Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.3 (Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - 2001), страница 9

ТЬе Е ' тех 1ассог 'ь /гег)иепт)у!оас (сигед) Иопт сЬе Ьассег)иит тн(дт дготт Ь )и псЬ отед!иит, гек лйпд |и а дгадиа1 И(гас)оп о/ (Ье /ас гергеттог апт| [оть о1 геди[ат(оп. ° Онег апд аЬоне ТЬе /ас/ гес|йгегиепс, (Ье сЬо!се о/ннЫсЬ Е. соИ тсга!п со ите /ог сЬе ехргетт!оп о1 а 1оге|дп ргосе|п пюй Ье гиат|е егпр|псаду. Ч/е ьсгопд[ у гесопипепд (таит/огит!пд пти16р|е соикпоп |аЬогасогу тсга( от аъ тчеИ ат а 1етч итоге ехобс тсга!от со дед осе дте Ьеьс Е, соИ Ьотс 1ог а рагдси|аг (оге|дп ргосе и.

А1(ЬоидЬ ТЬе [тпоннп депо(уров о1 тюгие асса!пк гиа3те сЬепт )од!са[ Ьоьс сЬо!сея (е.д., ргосеаье-дедс!епс асса)пя; р)еате атее Ье|оъч), сЬеге ь итиаИу по с|еаг-сис геатоп ъчЬу опе асса!п 1ойега Ь~ВЫене| ехргехт!оп 1 Ь ' 1 и(егер апд апо(Ьег доев пос. еяь!оп о1 |Ье с|опед депе гиау Ье [отч дие со КЫА )птсаЬйсу, ргегиасиге септхпадоп, |пе16- сгапйа6оп, ог ргосе!п !пхсаЬйсу. Ргосе|и !пвсаЬйсу й д)тс!пди(тЬед 1гопт дте осЬег росепда| те-сЬате ехрег!птепск А сидите о1 сеИь сапу|пд сЬе ехргетйоп р)аттис й дготчи со гик|Иод пта1 гиед1а парр |егиепсед тн!(Ь т 9 с-апкпо ас|сЬ (ит)пиыпедч|оп)пе ог сутсй пе) ас 20 Рд/от[, ет1 1ог т 0 го|потев тч|дт т 5 ИС|/ги| о1 [тт5]итеСЬюп|пе ог [тт5)сутте!пе (ог Тгаптт5-СзЬсИ [1СЫ ЫсЬ спаса/пт Ьо(Ь гатИо|аЬе|ед ага|по ас!дт), 1оИоънед Ьу дте адд(сюп о1 ехсетт й пзм) (Соидииед оп иехс раде ) Ргогосо! ): Ехргелл|оп оГС)опег! Сепел т Е.

со1л 1Л|пй!РТС-|пг)ие|Ые Рготогегл !5.!9 и|аЬе|ес1 тейъюпве ог суя(е)ие. 5атр(ен (а(ъеп ечегу 10 т(пи(ен (гоги 'нитегйасе|у Ье(оге (пг)ис()оп со Ьоиг айег (пбис((оп аге апа!умед Ьу е)ес(горЬоген(н (ЬгоиИЬ ап 505-ро1уасгу)ат(6е де1. ТЬе Ие( 'ь Впег( с1 млЬ)ее|ее| |о аи(огасйойгарЬу со г|егегиние ъчЬе(Ьег (Ье ргоге|и В ълиъгаЫе. ТЬе В иег)сь аиг( Ыоепъ(н(гу о! рго(е)п (ипъочег |п Е. сой аге г)ийе ъчей ипс$егн(посо (Сю)Ьегд 1992; Маис)х( 1992), апг) а пипь- Ьег о! рго(еане-с(ейс(епс н(га)пн аге ача(1аЫе (Сопентап 1990).

