ЕЕегь апс/ Ьо!и6оссь Р1еаье атее Арреп|С)х 7 Еог согпропепСь оЕ 8!ос!г ьо!и6опя ЬиЕЕегя апд геацеп|я 01!иге 81ое)г хо!и!!опх Со СЬе арргорпа|е сопсеп|га6опя ОссЬЕосЬге|со) Е7 м) С)исайюпе е)ибоп Ьиууег 10 гпМ ге|Сисе|С 8!иСаСЬгопе 50 гпМ ТпяНС1 СРН 8.0) РЬоьрЬаге-ЬиЕЕегег7 ха)гпе ЕРВ5) Е4'О Тп|оп Х-700 Е0.2'4 гМ 75.3б Ргогосо! 5: Риг!)гсаг(оп о! Гиг(оп Ргоге)пг ЬуАфтгу СЬготагоуаРЬу оп С1шайгопе Адагоге 15 37 Епкугпе5 апс! Во1Тег5 О)'ч!аге (5 тфт!) (ухойте КХазе (5 та)т!) ГЬготЬ(п, Еп(его)г(пахе, ог Еас(ог Ха го)иГ(оп РоПочг йе гпапо(асгигега !пгггосгюпь Гог йе ргерагагюп апг( агогаае о( йеае ргогеагеа.

Се!5 Ро!уасгу!атЫе Ке! (10;4) сои!а(п(пВ 5Р5 (! > рог ргерагаиоп о(5))5-ро!уасгу!апггае ае!а огег( )п гЬе аерагаиои о( ргоге)оя р!еаке гее Арреойх Гс Сеп1г!Епце5 апг! Во1ог5 5огча)! 55-34 го(ог ог ег)игча!еи( прес!а! Ег!о!рпгеп1 С)игагЬ(опе-ацагоье геяп И весеяагу, ад)огг гЬе сопсепггапоп о( йе геяо х1гЬ 209е ейапо! го пгаЬе а 509о (ч)ч) г!оггу. Нурог)ест~с пеес()еь (15-, 22-, апг) 25-Ваице) Чес1огь апг! Вас$ег!а! Яга!п5 Е. со!1 се!)а ехргеах(пВ а гесотЬ(пап! С5у (ияоп ргоге(п (сеП ре(!ег цепегагег( т 5(ер 7 7 о( Ргогосо! ! ог 2) МЕТНО0 Ргерага6оп оЕ Вге Яо1а1!г!опе-АВаго5е Ве5!п 1. Сеп(1у 1пчегг гЬе сои!а)пег о( йе вша(Ьгопе-аВагоье геяп го пих гЬе а!иггу. 2. Тгаиа(ег ап а1п)иог о( (Ье 51иггу го а 15-гп1 ро1ургору1епе шЬе (2 гп! о( йе 51иггу ъч111 Ъе пеедег! (ог еасЬ!00 ги1 о( (Ье ог)а)па! Ьасгег)а! си!шге).

3. Сепгп6лце гЬе гпЬе ас 500е (2100 грт ги а 5огчаП 55-34 гогог) 1ог 5 т)пигеь аг 4"С. Саге(и11у геточе аис) с!1ксагд йе хирегпагапг. 4. АсЫ 10 Ьес! чо1шпеь о( со!0 РВ5 го йе геяп, апс1 ппх гЬе ь1иггу Ьу 1ичегг!пВ йе гиЬе хечега! йиея Сепгг)(ице йе гиЬе аг 5005 (2100 грт ги а 5огча11 55-34 гогог) (ог 5 т)пи!ее аг 4"С. Саге(и!!у геточе аис! с!1асагс) гЬе хирегпагапг. 5.

АсЫ 1 гп! о( со!а РВ5 рег пи1В11гег о( геяп го гпа1се а 5096 51иггу. М)х гЬе 51иггу Ьу )ичегг)иВ гЬе шЬе нечего) !пиеа Кеер йе аиарепяоп оп ке ииВ1 гЬе се11 ехггасг Ьах Ьееп ргерагес1. Ргерага6оп оЕ СеП Ех1гас1 6. Кехиарепс! (Ье се11 ре11ес (е.В., (гот Ргогосо1 1, 5гер 17) 1и 4 т1 о(РВ5 рег 100 ги! оу се11 си1- гиге.

