kursovik (677434), страница 9

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 9)

Использование культуры макро­фагов позволит продолжить изучение природы атерогенности сыворотки крови больных ИБС и ее роли в патогенезе атеросклероза.

Рис. 1 Связь между накоплением холестерина в клетках и кон­центрацией сыворотки

По оси абсцисс — концентрация сыворотки (в %); по оси ординат — содер­жание холестерина (в мкг на 1 мг белка) в человеческих (а) и мышиных (б) макрофагах. /, 2 — культивирование в сыворотках здоровыхдоноров,3,4— больных ИБС.

Рис.1А Связь между накоплением холестерина в клетках и временем инкубации.

По оси абсцисс—время инкубации (в ч). Остальные обозначения те же, что и на рис 1

ВЛИЯНИЕ ГАМК, ГОМК И ГЛУТАМИНОВОИ КИСЛОТЫ НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ

АКТИВНОСТЬ ФАГОЦИТОВ

За последние годы проводится интенсивное изучение роли нейроактивных аминокислот в иммунологических процессах. Это связано с широким использованием данных аминокислот в неврологической и психиатрической практике, однако одновременно с их прямыми эффектами получены данные об их влиянии на иммунологические процессы. Получены данные о влиянии гамма-аминомасляной (ГАМК), гамма-оксимасляной (ГОМК) и глутаминовой кислот на количество антителообразующих, розеткообразующих клеток и другие показатели иммунитета. Опыты проводились в двух сериях: в I серии на интактных мы­шах изучалось влияние нейроактивных аминокислот на функциональ­ное состояние МФ и нейтрофилов. Во II серии влияние тех же веществ на состояние фагоцитов изучалось на фоне предвари­тельной иммунизации животных. Иммунизацию проводили 5% взвесью эритроцитов барана в количестве 1 мл на 3-й день после введения препарата. Контроль­ную группу составляли интактные мыши, получавшие физиологиче­ский раствор (контроль I), и животные, получавшие физиологический раствор и иммунизированные эритроциты барана (контроль II).

Введение интактным животным (I серия) нейроактивных аминокис­лот сопровождалось существенными сдвигами активности кислой фосфатазы в МФ и нейтрофильных лейкоцитах. Необходимо от­метить, что изменение активности в изученных группах носило разнонаправленный характер. Так, в условиях введения ГАМК актив­ность фермента в МФ и лейкоцитах крови повышалась по сравнению с контрольной группой в 1,7 раза, при введении же ГОМК происходило достоверное снижение активности кислой фосфатазы лишь в МФ. Показатели активности фермента при введении интактным мышам глутаминовой кислоты не отличались от таковых контрольной группы.

Изучение влияния биологически активных веществ на фоне пред­варительной иммунизации эритроцитами барана во всех опытных группах II серии выявило существенное понижение активности кис­лой фосфотазы в нейтрофильных лейкоцитах. Относительно низкие показатели активности в изучаемых клетках крови были зарегистри­рованы при введении ГОМК и глутаминовой кислоты, которые были ниже соответственно в 2 и 1,4 раза контрольного уровня. Активность изучаемого фермента в МФ опытных групп II серии не отличалась от таковой в контроле, за исключением группы, в кото­рой на фоне иммунизации вводили ГОМК, где содержание кислой фосфатазы понижалось почти в 2 раза.