ТЬе тон(соиниоп! у она н(га(ия аге |Иове а( ЬагЬог тигайопн (п |йе |оп Вепе, ънЫсЬ епсог|ен |йе |.оп (ог Еа) рго(еане, ап АТР-Верепс)еп( епс(оп(еноте. ТЬь ргогеаъе, ъногй(пй (п соп|ипсйоп мн(Ь ненега( Ьеа( ейосй рго(епн, Вейгас$еь ип(о(Вес) апс) аЬпоггиа1 ((оге(йп) рго1е)пн |и Е. соБ (Соиеетап апг) Маипай 1992). Кергенеп(агве а(оп я(га(пн (у1 089 апс! У1 090) аге ачайаЫе 6опь ТЬе Агпепсап Туре Сий лге СоИес|юп (371 96 апс( 371 97, геярес6че)у) ог Ггопл нечега( сопътегоа! еиррйега А рго(еане-спейс(еп( н(га(п (Ьа( Ьан ргоь еп инейй (ог Ьо(Ь яесгегег) апс( гю!иЫе рго(е3гь (н Е. сой КГ6333, ана|3аЫе |гонь ТЬе Агиепсап Туре Си)илге Со33ес6оп (АТСС Ф 55101).

ТЬе КГ6333 н(га)п ЬагЬогь с(еер апг| отрТ ти(а((опя, ънйсЬ (пасйча(е а репр1ант(с апс! ап ои(ег-пъепь- Ьгапе-|оса|ыег| рго(еаъе, генрес|ве|у. 1псгеааед у(е)6н о! (оге(йп рго(е(п 3п рго(еноте-с)ейс(еп( а(га(пн аге а гений о( Ьо| Ь с$есгеазес) )и(гасейи(аг (игпочег апс| с(есгеаъес) рго(ео)ун(н айег сей )ума Рго(еане )иЫЬ~(огн (1 гпм РЬепу)те(Ьу1ни(Топу( йиопг|е |РМЗГ|, 1-5 гим ЕОТА, 1 — 5 гим ЕСТА, 1-20 пъм Ьеихат(сйпе, 1 — 1 0 Нфп) |еирерйп, 5 РВ(т) рерн(айп А, 1 — 10 Раггп( аргойп|п, 1-20 тМ (ону1-(ун(пе-сЫоготе(Ьу( ИеСопе, е1с.) |и |йе цгоън(Ь лисс|вил апс( Ьагчея( Ьи((егн тау )псгеане у(е!с(а ТЬе ине о! гии|апс н(га(па г)е(ес()не |и (ептнпа(юп о! (гапясг(рйоп (гйо) ог а3(егес! |и КЫА те(аЬо1ьпъ (рпр, гпа) тау )псгеаае гЬе апюип( о( йлпс(юпа3 К(чА (гапяспЬед (тт а (огайо Вепе, ЕЗгата((с гййегепсен |и ехргегь(оп (ече1н аге ойеп геа|ыег3 |и 6(бегеп( пъесйа.

!.В пъегйипь сап Ье инег) (о еагаЫ(нЬ (Ье цепега) рагате(егл о! ехргена(оп ан ВеяспЬег( аЬоче; Ьоъчечег, ',Гог орйгиипь ехргегь)оп, ог, (п санен и Ьеге по ог негу 1оън ехргегьюп 'ь оЬ(а|пес( |и ЕВ тед)ит, о(Ьег гиегйа нЬои1г) Ье гг(ед. ТЬсье 3 )пс(ибе т(п(та) на(ь тег((ит аисЬ аъ М9, с1ейпе6 яа)ь гпес()ит нисЬ аа 'вдис|юп ведет (Рго(осо! 4), апг) о|йег исЬ те6(а нисЬ ан Тегпйс Вго(Ь, УТ, ог Г(2СУМ. и 1 аи сЬ Иъ |лг (е|п. ТЬене ялрр!етепЬНпс1иг)е Г(аС( а( сопсеп(га((опн Ье(м ееп 0.1 апс! 0.5 м Иенрегк е( а!. 1991), попгие(аЬойааЫе нийагн нисЬ аъ ылсгоне (0.2 — 0.6 м) (Вомгбеп апг) Сеогцюи 1990), со(ас(огн (Ьепле), апс! ап6Ьюйса Пъе ине о( ап6Ыо((сн еисЬ аъ сЫогагирЬеп|со! (1 нй(т( пъесйиги) апг| (е(гасусйпе (0.1 нфт!) а( а лЫе|йа1 сопсеп(гайопа ь Ььег) оп оЬнегча((оия Ьу |.ее апс| ВесйънИЬ (1986), м Ьо по(ее| |Вас тану ялрргегьогн о! аесге(огу ра(Ьм ау с е(ес(н (аес ти(апь) гиаррег| (п Вепен епсо6(пй ргосе|п нуп(Ьен(а сопьропепь.

