Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - 2001), страница 13

ВьСег! Гп СЬаргег 1, Ргогосоlь 23 — 26. !гьСед !и СЬаргег 72, Ргососо! 3. Чес$огд апд Вас$егса! Ягасод Е. соП ьсгагп Еяеппаду апу ьсгасп оЕ Е. гоП сап Ье ивегс со ехргеьв депеь с!опесс сп рЬоА чессогь. Осси ес а1. !1985! герогсесс а Гсчесо18 Ь!ВЬег у!е16 оЕ Еогесдп ргосесп !п всгасп УК537 сЬап всгаш С600. 5сгасп УК537 сапсеь йе рЬоА8 псшасюп, ап !псегпа! Пе!епоп гп йе адса1ше рЬоьрЬасаье депе. Носчечег, йе еойегепсе ш ехргеьяоп Ьепчееп сЬеье сюо всгагпь В ргоЬаЫу пос йсе со сЬсь шисас!оп, аь сЬе ехргеьяоп оЕ Еоге!дп ргосегпь ш Ьодеп!с счссйсуре ог РПоА8 ьсгаспь с!ось пос ййег !В.1.. ьсгаппег, регь. сопип.1, 1Е сЬе Гоге!дп ргосесп ы пос сохсс, йеп Ьасхепа! всгаспь сопсасшпд РГсо7! пшсапопь сап Ье ивегс. Весаиье гчп!с1-суре РЬоП депеь епсог1е сЬе гергеяог оЕ йе рЬо орегоп, рЬор шисапс ягаспь сопьсаипче1у ехргем депев сои!гадес! Ьу сЬе РЬоА ргоспосег !'сСгапгсег 19871.

Аь ипсЬ аП Ьассепа! ехргеяюп ьуьсешя сс спау Ье песеыагу со сгу пюге йап опе Е. сод ягаш со орсип!ге ьупсЬеяь7ехрогс оГ а д!чеп Гогегдп ргосеш (38ге!Гсегс ес а1. 1998!. ТЬе чапом всгаспь ьЬои!гс аЬо Ье дгосчп ас дсГГегепс сепсрегашгев со пих!ппге ехргеьяоп!ече1ь апс1 ргосе!и ьсаЬс16у !р!еаве ьее Ргососо! 11. рТА1529 ог рВАсе Р!аяпга рТА1529 В гсеьсг!Ьесс Ьу Осса ес а!.

!19851. рВЛсе Ь ачаг1аЪ|е Ггопс С.С, ьСгапд Еуьерагспсепс оГ РЬаппасеисгеа1 СЬегп!ьсгу, !!шчелпу оГ СаИопиа, дап ргапсысо1. МЕТНО0 Ргерага11оп о1 Вас1егьа Соп1а!оспе йе ВесопсЬспап1 Ехргеддсоп Чес1ог 1. МосИу Ьу РСВ (СЬарСег В, РгоСосо1 7Ь ог 1ьо! аСе Ъу геьСпсооп епкугпе с11деьС!оп, а ЕгадспепС оЕ Р19А саггу!пц 5'- апс1 3'-геьспссгоп епхугпе ясеь сопсрас!Ые чч!ЕЬ сЬе ро!ус!оп!пд ясеь сп РТА1529 ог рВАсе. Сопьсгисп депегасес! Ьу РСП вЬои1с1 Ье ьедиепсегГ со епвиге йас по ьрипоив шшаПопь снеге !псгогсисегс ссиг!пд сЬе ашр1с6сасюп геаспопь. Ршсосо! 4: Ехргелссоп оЕБесгесес) Рогег8п Ргосетл 15.33 2.

