Диссертация (1174241), страница 16
Текст из файла (страница 16)
В результате исследования было установлено, что вещество в указанных дозах не обладает эмбриотоксическим действием.При наблюдении за потомством F1 генерации было выявлено, что вещество АХ-554, вводимое внутрижелудочно беременным самкам во всех исследуемых дозах с 5 дня беременности до родоразрешения, не влияет отрицательно на физическое развитие, сроки созревания сенсорно-двигательныхрефлексов и эмоционально-двигательное поведение крысят.Таким образом, по совокупности проведенных исследований нами показано, что АХ-554 не обладает репродуктивной токсичностью.116ГЛАВА 7.ЗАКЛЮЧЕНИЕВ заключении обобщены результаты исследования токсикологическогопрофиля, специфической противоопухолевой фармакологической активностивеществаАХ-554, а также влияния фармацевтической субстанции на частотуи характер метастазирования, продолжительность жизни животных – носителей опухолевых систем; мутагенности, аллергизирующего и иммунотоксического действия, собственной канцерогенности и репродуктивной токсичности АХ-554.На первом этапе определилитоксикологический профиль производного4-алкил-замещенного производного аминохромена АХ-554 при внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении нелинейным мышам и крысам обоегопола.
Согласно результатам эксперимента и данным пробит-анализаЛД50соединения аминохромена АХ-554 в виде фармацевтической субстанциидля самцов и самок крыс при внутрижелудочном введении составляет более5000 мг/кг; при внутрибрюшинном введении для самцов показатель составляет 1222,6±28,4 мг/кг; для самок – 850,8±29,4 мг/кг. При внутрибрюшинномвведении вещества АХ-554 в виде фармацевтической субстанции самкам исамцам крыс в дозах 500 мг/кг, 1000 мг/кг и 2000 мг/кг отмечали отставаниеприроста массы тела на протяжении всего периода наблюдения у всех подопытных животных.При выполнении исследования мы установили, что внутрижелудочноевведение фармацевтической субстанции АХ-554 самцам во всех исследованных дозах вызывает изменение зубца Т на электрокардиограмме, снижая егоамплитуду относительно параллельного контроля (в среднем в ТД – на 33%,в 5-ТД – на 34% и в 10-ТД – на 25%).У самок крыс внутрижелудочное однократное введение субстанции АХ-554 в указанном диапазоне доз не оказывает влияния на параметры ЭКГ.
Анализ поведения крыс в «Открытом поле»показал, что однократное внутрижелудочное введение ФС АХ-554 во всех117исследованных дозах как в группах самцов так и самок не оказывает негативного влияния на поведение экспериментальных животных: не наблюдалиувеличения уровня тревожности (груминг, дефекации), угнетения двигательной (пересечение сектора, общее число локомоций) и познавательной активности (норковый рефлекс, стойки).Полученные по результатам проведения общетоксикологических исследований данные согласуются с ранее полученными результатами в областитоксикологии2-амино-3-цианохроменови4-замещенных2-аминохроменов [133-140].На следующем этапе нашего исследования была изучена противоопухолевая активность соединения АХ-554.Были рассчитаны эффективные противоопухолевые дозы и концентрации вещества в виде фармацевтической субстанции. Для определения диапазона эффективных противоопухолевых доз ФС были использованы дозы, составляющие 0,25%, 0,5%, 1%, 2,5%, 5%, 7,5% и 10% от показателя ЛД50, определенного при внутрижелудочном введении мышам, а также сингеннаяопухолевая модель – карцинома легкого Lewis.
При вычислении эффективных доз суьстанции АХ-554ЭД20 составила 21,2 мг/кг, ЭД50 составила 137,6мг/кг, в то время как ЭД90 равнялась 384,0 мг/кг.При расчете терапевтических индексов (ТИ20, ТИ50или ТИ90 как соотношение соответствующей летальной и эффективной доз) нами были получены следующие показатели: 94,3; 36,3 и 23,4 соответственно. Следовательно, для дальнейшего доклинического исследования специфической противоопухолевой активности и механизмов антибластомного действия веществаАХ-554можно рекомендовать следующие дозы: МДД – 21,2 мг/кг, СТД –137,6 мг/кг и ВТД – 384,0 мг/кг. Поскольку доза 384 мг/кг соответствует7,68% от показателя ЛД50, определенного для данного пути введения у мышей, она соответствует условиям, согласно которым ВТД не должна превышать 10% от показателя ЛД50.Исследование эффективных концентраций ФСАХ-554 определено в культуре клеток немелкоклеточного рака легкого при118их инкубировании в среде с добавлением АХ-554в виде фармацевтическойсубстанции в семи концентрациях: 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8, 10-9 М.
По результатам культуральных исследований на основе анализа концентрацииЛДГ в среде культивирования были вычислены показатели ЭК20, ЭК50и ЭК90–расчетные концентрации, вызывающие гибель 20%, 50% и 90% клеточнойпопуляции в культуре соответственно, и составившие соответственно 10-9,2х10-7 и 10-4 М.Таким образом, диапазон эффективных цитотоксических концентраций в отношении опухолевых клеток немелкоклеточного рака легкогонаходится в пределах от 10-9 до 10-4 М, при этом средняя эффективная концентрация составляет 2х10-7 М, что сопоставимо с концентрациями фармацевтической сбутсанции в плазме крови и легочной ткани при её внутрижелудочном введении нелинейным мышам в ЭД20, ЭД50 и ЭД90 и внутривенномвведении в ЕД50 в рамках проведения фармакокинетических исследованийфармацевтической субстанции [130].На третьем этапе исследования оценивали противоопухолевую активность в отношении сингенной гетеротопической опухолевой системы – карциномы легкого Lewis – по ингибированию роста опухоли при внутрижелудочном введении АХ-554 и референтных противобластомных ЛС в трех дозах – минимально-действующей, средне-терапевтической и высшей терапевтической.