Пъе пес е((ес( о! |йене н лрргегьог ти(а((огь и ан (о г)есгеаъе |йе очегай гасе о( рго(е|п нуп(Ьенпй |и аг(с((йоп, !ом сопсеп(гайопя о( апйЬюйся сои1с| т)т(с |йене е((есЬ 'в Е, соБ )АгЬеп ехргенн(пй а (оге(йп рго(е|п, енреаайу опе с$енйпе6 (ог |Ье гпеиъЬгапе сотраг|пъеп( о((Ье сей, (Ье 6есгеаъес$ га(е о! рго(е|п нуп(Ьен)н |и (Ье рггьепсе о(|йе ап((Ыо6с плау ргенеп1 очес(оа6(ой о((Ье несге((оп ра| Ьмау. Ву|йе нагие (ойеп, гю|иЫе ргосе(пн тау Ьане егеа(ег ассенн (о сЬарегопен апг| о|Ьег то!оси(ен |пчо1чес1 |и (огпъайоп о((йе пайче рго(е|п.

Г|пайу, Ейе рН о(|йе гпесйипь сап айес( ехргегьюи о! (оге(цп рго(е(пн ((хорога(с( е( а|. 1989). ТЬсье аи(Ьогн по(ес! а ниЬн(аийа! (псгеаъе |и ехргегьюп о((Ье но(иЫе рго(еп а-ц)исоа(с$ане мгЬеп |йе рН о(|йе !.В те6)ит ъчан с(есгеанес$ Ье1оъч рН 5.5. Ех(гегпен |и рН ргоЬаЫу ас( 1о н)оъч очегай сей Вгоъч(Ь ап6 |йегеЬу ргечеп( очес)оас)(пд о! Ьас|епа1 ехргегьюп)ргосс ь|пй нун(еиьа ° Ан теп((опед аЬоне, еирр1етепь (о ен(аЫ(аЬег) те6(а тау епЬапсе (Ье ехргегь(оп о(а И(чеп (оге(цп рго- Рго1осо! 2 Ехргеььюп о1 С!опед Сепеь ~п Е сой 0ыпц Йе Вас1епорЬаде Т7 Ргогпо1ег Е хввгвяон вчвтьмв глянс тнв ваствв~овнлсв т7 ввомотгв, Вгаг с)ече)прес) Ъу ТаЪог апс) лл!сЬагсЬоп (1985) апс( дги66ег апс1 МоЕЕасс (198б), еплр1оу ггапаспрбоп ядпа1а л(ег(чес( Егогп йе ЬасгепорЬаде Т7 депогпе. ТЬехе ауагета Ьаче гЬе Ео!1олч)пд ас1чапладех.

° ВасгепорЬаде Т7 лги ро!угпегаае, пп!йе Е. сой КХА ро1утегахе, ь пос лпЬлЬЬе6 Ъу НЕагпркш. ТЬе ап6Ъю6с сап йегеЕоге Ъе паес1 го ех6пдшьЬ ггапаспрбоп оЕ Ьоя се11 депея ° ТЬе ЬасгепорЬаде-епсобе6 епхугпе гесодп!ген оп1у ЬасгепорЬаде Т7 ргопюсегя лч1л!сЬ аге пог ргеаепг лп йе Е. сод сЬгошоаогпа! РХА. ° ВасгепорЬаде Т7 КХА ро1утегаье лх а ргосеьяче епгуте гЬаг лч!11 лгапаспЬе агоипг) а с!гсо1аг р!ааплЫ аечега! г!теа апс1 гпау гЬегеЕоге сгапьспЪе депех йаг аге пог еЕЕлс!епг1у ггапаспЬес1 Ьу Е. сод КХА ро)угпегаае. Тлчо согпропепга аге гес!пггес1 Еог гЬе ЪасгепорЬаде Т7 ехргеаяоп ауьгет (р1еаае аее р!доге 15-5).

