Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - 2001), страница 11

1990). роге)дп депеа епсосИпд тос)егате!у тох)с рготе)па аге атаЫе |и йе ргеаепсе о1 РСуа5, и Ьегеаа депеа епсосИпд Ь!ВЬ- !у !ох|с ргосе| па тес) ш ге р1 ухЕ Еог яаЬИИу. Суаохуше ехргеааег) Егоп| тЬеае Сгчо р)аяп)сЬ )псгегьеа И|е !ад Игле Ьесгчееп !пг)исгюп о) йе КМА ро!у|пегаае апг) гпахппигп ехрге|ьюп оНЬе Еоге|дп рготе|п.

ТЬь ааиаиоп агьеа Ьесасье епоидЬ КМА ро!угпегаае шиат Ье ехргетьес! со очегсоп|е |пЫЬ)Поп Ьу йе !уаотуте Ье!оге йе Еоге)дп депе сап Ье тгапаспЬед. ТЬе ргеаепсе о! |Ье РСуа5 ог рсуаЕ р!ИьгпкЬ апс) Ьепсе о! чга! !уяллуше ч!|Ь)п ап ехргеьяпд Е. соБ сеИ сап Ье ехр!оаес! то Еасд)тате !уа)а о1 сеИа ат йе Игле о1 Ьагчея (р!еаче аее Г)доге 15-5). Тгеатгпепь йа! адочч йе )птгасеИи!аг !уаолуше ассеаа то )Ье сеИ чад !еас) то гар)г) сеИ !уяя Се!Ь ч|)тЬ сЬеае р!|ьш)с)а !ухе аропталеоия !у а)сег гсьиарепаюп )п сеИ ч||ьЬ Ьи))ег апс! аечега! сус!еа о1 Егеел)пд ап|1 тЬачепд.

А!|егпадче!у, !уча сап Ье ассо|прдаЬе|Л Ьу геаиарепсдпд йе сс!!а !п впаЬ Ьиссег соптяп)пд О. );4 !г!ч) Тпгоп Х-! 00. Рго1осо! 3 Ехргеююп от С!опед Сепеь ~и Г. сой Выпь Йе Вас1епорйаце Х р„Ргогпо1ег т не Ротчевтттт влстееиовнлсе х Рт Рвомотев ь весититю ЬУ а тешРегатиге-хепит)че геРгеЯ хог, с1ь857, тчЬкЬ гергеааеа тгапхсПртюп ат 1отч, Ъит пот ат е!ечатед, сешретатшех. Е. соц хтга)пх ЬагЪоПпц йе с!ь857 цепе ишя тЬегеуоге Ье ихес) ах Ьоаь чч)тЬ честогх саггушц тЬе Х р, ргошотег. Т1те гергемог цепс ь ивиацу ргехеттт оп а детест)че Х ргор1таце, тч!ис1э а!хо еттсот)еа с1те Х Я ргосеш, аи аптацоп)хт от тгапхсПртюп тегиипатюп.

ТЬе апгЬеппшатюп 6лпстюп от тЬе )чт цепе ргос)ист сап епЬапсе ехргехяоп Ъу тасП)тат)пц В)4А ро1ушегаае геас!1ЬтоицЬ оу хрис)оих теппшацоп ятех чч)тЫп тЬе 1оге)цп с131чА!цепе. ТЬе рт честогх тЬегетоге Ьаче ттчо гьеЬП ргорегПея ТЬеу аге ейк)епс1у гергеххет! ат 1отч тешрегатигех апс1 тЬеу аге Пот)сПу шс)псе<1 ат ЫВЬ тегпрегатигея А росепьа1 с)татчЬас)с от р, честогх 1а тЬат йе тептрегатиге хЫЙ шс)исеа пот оп1у тЬе р рготпотег, Ьит аЬо тЬе сеПи1аг Ьеат хЬос)с цепея хоппе от тчЫсЬ епсот!е рготеахех (Виец ет а!. 1985). А ге1атет! РгоЫеш ь тЬат Ьеат 1пс1истюп птау сагье тЬегша! т)епатитаПои оу йе ехргеххет) рготеш апс) аиЬает)иепт Еотшатюп от аццгецатех ог шс1ияоп Ъосцея ТЬехе ргоЫепь сап Ье ацеч)агет) Ъу ыяпц а !уаоцепк Ьохт саггутпц а ЪастегюрЬаце Х с! ' 1ухоцеп тЬат сап Ъе шс!исес! мм)тЬ тпП- отпус)п С ог па1Ытхтс асЫ (5Ьатхшап апс1 ВовепЬегц 1987).