В серии проведенных цитологических исследований было установ­лено, что нейроактивные аминокислоты в испытуемых дозах не вызы­вают в клетках фагоцитарного ряда дистрофических и деструктивных изменений. Так, ни в одной изучаемой группе I серии не было выявлено признаков распада, фраг­ментации и лизиса цитоплазмической и ядерной мембран, пикноза и рексиса ядер. В то же время в группах, где вводили ГАМК и ГОМК, ядра моноцитов выглядели гипертрофированными и гипохромными, цитоплазма—умеренно вакуолизированной. Не исключено, что ней­роактивные аминокислоты в биологически допустимых дозах не ока­зывают цитотоксического влияния на моноциты и нейтрофильные лей­коциты в крови интактных мышей. Однако существенные сдвиги в активности основного маркёра лизосом—кислой фосфатазы наводят на мысль, что изучаемые биологически активные вещества, не оказывая непосредственного токсического действия на клеточную мембрану, вызывают все-таки дестабилизацию внутриклеточных мемб­ранных структур, и, в первую очередь, лизосомальных. Принимая во внимание то обстоятельство, что активность лизосомальных ферментов во многом зависит от функционального состояния мембран, а точнее—от степени её проницаемости, была проведена специальная се­рия экспериментов по изучению проницаемости лизосомальных мемб­ран при помощи прижизненного флюорохромирования фагоцитов акридиновым оранжевым (АО). Результаты исследований с применением АО показали, что из­менение тинкториальных свойств клеток-мишеней наблюдалось при введении в организм мышей всех исследуемых нейроактивиых амино­кислот. При введении ГАМК, ГОМК и глутаминовой кислоты период полураспада (Т _1/2) заметно сокращается, а при экспозиции Т '/а, в течение которого происходит поэтапное изме­нение тинкторнальных свойств составных компонентов клеток (цито­плазма, ядро, участки локализации лизосом), количество фагоцитов с зеленой флюоресценцией ядер в опыт­ных группах I серии достоверно снижалось. Аналогичная направлен­ность четко прослеживалась во всех опытных группах II серии.

Резюмируя вышеизложенное, можно заключить, что нейроактивные аминокислоты оказывают существенное влия­ние на активность кислой фосфатазы в фагоцитах. Особо следует отметить, что полученный эффект в группах введения ГАМК и ГОМК был диаметрально противополож­ным: этот факт прослеживается наиболее четко в тех случаях, когда в качестве объекта изучения активности кислой фосфатазы выступали МФ. Введение же ГАМК и глутаминовой кислоты на фоне предварительной иммунизации не отражалось на активности кислой фосфатазы в МФ, в то время как в нейтрофиль­ных лейкоцитах все изучаемые нейроактивные аминокислоты вызывали достоверное понижение активности фермента.

Эксперименты с применением в качестве индикатора проницае­мости лизосомальных мембран АО показали, что нейроактнвные ами­нокислоты, не обладая цитодеструктивным действием па клетки-ми­шени, вызывают дестабили­зацию лизосомальных мембран, направленную в сторону увеличения их проницаемости. Сопоставление показателей проницаемости лизосомальных мембран животных I и II серий показывает, что для повышения проницаемости под влиянием нейроактивных ами­нокислот формирование гуморального иммунитета является условием необязательным.

Таким образом, нейроактивные аминокислоты оказывают избирательное влияние на морфофункциональное состоя­ние лизосомального аппарата фагоцитов. Это подтверждается полученными данными о проницаемости лизосомальных мембран в отношении токсического красителя и количественного определения активности основного мар­кера лизосом – кислой фосфотазы.

IV. Заключение

Приведенная лишь малая часть экспериментов по моделированию различных воздействий, говорит в пользу того, что процессы нарушений или изменения фагоцитирующей активности очень удобно изучать путем постановки опытов на перитонеальных МФ. Можно сказать, что данная модель давно стала базовой для проверки разнообразных химических и фармакологических препаратов в качестве агентов, воздействующих на клеточное звено иммунитета; для изучения процессов взаимодействия инфекционных агентов с фагоцитами. Также она используется для изучения не только фагоцитарной функции – но и наоборот, различных процессов, связанных с самими инфекционными агентами. Можно упомянуть, что проводятся исследования по изучению фагоцитов перитонеального экссудата у генетически диабетических мышей, у генетически иммунодепрессивных крыс и т.д.

Конечно те данные, которые получают исследователи достаточно относительны, ведь несмотря на высокое качество проводимых опытов, они все же проводятся in vitro, что неизменно накладывает свой отпечаток – клетки здесь лишены той гаммы цитокиновых воздействий, которая присутствует в живом организме, они не взаимодействуют со стромальными компонентами и другими клетками. Достоинством метода является его простота, доступность и, что немаловажно, наглядность, а также высокая скорость получения результатов и широкие возможности по постановке «регистрационных» реакций. Однако, как видно, этим в современной патологии мы не можем ограничиться. Поэтому в современных научных и клинических исследованиях применяют и другие методы и модели. О некоторых из них кратко будет рассказано ниже.