ТЬе Вгя согпропепг !х ЬасгепорЬаде Т7 ВХА ро1утегаае, лч16сЬ 1ь гЬе ргосЬлсг оЕ ЪассепорЬаде Т7 депе 1. ТЬе ро1угпегаае сап Ье ргоч!6е6 Ьу а с1опес( сору оЕ йе депе сагпед оп ап !пЕес6пд ЬассепорЬаде ) чесгог, оп а р1аяпЫ, ог !того а сору оЕ йе депе !паеггес) !псо гЬе Е. со!! сЬготоаогпе (ТаЪог апс( К!сЬаглЬоп 1985; 5гис!(ег апс1 МоЕЕагг 1986). !Е йе Еоге!дп ргосе)п !х гохк го В. со(Е, гЬе ехргеаа!оп оЕ ЬасгегюрЬаде Т7 К! (А ро1угпегаае пшаг Ье спгга!1ел) с1пгшд се11 дголчгЬ, ТЬ!ь сап Ье ассогпр!!аЬес( пяпд гЬе ).

1уаодеп В!.21(РЕЗ), !п лч16сЬ ЕЬе ЪасгепорЬаде Т7 депе 1 )а ехргеааес! ппг)ег гЬе сопгго1 оЕ йе !РТА-(пс)пс(Ые (асЕЛл5 ргопюгег. А!гегпаг|че)у, депе 1 сап Ье р!асе6 шЫег сопгго1 оЕ а гетрегагпге-!пс(ис(Ые ргогпосег хпсЬ ах йе ЬасгепорЬаде ). р аесрлепсе. 1п гЬ!а ягпа6оп, (пбыс6оп оЕ йе ЬасгепорЬаде Т7 К1(А ро1угпегаае (а ассотр!(аЬес) Ъу Ьеаг аа г!еьспЪед !п Ргогосо1 3. лчЬеп апегпр6пд го ехргеаа сегга1п ехс!шяге!у сох!с Еоге(дп депе ргосЬлсля Ь В песеааагу Со пае се!1ь !п ъч16сЬ по ЬаслепорЬаде Т7 КЬ(А ро1угпегаье (а ргеаеш пп61 ехргеаяоп !а )псЬлсес1. ТЬ(а доа1 !а асЬлече6 Ьу )пЕес6пд ЕЬе Ьоьг се!1х (е.д., НМ5174) ЬагЬоппд йе ехргехх!оп р1аяпЫ лч!ЕЬ ЬасгепорЬаде СЕ6 (Хс1гл857 5агп7) саггу!пд ЪасгепорЬаде Т7 депе 1 (5!ил)!ег апс) МоЕЕагг 1986). ТЬе аесопс) согпропепг оЕ йе ауьгет !а а р!аяпЫ чесгог ес)шррес) чбй а ЬасгепорЬаде Т7 ргоплогег цраггеат оЕ йе депе го Ье ехргеаьел).

ТЬе чессог рЕТ-3 !а а депча6че оЕ рВК322 йаг сагпеа гЬе ЬасгепорЬаде Т7 депе 10 ргоплогег (РЕю), а ВатН1 с!опшд яге, апг! ЕЬе ЬасгепорЬаде Т7 Ггапаспрбоп Гегпппалог (ТЕ) (5лис)!ег ел а!. 1990). Репча6чеа оЕ рВТ-3 (е.д., рВТ-За) Ьаче Ьееп сопаггисгел) йаг !пс!ил)е а ЬасгепорЬаде Т7 депе 10 ггапх1а6оп ьгагг (дщ) гЬгопдЬ 15.20 Ргогосо! 2: Ехргеяяоп о)' С!опег! Егепея т Е, соВ 'суятд йе Васгег!орЬаде Т7 Рготогег 15.21 |Рго |о||ос||оп !РТО |о||пол|оп гг и ТУ ПГ|Я ро|уп|егаае ро|ут с соа ро|угп |ас герге |а герге |ас |ас е соа аепогпе Е)СЕ)КЕ 15-5 Сои!го) Е1е|пеп|я оТ |Ье ЕТ 5 я|еп| 11!м|га|ед Ьеге аге |Ье Ьоя| апг) чес|ог е)егпеп|я йа| аге ача!)аЫе 1ог соп|го) о! Т7 й1)А ро1угпегаяе !ече1я апд яиЬяе|!иеп| |гапяспрдоп о! а |агде| депе допей !п а рЕТ чес|ог.