А1сегпаПче!у, ргоЫеиь сап Ъе амо)й ес1 Ьу ияпц а с1 цепе мчЬохе ехргеахюп ь соптгоПет! Ъу йе тгурсорЬап ргошотег!орегатог (М)етсЬеис)аЫ ет а1. 1986; ЬаттаП)е ет а1. 1993). ТЬе ихе оЕ тгурторЬап-1пт!ис)Ые зухтетпя шс!ис1- 1пц а честог хуатети тЬат ешр1оух тЬ)огес!ох)п тияоп рготе)пя ы Йтсиюет! 1и тпоге с!етаП ш йе рапе1 оп твЧРТОРНАй)-1!чстОС1ВЕЕ ЕХРКЕ551ОН 5т5ТЕМ5 оп тЬе гоцотч)пц раце.

цечега! ййегепт рт честогх аге ачацаЫе, )пс1исцпц тЬе РНс)В зеьех (Вегпатс) апт! Не!шх)с) 1979), РР1.с хеПеа 1Вегпаш ет а1. 1981), РКСЗО (Вао 1984), РА51 (ВохепЬегц ет а1. 1983), РВМ1/РВМ9 (М)евсЬепс1аЫ ес а1. 1986), апс) РТгхрив (1аттаП)е ет а1. 1993). ТЬе сгапхст)ртюп)тгапх1атюп яцпа1х 1и тЬеае честотх мату сопхЫегаЫу, апс! йе РНгпегх ихес) т!пт)пц РСВ то шот!1уу йе с)3)м)Атцепе со Ье ехргеххес) пшвт тЬегетоге Ъе с)еяцпес) арргорНате1у. Ойег местог аухтешх йат ге1у оп тЬе с1ь857 гергегьог то геци1ате ехргехяоп 6отп тЬе Ьассет)орЬаце Х р„ргогпотег апс! саггу тЬе гергеяог цепе оп тЬе ехртевяоп р1аяпЫ 1тве1т' Ьаче Ъееп т!ехст)Ьед ргем)опт!у (е.ц., РСЯЧ2; 0иееп 1983).

ТЬеае честогх аге ихей1 ччЬеп соитр!ете вЬит о)Т от' йе ипшс!исес) ЬастегюрЬаце ргошотег 1х тес)и)тес!. Рог а дезст)рт)оп от' чат)аЫеа йат айест йе ехргеяяоп оу тоге)цп рготе)пв 1и Е. со)т', р1еахе хее йе тгоиЫехЬооПпц рапе1 ат тЬе епт! от' Рготосо1 1. 15.25 15.26 СИар|ег 15| Ехргелиои о) С3оиес3 Сепел т ЕасЬепсЬ|а со!| ТКУРТОРНАЬ3-135301)С1ВЕЕ ЕХРКЕ553О353 5У5ТЕМ5 М|еасЬепс|аЫ е| а|. (7986) л|ексг|Ье|$ а Ь|пагу ехрге|ьюп ануе(ет сопе|ейпд о1 а р|аыт|с3 нес(ог сапу| пд а Ьас(еиорЬаде Л р ргогпо(ег апс3 ап |п(едгагес1 сору о1 а чн(3|$-(уре с| депе |нЬоае ехргееаюп |х (пл|ис|Ые Ьу $|ур(орЬап. ННЬеп се|В сапу|пд |Ье р|йьгп||$ неаог аге ргорадасе|3 |и гпе|33игп сои!а|п|пд |ою сопсеп(гайопе о1 (гур(орЬап, йе ччйй(уре Ьас|егюрЬаде герге|ьог 'ь ебс|епйу ехргеаее|3, апс3 1оге|дп депеа соп(гойес1 Ьу йе р ргото(ег аге герге|ьед, Ас||$33|оп о1 $|ур(орЬап (о йе те|3!от |юррге|ьеа ауп(Ьеа|е о1 (Ье с| депе ргос1- ис| апс1 |еас|е (о ап |пс1исйоп о1 йе рои ег(и| р, ргогпо(ег апс3 ей)с)еп( ехрге|ь|оп о1 (Ье 1оге|дп рго(е|п.