!л8асе йе Р)с(А Ега8шепс сои!а!п!п8 йе сРМА/Вепе оЕ ипегеас шсо йе ехргесьюп чессог (СЬарсег 1, Ргососо! 17 ог 19). 3. Тгапауопп ап арргорпасе Е. соВ асса!п сч!ЕЬ а!!с)иота оЕ йе 1!Вас!оп теас6оп. Р!асс а11с(иота оЕ сЬе стапаЕоппас!оп геас6оп оп 1В а8аг сои!а!и!п8 50 )с8)ш) ашрк!11!и, апс) спсиЬасе йе си!- сшеа очегп!8Ьс ас 37'С. Ла а пе8ас8 е сопсго(, сгаиа(опп а4йсюпа! ееПс оЕ сЬе сагпе ссгаш оЕ Е. соП сгЬЬ йе епсрсу ехргессюп чеесог. 4. 5сгееп сЬе сгапауопиапса Ъу со1опу ЬуЬгЫ!хас!оп апс1/ог тес!пес!оп епхуисе апа1усьп о!с8опис!еосЫе ЬуЪгЫ!гас!оп, ог с)!гесс Р!4А аес)иепсе апа1уяа (р1еаае аее СЬарсег 12, Ргососо1 3) оЕ р1аяпЫ ппп!Ргератасюпа.

Ор1!гпс!2а1!оп о1 1!ле !пдос1!оп о1 Тагде1 Рго1е!п Ехрге55!оп )с)ишегоиа атис)!еа ро!пс со йе иирогсапсе оЕ сЬе гасе оЕ се!1 ВгосчсЬ оп Еоте!цп ргосе!п ехргеаяоп. Рог сЬь геааоп, Ь ь ипрогсапс со илоппог сЬе пшпЪег оЕ Ьассепа !поти!асес) тисо йе Вгосчй шее)!иш, сЬе 1еп8сЬ оЕ сипе се11а аге 8госчп Ьеуоге !пдис6оп, апс! йе с)епа!су со счЬ!сЬ се11а аге 8госчп аусег !пс1ис6оп, Очег8гоый ог соо гарЫ Вгоюй сап очег!оас1 сЬе Ьассепа! аупйеис аррагаша апс1 ргопюсе Еоппасюп оЕ шс!ияоп Ъоб)еа. 5 1поси1асе 1-ис) си!ситес оЕ !.В шее(!иш сопса!пш8 50 (л8)ш1 ашркс11!п сч!сЬ опе со ссчо со!оп(еа сопсашш8 йе ешрсу ехргеаяоп чессог, апс1 опе со ссчо со1ошеа сои!а!п!п8 сЬе гесошЬспапс апс1 сопсго1 р!аяиЫа. 1псиЬасе сЬе си1сшеа очетш8Ы ас 37'С.

6. 1поси1асе 5 пл! оЕ !пс(исс!оп шее(!иш гипса!п!и8 50 )лц/ш! ашрк!11!и !и а 50-ш1 Вас)с сч!сЬ 50 )с! оЕ ап очетп!ВЬс си1сиге. !псиЬасе сЬе си!сшеа чч!ЕЬ аЬаЫп8 ас 20 — 37'С. рог а сПсеосяои оЕ Еассогс сЬас аЕЕеес ш4осиои, р!еасе сее йе лосе со 5сер 8 ш Ргососо! !. 7. Асчапоис сипе ро!пь аусег !посо!а6оп (е.8., О, 6, !2, 18, апс( 24 Ьоша), сгапауег ! ш! оЕеасЬ си1сиге со а ш!стоЕи8е сиЬе, шеааиге сЬе А, а !и а арессгорЬосошесег, апд сепспуи8е сЬе сиЪеа ас шахппшп ареес( Еог ! пиписе ас гоопл сетпрегасиге сп а ппстоЕи8е. Пепюче йе аиретиасапса Ьу аарпасюп. ТЬе рапессес оЕ сийлсиоп Егосп сЬе рЬоЛ ргопюсег аге с!отчет йаа йоге оЕ осЬег ргошосега, Ьееасье содоеиоп оссигс чг(сЬ 8гас(оа! дер!сиоп оЕ рЬоарЬасе Стого тЬе гпегПши, ТЬе орс(шош ПгочпЬ сепсрегасоге чгП! чагу сгссЬ еасЬ Соте!8п ргосеш со Ье ехргеяед апс( спгьс Ье ессаЫЬЬей егорьюаПу. В.