НЕКОТОРЫЕ ДРУГИЕ МОДЕЛИ ИЗУЧЕНИЯ ФАГОЦИТОЗА.

• Одна из самых реалистичных моделей фагоцитоза – это модель in vivo. Данная модель позволяет получать достоверную информацию и моделировать процессы с учетом влияния внутренней среды. Однако она более сложна в реализации и порой не дает возможности работать с организмом человека. Модель in vivo существует в двух вариантах

  1. Модель на фагоцитах сыворотки крови. Конечно, в этом случае объектом нашего внимания будут не МФ, а моноциты крови и нейтрофильные лейкоциты. Модель позволяет изучать влияние на состояние фагоцитов и фагоцитарной функции общих, системных процессов, таких как гипоксия, гипобария, радиация и проч. Также путем внутрисосудистого введения различных веществ можно получить данных об их воздействии. Изучается влияние и внутренних системных активных веществ: гистамина, простогландинов

  2. Модель фагоцитоза в очаге хронического воспаления. Одна из самых «клинических» моделей. Здесь объектом внимания являются как тканевые МФ, так и эпителиоидные клетки, гигантские многоядерные клетки, клетки инородных тел и др. Большое внимание уделяется явлению незавершенного фагоцитоза, процессам подавления миграции, снижения кислород-зависимой цитотоксичности.

• Очень оригинальная модель была разработана в лаборатории иммунологии Института акушерства и гинекологии им. Отта РАМН (авторы: О.А.Павлов,С.А.Сельков,А.В.Селютин, Е.Е.Андреева и др.). Они изучали роль плацентарных МФ в проблемах родовой деятельности и, особенно – в проблеме невынашивания беременности. Макрофагам фетоплацсптарного комплекса (МФК), по мнению исследователей, до недавнего времени уделялось нео­правданно мало внимания. Лишь в последние годы появился ряд публикаций, посвященных этим клеткам. Многие функции МФК только предстоит выяснить, однако уже сейчас ста­новится очевидным, что среди популяций раз­личных клеток, составляющих ткань плаценты, МФК являются наиболее вероятными канди­датами на роль регуляторного (а, возможно, и ключевого) звена в ряде репродуктивных про­цессов. С точки зрения патогенеза развития ро­довой деятельности при преждевременных и срочных родах МФК представляют особый ин­терес в силу особенностей ряда свойств и по­ложения этих клеток.

Плацентарные макрофаги (клетки Кащен­ко—Гофбауэра) принадлежат к системе мононуклеарпых фагоцитов, имеющих единое происхож­дение с обычными МФ. Эти клетки в значительном количестве содержатся в ткани плаценты и составляют по­давляющее большинство ее иммунокомпетентных клеток. По данным некоторых авто­ров, макрофаги составляют до 40% популяции нетрофобластных клеток ворсин хориона.

Традиционно считалось, что прерога­тивой мононуклеарных фагоцитов в фетоплацентарном комплексе является удаление клеточного детрита, защита от микроорганизмов, участие в системе защиты плода от местного материнского иммунного ответа. Они также участвуют в реализации и модуляции иммунного ответа и представляют первую линию защиты против ин­фекции, обеспечивая неспецифические иммун­ные реакции и продуцируя регуляторные сиг­налы для специфических. Таким образом, уни­кальность положения МФК состоит в том, что, с одной стороны, они, как эффекторные клет­ки, вступают в непосредственный контакт с ин­фекционными агентами и иными продуктами, проникающими в организм хозяина (в данном случае в единую систему "мать—плацента—плод"), а, с другой стороны, будучи активированными в результате этого контакта, способны проду­цировать множество растворимых сигнальных молекул, влияющих на функции близлежащих клеток.