угур(орЬап-3пс|ис|Ые ауа(егпа Ьаче аенега3 ас|напсадее очег (еи|рега|иге4вдис|Ые аупеп|8, Е|га(, дгочч(Ь ап|$)пс|иа|оп аге сагпес$ ои( ас 37ес, а (етрега(иге а! ъчЬ|сЬ ауп(Ьее|а о1 Ьеа( еЬос|с рго(е(па |а по! гпаг|сес$- |у !ил|осе|3. 5есопс3, |п|1исйоп чн)(Ь (гурсорЬап 'ь ассогпр|ьйед Ьу ылрр|егпеп(айпи о( (Ье те|33игп, а 83тр|ег (ае|с йап Ьеа! $пс|иа)оп. ТЬ|г|3, геди|а()оп 'ь ()дЬ(ег Ьеса|ье йе чч)3|3-(уре с$ гергеаеог Ьая а Ь|дЬег а(йп|(у (ог йе р„орега(ог (Ьап (Ье с|Ь857-епсодес$ рго(е|п. Г|пайу, Е, сой е(га(п С$724 соп(а|па |Ье с1 депе Пи|се|3 (о (Ье 5а(тоиейа (урИ|гпиг)ит сгр рготосег(орегоп 3пседга(ес3 |п)о йе нпрС |оссь о1 (Ье Ьас(еиа| сЬгогпоаогпе. ТЬ|е депейс аггапдегпеп( |ыпоге а(аЫе йап ойег (гур(орЬап-геди|а(ег3 с1 депее (Ьа! аге ргеаеп! оп (Ье Г ердогпе, апс$1ог йь геазоп, С$724 'ь йе Ьоса сей о1 сЬо|се.

(ачгай|е е( а|. (7993) Ьане с|еасг|Ьес$ а чапайоп о1 (Ье р;с1 Ьас|еиа| ехрге|ь оп еуа(егп |п ччЫсЬ йе (оге|дп рго(е|п о1 3пгегеа! ь ехрге|ьед ае а (сьюп рт(е|и чн3(Ь Е. со|3 й|огес|ох3п, а ета13 (7 7.7 3сС|) су(ор|аяп|с рго(е|п. ТЬ|е еуз(ет сотЬ|пев а (гур(орЬапйпс$ис|Ые с$ депе, (Ье Ьас(егюрЬаде 2 р„ргогио(ег, апс3 (иаюп рго(е|п (есЬ по|оду, АП о1 (Ье ас|нап(адее а|ьоаа(ес$ ън(й (Ье ехргееяоп о1 а 1оге|дп гпо1еси|е |ь а (ив|оп рго(е|и асспле |и (Ые вупеп|, |пс1исйпд гес|исес1 1оипаиоп о1 )пао|иЫе (пс|иаюп Ьгх||ее сои|а|и|пд |Ье 1оге|дп рго(е|и, епЬапсе|$ е(аЫП)у о( (Ье ргскйлс(, (Ье аЬППу со рис|(у йе 6ьюп рт|е|п Ьу е|тр|е ргосес|игеа, апс$ рго(ео|уйс ге|еаае о1 йе (иге|до рго(е|п 1гогп йе дьюи раг|пег.