Кеаиарепс( еасЬ ре11ес ш 100 (с! оЕ 1х 5Р5 Ве!-!оас(!и8 ЬиЕЕег, апс) Ьеас йе аашр1еа со !00'С Еог 3 пшшсея Сепст!Еи8е йе сиЬеа ас шахптппп арее6 Еот ! пиписе ас гоош сешрегасше ш а пл!сгоуи8е, ап6 а!осе сЬеш оп ке ип61 а!1 оЕ сЬе аашр)ес аге со!!естес! апд геас)у со 1оас1 оп а 8е1. 9 Чгапп сЬе аатпр1еа со гоош сешрегаште аис1 1оа6 0.15 ОР „ипсь (оЕот!8!па! си!сиге) ог 40 (лц оЕ еасЬ сиарепа!оп оп а 109о 5Р5-ро1уасгу1ашЫе Ве1. ! О.

!сии сЬе Ве1 ас 8-! 5 сг!сш ип61 сЬе ЬгошорЬепо! Ыие геасЬеа сЬе Ьоссош оЕ йе гесо1пщ Ве1. ! 1 ° 5са!и сЬе Ве) чч!ЕЬ Соотпааяе Вп11сапс В1ие ог ас!чет, ог саггу оис ап иписипоЫос со ч!аиа1!хе сЬе (пс)исес1 ргосе!п (р1еаае аее Аррепс(!х 8). СЧЬеп ояи8 сЬе я8иа! сечоепее оЕ ЕЬе р(гоА Пепе со сПгесс сеегеиоп оЕ йе Согесси ргосеси, регеоии сье а<ы(с(опа! ргососо! оп 5слВсешлА!с сОСАсс2Ат!Ос4 ОГ РнОА нз5!Оь! РРОТПС(45 (р.

1535) со с!есеиише сЬе соЬсеПо!аг !осаПоп оЕ сЬе ргосеси Ьу ееП йаеиооасюп. Ргогосо) 4: Ехргелл(оп о( 5есгетед роге|Ко РгосеГпл )5.35 ~ АОТ)1Т1О(л(АЕ РКОТОСОЫ 50ВСЕлШлАК лОСАл1ТАТ1ОЬ( ОЕ РНОА Е051О)л( РВОТЕ!3535 Ассига1е птеааигеитепса о( сйе д(лсг(Ьнсюп о( РЬоА Гияоп ргосе(па аитопВ тййегепс сейи1аг соитраиитепсл гет(а тел сйе иле о( итагхег епгуптеа со еллау ригтутсас(оп о( еасЬ оНЬе а иЬсей и |аг (гас!(пил (реп р|аяп |с а расе, итептЬгапе, апс| сусор|аяи) (СиаитапАгегдиасо аис| 30лрегаасосЬ 7 990). ТЫ5 ргососо1, а(СЬоиВЬ по1 т)иапс|садче, яйоиЫ ргоч(де рге3пи|пагу гп(опиайоп оп сЬе сейи|аг |осайои о( РПоА Гиа(оп ргосе|пя Адд!С!оиа! Ма1епаЬ Сей Гул|а ЬиГГег 1 гпйгпт! (улохугпе 20% (чч)ч) юсюле 50 гпм Тпа-С| (РН 8.0) 7 птм | 0ТА (РН 8.0) 2х 505 Се|-)пад|пи ЬиЯег 7 00 гпМ Тпа-С| (рН 6.8) 200 гпМ д)СЫотйге(то( 4% 505 (нг)ч) (е(естгорйогел(л йгаде) 0.2% (нг)ч) Ьгогпорйепо| Ыие 20% (нМ й(усего! 51оге 2х 505 це)-(оад(пй Ьнйег (асй(пй д»Ыосйге|со| ат гоогп сегпрегаснге.