!5.38 СЬарсег !5| Ехргея|оп о) С!оиег) Сепег |и ЕюЬегЫиа соП 7. А|Ы 1уаохуп|е со а 6иа! сопсеисгас)оп оГ 1 тд/т! апс( июиЪасе йе сеП яльрепяоп ои ке Гог 30 пипи!ею 5ечега! ргосососл пле юп)еасюп ог а РгепеЬ ргеы со сузе се!В ЬеГоге а(6шсу рпп6са6оп оГ сЬе С 5Т Кпюп ргосе|п. Еуюгуп|е Ь пюге герго|спс|Ые апг) ачок)л сЬе сасас!уяше )ул)г сЬас сап гесеа|е ошег п|е|пЬгапе ргосеспк апс( о|Ьег шосесп!е| йас саиле а88ге8ассоп оГ |Ье С5Т Гыюп ргосе|п ог сорппуу |ч||Ь |с оп 8)исасЬюпе-а8агоье еЬ|ошасо8гарслу. А|Ы 10 п|1 оГ 0.2% Тпсоп Х-!00. Г)ае а ауппВе со ш!есс сЬе ю106ои Гоге!Ыу !исо йе ч(я соиа сеП 1уаасе. 5Ьа1се сЬе сиЪе н!Вогоиа!у аечега! Птеа со пих сЬе ю106оп оГ десегВепс аис( сеП 1уьаге.

АгЫ )3Хаае апс) КМаае со йе СиЪе еасЬ Со а 6иа1 соисеиСгагюи оГ 5 !си!т1, аис( сои!!иие йе иссиЪа6ои ъч(сЬ госЫпВ !ог 10 т!иисеа ас 4"С. Кето| е сЬе !пю1иЫе |1еЪгса Ьу сепС66|ВаПоп аг 3000д (5000 грпс ш а 5огчаП %-34 гогог) Гог 30 т!пигеа аС 4'С. СоПесС сЬе ялрегиасапс (сеП 1уаасе) !и а ПеаЬ илЬе.

А|Ы 06сЬюсЬгеПо! со а 6па1 сопсеисгас!ои оГ ! тМ. сс и|ау Ье песеяагу со рая сЬе юрегпасапс сЬ|оп8Ь а 0.45-ргп 6!сег со ргечепс с!о88)08 оГ йе геяп с)пг(08 рипТ|сассоп оГ |Ье С5Т йяоп ргосесп. Тпсоп Х- ! 00 ь а|Ые|! со |Ье а!рггу оГ !убое|С се!В со ргсчепс а88ге8аиоп. Ресег8епсл сЬас Ьаче Ьееп герогсе|С со |оспЬ|сые С5Т Гпиоп ргосе|п| ап|С пос |псегуеге нисЬ сЬе 8)цсасЬюпе-а8агоке а(6шсу рип6сасюп |сер |пс!пЛе )% (ч)ч) Тп|оп Х-)00, !% (ч)ч) Тлчееп-20 р!и| )0 |пм гбсЬюсЬ|е|сос, 0.03% (лчлч) 5Р5, апс) !.5% (сч)ч) М-!апгоу)ьагсолспе (5ппсЬ ап|С !оЬп|оп !988; Егап!|е! ес а!.

)99); Спесо е| а!. !992). Тлчееп-20, 5Р5, ап|С Ьг-!азгпу!|агсояпе сап Ье ас)бес) |и р!асе оГ, ог япш!сапер!у |ч)сЬ, сЬе Тпсоп Х-)00. Рсеазе |ее йе рапе! оп ТКОС) В$.Е5НООТ)ЬСС; сЬ)5ОЕРВЕЕ РКОТЕГЬ)5. Рссгсйса6осс о! йе Гсс5сОп Рго1есп 9. СотЬ|пе йе сеП !уаасе |чиЬ ап арргорпасе атоипс оГ сЬе 50% 81иггу оГ 61исайюпе-аВагоае геяп ш РВ5. (Тае 2 т1 оГ 51иггу Гог еасЬ !00 т! оГЬасСепа1 си!гиге илес! Со та1се СЬе ргогеш ехсгасс. 56а1|е йе иихсше Кепс!у !ог 30 т!писеа ас гоопс сетрегасиге. 1О.