О|Ьег ехагпр|еа о1 (сьюп-рго(е|п-Ьаеес| ехрге|ьюп еуа(епь аге йе д|ига(Ьюпе 5-(гапа(егаае еуе(ет, (Ье П-да|ас(оа|с|аее еуа(егп, аи|$(Ье п|айоаеЬ|п|$)пд рго(е|п. Риийсайоп о( Ььюп рго(е|па ргос|исе|$ |и йь еуа(егп (аПеа ас|нап(аде о1 (ъчо ргореп|еа о1 (И|осел|ох|и: (7) а ип|||ие ялЬсейи!аг а|нос|айпи лч3(Ь|п йе ехрге|ь|пд сей (а( ал|Ьеяюп липее) йас иылайу айоиь ге|еаче о1(Ье (иеюп ргоге|п |п)о (Ье гпе|йигп а7(ег гьгпойс аЬос|с ог 1гееке)(Ьаъч|пд ап|$ (2) ап епЬапсес3 (Ьеипа| е(аЫ1Пу йа( айои а еппсЬп|еп| о1 йе дьюи рго(е|п Ьу |псиЬа(юп о( сей |уаа(еа а| ЫдЬ сегпрега(иге ((аиай|е е| а!.

7993). ТЬе согпропеп(а о( йе йюгес$ох|п (иаюп рго(е|п ехрге|ьюп вуа(ет аге анайаЫе 1гогп 3пн$(годеп Согр. МАти1АЬ СА(7Т1О|х3: Р!еаае аее Аррепсдх 72 1ог арргорпа1е Ьапс|!$пд о1 гпа1епа18 таг|се6 ип|Ь <|>. Вп6ет5 апс1 Ьо1о6оп5 Р1еаае аее Аррепг||х 1 1ог соплропепп о1 81ос|с ао1ипопа, Ьи(1ега, апс3 геадеп18. 031и1е 81ос|с ао!и13опа 1о |Ье арргорпа1е сопсеп1гапопа. Сооталлйе Вь!йап( В3ие 8(а|и ог 53!нег з!али Р|еале еее Аррепйх 8. 7 х 5Р5 де3-)оас)лпд Ьийег Яоге |х 5335 де1-|оасйид Ьи11ег |ас|с(ид йгЬю|Ьгеио1 а| гоои| |еи|рега|иге. АсЫ гйгЬюгЬгепо1 Егот а 1 м елее|с )|ы Ье1оге гЬе Ьис(ег |я сией е-)гур(орИап 170 тд/тд Се15 Ро3уасгу3ат(с7е де) (70%) сои(а|п|пд 5О5 <|> Еог ргерагапоп о( ЯЭ5-ро!уасгу1атсде де|я |ьеа |и йе еерагайоп осрго|ешь р|еаяе еее Аррепгдх 8.

Х(лс1е31с Ас|115 апе1 О1фоппс!ео611е5 Сепе ог с0И(А Егадтеп( оЕ (п!егеа( Ргогосо! 3: Ехргехасол ос С!опед Сепег т Е. со1| Еух!лд йе Вас|елорЬаде ) рг Рготогег 15.27 Мее!!а СВ адаг р!агех ЕВ глесйит С|ереп8!п8 оп |Ье чеяог ыей сЬе !.В гпейшп ап|С а8аг р!асеа гаП геди!ге аирр1егпеп|апоп чг!|Ь ~ апх оиа апПЬю||ея ЕВ тесдит Ьеасед Со 65 С Ор||опа!, р!еаве аее 5|ер |5. М9 т!л!та! |лесдит Айег асеп!Ьасюи, аирр!ешепс |ЬЬ глейип| сг!|Ь 0.596 (|чГч) 81исоае, 0.2аа счдч) сааапипо ае|аа, ап|С апПЬюПса аа иге|Се|), ТЬ|а шейшп Ь ше8 |ч!|Ь сгурсорЬап-ше ис|Ые гс-целе-Ьаае|С р, ехргеыюп чеесога. Сеп1г!Еоцеь апс! Ко1ог5 5огча!! С5А гого| ог едипга!елс Ьресса! Ес!о!рпсеп1 Во)!!лд-и агег Ьай 5Ьа)г!лд тсиЬасогх ргехег Со ЗОоС алд 40 С ТЬеае !пеиЪасогь аге гециггеа оп1у Па |еп|регасые-аеияПче аПе1е оЕ йе ЬассегюрЬаае Л г! Пепе ь иге|С.