В контрольной группе животных подкожная сингенная опухольдостигала на 1 сутки после отмены внутрижелудочного введения физиологического 0,9% раствора хлорида натрия в среднем 932 мм3, на 7 сутки – 4142мм3, а на 21 сутки наблюдения – 8887 мм3.Вес солидной опухоли, полученной у выведенных из эксперимента животных на 22 сутки после прекращения введения плацебо, равнялся 9,30,6 г.При изучении препарата сравнения доксорубицина лишь в высшей терапевтической дозе, составившей 166,4 мг/кг/сутки, у препарата сохранялся эффект по подавлению роста сингенного рака легкого мыши более, чем на 50%на 7 сутки наблюдения и, таким образом, препарат сравнения оказывал умеренное антибластомное действие на исследуемой опухолевой системе.
Одна119ко, следует подчеркнуть, что противоопухолевое действие препарата усиливалось к 14 суткам после его отмены, поскольку наблюдали повышение индекса ТРО по сравнению с предыдущими значениями, рассчитанными дляпрепарата. В том числе, индекс превышал значение 50% как в серии животных, получавших ВТД препарата, так и СТД доксорубицина.Второй препарат сравнения цисплатин оказывал высокий противоопухолевый эффект в СТД и ВТД и умеренное противобластомное действие вМДД: его действие продолжалось во времени, о чем свидетельствовало продолжающееся сокращение роста опухоли и уменьшение ее размеров присравнении с размерами, вычисленными на предыдущих точках измерения,что нашло свое отражение и в значении индекса ТРО. Препарат обладал также мощным антиметастатическим действием: в высшей терапевтической дозе частота метастазирования в серии составила лишь 30%.Исследуемая субстанция АХ-554 при внутрижелудочном введении втрех исследуемых дозах также продемонстрировала наличие высокого противоопухолевого эффекта на сингенной опухолевой модели.
При введении втечение 7 суток в минимально-действующей дозе 21,2 мг/кг индекс ТРО на 7сутки после прекращения лечения – наиболее чувствительный индикаторэффективности – составлял 37%. Однако при увеличении дозы до среднейтерапевтической – 137,6 мг/кг/сутки значение индекса к 7 суткам составляло68, а высшей терапевтической дозе – 74. Также для вещества АХ-554 присуща закономерность, описанная для цисплатина [113, 121], а именно сохраняющийся после отмены цитостатический эффект, проявляющийся в углублении противоопухолевой активности, и прогрессирующего уменьшениямассы и объема опухоли.Производное 2-аминохромена в средней и высшей терапевтических дозах оказывало заметное антиметастатическое действие в виде снижения частоты метастазирования и среднего числа поверхностных метастазов.При исследовании выживаемости животных все исследуемые референтные противоопухолевые ЛС увеличивали продолжительность жизни эксперименталь120ных иммунодефицитных мышей с сингенной опухолевой системной – гетеротопической карциномой легкого Lewis.
При этом наибольшая средняя продолжительность жизни отмечена в группе животных, получавших ВТД доксорубицина – 63 дней и ВТД цисплатина – 61 день. Вещество АХ-554 такжеувеличивало продолжительность жизни животных, причем в группе мышей,получавших СТД производного средняя продолжительность жизни составила53 дня, а у животных, получавших в течение 7 суток внутрижелудочно ВТДсубстанции – 58 суток, что в последнем случае превышает продолжительность жизни мышей контрольной группы более, чем на 50%.При изучениичастоты ремиссий и выздоровлений при использовании 4-алкил-замещенногопроизводного 2-аминохромена, во всех изученных дозах, ремиссии опухоли ивыздоровлений животных не наблюдали.Таким образом, в соответствие с действующими рекомендациями, критериями эффективности оригинального противоопухолевого лекарственногосредства являются наличие одного или более признаков из следующего перечня [112]:— торможение роста хотя бы одной солидной опухоли из обязательного к изучению спектра на 90% и более, сохраняющееся не менее 7 суток после отмены вещества;— торможение роста не менее трех солидных опухолей или подкожноперевитых лейкозов, упомянутых в обязательном перечне, на 70% и более ссохранением значимого эффекта не менее 7 суток;— увеличение продолжительности жизни животных с лейкозом на75% и более;— продолжительности жизни животных с солидной опухолью на 50%и более;— полная ремиссия у 50% животных (отсутствие признаков опухоли/лейкоза в течение 60 дней);— излечение 50% животных (отсутствие признаков опухоли/ лейкоза втечение 90 дней);121— высокая избирательная цитотоксичность in vitro;— новый, ранее неизвестный механизм действия (при наличии существенной противоопухолевой активности).В результате исследования для фармацевтической субстанции АХ-554установлено наличие двух обязательных критериев: 1) торможение роста солидных опухолей или подкожно перевитых лейкозов, упомянутых в обязательном перечне, на 70% и более с сохранением значимого эффекта не менее7 суток; и 2) увеличение продолжительности жизни животных с солиднойопухолью на 50% и более (установлено для всех исследованных солидныхопухолей в при внутрижелудочном введении в ВТД).Для продолжения доклинических исследований оптимальным путемвведения является внутрижелудочный, схемой введения – 7 суток.Изучение безопасности перспективного отчественного производного 2аминохромена включало комплексное исследование его аллергизирующейактивности, иммунотоксичности, канцерогенности, мутагенности и репродуктивной токсичности.При изучении аллергизирующего действия АХ-554 на модели системной и кожной анафилаксии лекарственное вещество из группы 4-алкилзамещенных производных аминохромена АХ554 не оказало анафилактогенного действия.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