Сеисг|ТиВе йе пихсше ас 500ч (2100 грис |п а 5огчаП %-34 госог) Гог 5 т!писеев ас 4'С. СагейлПу гетоне йе аирегпасапс. 5аче а яиаП апюипс оГГЬе ялрегпасапс со апа!ухе Ьу Ю5- ро1уасгу1атЫе ие1 е!ессгорЬогеяя 11. |СгааЬ ипЪоипг) ргосе!па 6огп сЬе геяп Ьу агЫ!пц 10 Ье|1 но!итеа оГ РВ5 со сЬе реПес, апс) пих Ъу |пнег6пд сЬе сиЬе аечега! сииея 12. Сепсп6лВе ас 5005 (2!00 гргп |п а 5огнаП %-34 госог) Гог 5 пипи!ел ас 4'С. СагейПу гепюче СЬе юрегпаСапС.

5аче а яиаП апюипС оГ СЬе ьирегпаСапС со аиа!уге Ьу 5Р5-ро1уасгу!атЫе Ве) е1ессгорЬогеяя 13. Кереас 5серь 11 апс) 12 снчо гпоге сииея 14. Вопи|) С5Т ГЬяоп ргосе!п |иау Ье е1исед 6огп сЬе геяи ияп6 д1исасЬюпе е1ибоп Ъийег. А1сегпаиче1у, С5Т Гияоп ргосе!иа сиау Ье с1еачег) нчЬПе 86П Ьопис) со сЬе це! нч)сЬ йгогпЬ!п, епсегоЫпаье, ог Рассог Ха, ПЬега6пд сЬе ргосе!п оГ !псегеас Ггогп йе СВТ гпо|есу. ЕШТ!ОЬС ОЕ ТНЕ Е()5!ОМ РКОТЕ!ЬС О5!йС СШТАТН!ОЬСЕ а. 61исе сЬе Ьоип|1 ргосе|п Ггот йе геяп Ъу ас)6!06 1 Ьес( чо1шие оГ 01исасЬПопе е!06оп ЬиГГег со сЬе реПес. 1псиЪасе сЬе сиЬе сч!ГЬ депс1е аЕПсасюп Гог 10 т!писеа ас гоо|и сегпрегагиге.

Ь. СеиС66лце сЬе тЬе аа !и 5сер 12. ТгаиьГег йе ялрегпасапс (нчЬ!сЬ сопла!па сЬе е!те|1 сияоп ргосеш) со а 6е|й сиЪе. Рюсосо1 5: Ригфсас(ои осриз(ои Рюгегиз ЬуАфпиу СЬгогиасоуарЬу оп Б1исайиопеАеагозе 2539 с. Кереас 5(ерз а апс) Ь ссч)се шоге, рооПпП аП йгее зирегпасапся ЕсерепсПп8 оп сЬе раг6си!аг Еияоп ргосесп Ье(08 рип6ей а яВп!Всапс апюипс оу ргосе)п псау гешаш Ьоипз( со сЬе Ве! ГоПосч)п8 сЬе е!шюп зсерз, ТЬе чо!ипзе оу е!ииоп Ьисуег апс) сЬе е1исюп сипез шау часу апюпВ Сиз)оп ргосешз. Ас(8!с)опа! е106опз шау Ье гецшгей Мопиог сЬе е!иасез Тог СВТ ргосеш Ьу Ю5-ро!уасгу!ашЫе Ве! е1ессгорЬогеяз. Езсипасе сЬе у!е!г( оу Тих!оп ргосесп Ьу спеазиппП сЬе аЬзогЬапсе ас 280 шп.