Ас!с!!1сопа! Кеацеп18 5гер ! оЕ й!з ргогосо! гедипех СЬе геаделгь Лагед т СЬаргег 8, Ргогосо! 7. 5гер 2 оЕ СЛ|х ргогосо! геди!геь ГЬе геаделп Е!хгед т СЬаргег 7, Ргососо! 77 ог 79. 5|ер 3 оЕ й|х ргогосо! гедиггех йе геаделгх !|хгед т СЬаргег 7, Ргогосо!ь 23-26. 5гер 4 оЕ СЛ|х ргогосо! геди|гех йе геаделгх Вхгед !л СЬаргег !2, РгоСосо! 3. Чес1огь апе! Вас1ег!а! Мга!п8 Е. соП ЬагЬоллд едЛег |Ье 15857 аде!е ог тв!д-суре аде!е оЕ ЕЬе Ьассег|орЬаде Х с! деле !и ьггагп М5219, СЬе г!!|857 аае1е |а !паис!Ые ЬУ Ьеа| аЬосСг. 5|гаси 6|724 сАТСС 5515! с! Пепе) ЬагЪоп а СгургорЬап-!п|Сис!Ые МИ-Суре г! Пепе.

р| Ехргехгдол чесгог Ее.д., рНС)В, рРЕс, рКСЗО, рА52, рСЕЗС|2, рАЫ781, алд ругхГиа) Рохдгге солгго! Ее.д., а р, ехргехх!ол чесгог елсосЛлд а Еияол ргосет оЕ деЕтед 5!хе) МЕТНО0 Ргерага1!оп оК Вас1епа Соп1а!п>пе 1!се КесопсЬ)пап1 Ехрге85!оп Чес1ог 1. МойЕу Ьу РСК ЕСЬарсег 8, Ргососо1 7), ог ьо1асе Ъу геаСпспоп епгуше г)1деассоп, а Егадшепс оЕ РХА саггу)пд 5'- ап|1 3'-геасг)ссюп епхугпе 8)сеа сошрассЫе сч)сЬ ясех )п а р, ехргеааюп чессог. сЕ песе||агу, роясюп а асгоп8 пЬоаоше-Ь|пйп8 я|е ирасгеап| оЕ сЬе |пгаассп8 АТС оЕ сЬе еОС4А/Пепе.

Сопасгись Пепегаге|С Ьу РСК ьЬоиЫ Ье ае|Сиепсе8 ю ел|иге сЬас по аригсоиыпшас|ож очаге !псгог)иге|С |1ипп8 Йе агпрППсасюп геасдопя 2. Е)Пасе сЬе РХА Егадшепс сопсашшд йе су)ЫА/депе оЕ )псеге|п )псо сЬе ехргеааюп чессог ЕСЬарсег 1, Ргососо1 17 ог 19). 3. ТгапаЕопп ап Е. сод спгаш сопсасп)пд сЬе с1В857 а11е!е ог сч)1с1-суре с1 депе сч)сЬ а1)даоса оЕ сЬе 1)дасюп геасссоп. Р!асе а!нрсоь оЕ сЬе сгапхЕогшасюп геасс)оп оп 1.В п|ейшп сопса|п|пд йе арргорпасе ае!есс|че апс)Ъюс)с (иаиа1!у аспр)с|11)п ас 50 рдЕп|1), апд шсиЪасе сЬе си1ыгех 15.28 СЬаркек !5: Ехркезз(оп оГС1окзес( Сепез кп ЕзсЬег)сЬ|а со1л очегшВЬЕ а! 30'С (ягашз ЬагЪоПп8 йе с(гл857 а!1е1е) ог а! 37"С (акга!из ЬагЬог!и8 а ггурсорЬап-)пс)ис)Ые чч!1О-куре с1 Вепе).