Адд д(1Ыотйге(то( Египт а 1 лт асосй )ня ЬеЕоге сйе Ьнйег В мед. ТпяСЕ (О. 7 м, РН 8.0) Месйо да т. Тгапя(ег 1 пт| о( сйе |псйлсед си)сиге сопит|и(пй сйе Ь!»Ьелс т(иаис|су о( сйе Гоге(еи ргосе|п со а и»егоре сиЬе. Кесочег сйе сейа Ьу сепсгтйиеас(оп а1 гпах|гпигп ареед Гог 7 го|инте ас 4"С тп а гп(его(иее. Сйесй тйе 4НРЕгпатапт гпег3югп Еог сйе ргелепсе о( тесгетед рго(Е3. То до ло, адд ап ет)на| чомгпе ос 'ке-соЫ 20% (лчАИ 1гтсйогоасейс ас»3 Со Сйе юрегпатап1.

|пснЬа1е Сйе ас|ЕИед хо(нс(оп оп тсе Еог ат 1еая 20 гптписея Сепспмйе сЬе хо(нт(оп ас гпах|пвпт лреед Еог 20 го|пи»ел |п а пт(его(нйе апд д(гюагд Ейе юрегпатапс. й'атй 1Ье рейет нг(тй 7 гп| оЕ етйапо! апд гесочег Сйе рейет Ьу сепСпюйаСгоп ат гпаххпнгп тренд Еог 5 пхиюел 3п а гпкгоюйе. Кереа1 1йе етйапо| ччатй апд гелнлрепд 1Ье рейет тп 40 тг) о( 1х 505 Ве(-(оийпй Ьнйег. Апа)ухе 20 Н! о( Сйе ляпр|е оп ап 505-ро)уасгу)агп(де йе( (51ер 7).

2. 5илрепд сйе се!1 рейес |и 700 р( о( а ГгеаЫу ргерагес1 ю|исюп о( сей (ул(5 Ьийег апсl лсоге сйе юареплюп оп ке Гог 10 гп|пи1ея Тйе нле о( |уютупте со йепегате лрйегор(аль Ьах ьчо росепйа| дгатчЬасхя Вглс, сопсзгп)пас(пй (уйс еплугпел |и толпе соптптегс(а) ргерагасюпх о( (улогутпе сап (ую тйе Ьассепа| сейя 5есогх|, В тйе ЕогеКп рготе(и о( (птегетт Ьж а пто|еси1аг ъче|й» ягпйаг то тйаС о| |утолугпе (-7 5,000), тйе ргехепсе оЕ (улоеутпе |п сйе Ьнйег сап оЬтснге мю- ' айаайоп о| сйе ехргемет! рготе(п оп лта(иед ро|уасгу|агпх|е йей. ОсЬег гпесйодь Еог сПе ргерагасюи о( лрйегор(алтт сап Ье тпед, |пс)нд(пй тйоле нл(пй геднсед сопсептгат(опт о( (ухохугпе (Магн|п апд Маййо|С 1987), ояпот(с ьйосй, Сгеа1гпеп1 тч1Ь сЫого(оггп (Агпел ет а|.

1984), апд нхе о( тйе рерс)де апиЬюйс ро|угпуяп В (Сегпу апт| Тенйег 1977). То ге(еате ро|урер1Ыел |пСо тйе репр(ахпт(с лрасе Ьу тйе |аиег птетйод, гелнлрепд сйе сет)л аС 5Сер 1 тп 100 и| о( 400 пйггп( ро|уптух|п В апд тпснЬате оп тсе Еог 2 йонга. Сепсп(нйе 1йе 1геа1ед се|В ал тп 51ер 1. Тйе юрегпатаит сиота(пл Пте репр|аяптс рготетпа апд тйе сей рейет сиота(пт йте сутор|аяптс апт| вегпЬгапе рготетпя нл4ъсй сап Ье йлийег й асйопасед ат делспЬед |и 51ерь 4 апд 5.

' 55 Кесочег сйе се|В Ьу сепспйлйас(оп ал |и 5(ер 7. ТЬе аирегпасапс ь сйе рог(р(ааит(с Ггассюп, тчЬ|сЬ лйои(д Ье Когед оп (се ипЫ 51ер 6. ' 4. Кеюарепд сйе сей рейес тп 100 р| о( 0.7 м Тил-С| (рН 8.0) апс| 3уяе сйе сейа Ьу йеегдпй апс| сйаъч(пе (|.е., р(асе сйе се|К оп с|ту |се со Ггееге апд (Ьеп сйатч (Ьегп ас 37'С) гереас сйь ргосеаа Ьмсе гиоге). 5. Сепспйлде сйе юарепяоп ат гпахипиит лреед Гог 5 гп)интел ас 4'С |и а пткгоЫде.