В число этих факторов входят и цитокины, содержание которых меняется с началом спон­танной родовой деятельности — ФНОа, ИЛ-1, ИЛ-6 и ИЛ-8. Предполагается, что эти цитоки­ны, продуцируемые макрофагами, стимулируют синтез ПГ и тем самым инициируют сократи­тельную активность матки. Более того, показано, что макрофаги могут самостоя­тельно продуцировать ПГЕ2 ПГ2а, ко­торые непосредственно воздействуют на миометрий. Макрофаги также способны к секре­ции трансформирующего ростового фактора-β (ТРФ-β), который играет важную роль в эмбрио­нальном морфогенезе и влияет на функции клеток трофобласта и эндометрия. Недавно в экспериментах in vitro получены убедительные доказательства участия клеток пла­центы в процессе родов. Авторы продемонстри­ровали связанное с родовой деятельностью уве­личение секреции ФНО-α макрофагами, взятых у женщин в результате спонтанных родов или индуцированных родов путем искусственно родоразрешения, а так­же ИЛ-1 и ИЛ-6 эндотелиальными клетками плаценты. Все эти данные свидетельствуют о вкладе клеток плаценты, в том числе макрофагов, в повышение уровня цитокинов в пределах фетоплацентарного комплекса при спонтанной ро­довой деятельности. Предположения о возможной роли ПМ в преждевременном и срочном родоразрешении заставляют взглянуть на эту клеточную популяцию как на важнейший элемент, оказы­вающий влияние на гестационные процессы. В этой связи активация ПМ может рассматривать­ся как событие, ведущее к преждевременным или срочным родам. Установлена положительная корреляция меж­ду повышением уровня некоторых цитокинов (туморнекротизирующий фактор-α, интерлейкин-1 и -6), которые секретируются в том чис­ле активированными макрофагами, и наступле­нием преждевременных и срочных родов. Попытались выявить связь между на­личием родовой деятельности на разных сроках беременности и степенью активации ПМ in vitro, о которой судили по уровню экспрессии анти­генов МНС II и фагоцитарной активности кле­ток, опосредованной Fс- и СЗ-рецепторами. при наличии родовой деятельности. Увеличивалось количество клеток, экспрессирующих МНС II и СКЗ и обладающих способностью к фагоцито­зу. На более поздних сроках беременности не удалось выявить достоверного увеличения активности ПМ при родовой деятельности. Согласно дан­ным снижение уровня фагоцитоза происходило за счет снижения активности от­дельной клетки, в то время как количество фагоцитов существенно не изменялось. Для того, чтобы выяснить, отражает ли наблюдаемая тенденция существующую закономерность, или яв­ляется следствием неоднородности исследуемо­го материала, необходимо исследовать дополни­тельное количество плацент.

Полученные результаты свидетельствуют о перспективности применения обогащенных куль­тур ПМ для изучения ряда аспектов иммунологиии репродукции, в частности для выяснения клеточных механизмов, лежащих в основе нормальных и преждевременных родов.

Литература.

1. Д.И. Маянский, Клетка Купфера и система мононуклеарных фагоцитов, Москва, 1983

2. Методы изучения in vitro клеточного иммунитета, под ред. Блума и Глэйда, Москва,1974

3. И.И.Мечников, Лекции по сравнительной патологии воспаления, Москва, 1947

4. Терапевтический архив, 1990, Т62, N11

5. Вопросы медицинской химии, 1988, Т34, Вып.1

6. Лабораторное дело,1984, N5

7. Лабораторное дело,1985, N1

8. Лабораторное дело,1992, N2

9. Лабораторное дело,1989, N4

10. Иммунология, 1983, N1

11. Иммунология, 1983, N2

12. Иммунология, 1987, N6

13. Иммунология, 1989, N4

14. Иммунология, 1999, N1

15. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1988, N1

16. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1989,N11

17. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1990,N1

18. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины,2000, Т129, N6

19. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины,1999, Т127, N4

20. Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунобиологии 1990,N5

21. Архив патологии, 1994, Т56, N1

22. Медицинская иммунология, 2001, Т3, N3

23. Экспериментальная и клиническая медицина, 1989, Т29, N3

24. Экспериментальная и клиническая медицина, 1989, Т29, N6

25. Цитология, 1992, Т34,N7

Характеристики

Список файлов реферата