Диссертация (1174241), страница 17
Текст из файла (страница 17)
На модели реакции гиперчувствительности немедленного изамедленного типа при эпикутанном и конъюнктивальном нанесении вещества АХ-554 морским свинкам оно не оказало сенсибилизирующего действия. Также оно не оказало сенсибилизирующего действия на модели ГЗТ умышей. Определение количества эозинофилов, процента лизированных лейкоцитов и степени фагоцитарной активности нейтрофилов крови у морскихсвинок, сенсибилизированных 10-дневным внутрижелудочным введениемлекарственного средства АХ-554 (225 мг/кг и 550 мг/кг, соответствующих 5и 10-кратной СТД), показало отсутствие влияния соединения на данные показатели. Суммируя полученные данные, можно заключить, что кандидат в122лекарственное средство АХ-554 в терапевтических дозах не обладает аллергенной активностью.Однократное внутрижелудочное введение АХ-554 мышам в дозах в 5 и10 раз превышающих СТД для данного вида животных не влияло на формирование гемагглютининов и гемолизинов у мышей.
Курсовое внутрижелудочное введение (в течение 21 дня) вещества мышам в тех же также не влияло на синтез антител, не оказывало действия на реакцию гиперчувствительности замедленного типа и не изменяло фагоцитарной активности нейтрофилов, выделенных из крови. Полученные результаты позволяют заключить,что АХ-554 не оказывает иммунотоксического действия.Суммируя наши исследования мутагенного действия вещества, можносказать, что однократное и 5-ти кратное внутрижелудочное введение АХ-554инбредным мышам в средне-терапевтической дозе 137,6 мг/кг, а также однократное внутрижелудочное введение в 10-кратной СТД, составившей137,6мг/кг (максимальная доза в соответствии с Методическими рекомендациями)не индуцировало хромосомные аберрации в клетках костного мозга животных.
Проведенное исследование позволило установить, что исследуемое соединение аминохромена не индуцирует генные мутации на штаммахSalmonella typhimurium ТА 97, ТА 98 и ТА 100 в диапазоне концентраций 0,5– 5000 мкг/чашка. Полученные данные позволяют заключить, что АХ-554 неоказывает мутагенного действия.Проведенное исследование показало отсутствие достоверных различиймежду уровнями ДНК-повреждений клеток всех исследованных органов (костный мозг, печень, почки, селезенка) через 3 часа после внутрижелудочноговведения субстанции АХ-554 в дозах 137,6 мг/кг, 688 мг/кг и 1376 мг/кг, составляющихсредне-терапевтическую,5-и10-кратнуюсредне-терапевтическую дозы по сравнению с контрольной группой животных, получавших растворитель.
Тогда как препарат сравнения циклофосфамид, использованный в качестве позитивного контроля, при внутрибрюшинном введении мышам в дозе 50 мг/кг веса животных, эффективно индуцировал раз123рывы ДНК в паренхиматозных клетках всех исследуемых органов линейныхмышей при экспозиции в течение 3 часов.Показатель индекса фертильности в группах экспериментальных животных, получавших АХ-554, не отличался от показателя в контрольнойгруппе. Все плоды выглядели доношенными, внешних аномалий развития ненаблюдалось. Часть самок из каждой группы была оставлена до родов с целью наблюдения за потомством.Наблюдение за развитием потомства в течение 28 дней не выявило существенных различий в общем виде, физическом развитии и поведении. Гибели контрольных и подопытных крысят не происходило.
При изучении физического развития потомства не обнаружили статистически значимого отставания в динамике массы тела у крысят, матери которых получали до беременности ФС АХ-554. Такие временные показатели, как сроки отлипанияушных раковин, появления первичного волосяного покрова, прорезываниярезцов, открытия глаз статистически значимо не отличались от контрольныхпоказателей. Изучение эмбрио- и фетотоксического действия, регистрируемого в антенатальном периоде развития показало, что прибавка массы телабеременных крыс в группах, получавших АХ-554 в виде фармацевтическойкомпозиции, статистически не отличалась от таковой у животных в контрольной группе. Таким образом, проведенное исследование позволило констатировать, что вещество АХ-554, вводимое внутрижелудочно беременнымсамкам крыс в дозах 68,8 мг/кг и 688 мг/кг с 5 по 19 дни беременности, необладает эмбриотоксическим действием, не вызывает постимплантационнойгибели, задержки развития плодов, развития анатомических аномалий и патологий костной системы.Эксперименты по изучению влияния АХ-554 на постнатальное развитие потомства F1 генерации проводили на крысятах, родившихся от самоккрыс, получавших АХ-554 c 5 дня беременности до родоразрешения внутрижелудочно в однократной (68,8 мг/кг) и десятикратной (688 мг/кг) среднетерапевтических дозах.
В ходе исследования установили, что в группах, по124лучавших АХ-554 в дозах 68,8 мг/кг и 688 мг/кг, показатели прибавки массытела беременных крыс не отличались от контрольной группы. Роды наступали на 20-22 день беременности у всех экспериментальных животных, находящихся под наблюдением. После проведения наблюдения за физическимразвитием потомства крыс в течение 21 дня можно заключить, что по всемизучаемым параметрам достоверных различий между экспериментальными иконтрольной группами не наблюдалось, Смертности потомства в постнатальном периоде не было.
Полученные результаты позволяют сделать вывод оботсутствии явлений репродуктивной токсичности на фоне введения АХ-554,что согласуется с результатами, полученными ранее для других представителей рассматриваемой группы соединений [139].7.1 Перспективы дальнейшего развития темы исследованияПолученные результаты изучения токсичности, безопасности и антибластномной активности нового оригинального отечественного соединения –2-Аминия-7-(диэтиламино)-4-(4-метоксибензо[d][1,3]диоксол-5-ил)-4Нхромен-3-карбонитрила N-ацетиламиноэтаноат (лабораторный шифр АХ554), разработанного синтезированного в отделе химии, технологии синтетических лекарственных средств и аналитического контроля АО «ВНЦ БАВ»(Россия), позволяют рассматривать вещество как потенциальное противоопухолевое лекарственно средство для химиотерапии немелкоклеточного ракалегкого.
В рамках продолжения исследований считаем перспективным изучение молекулярных механизмов противоопухолевого действия вещества,спектра его химиотерапевтической активности в отношении широкой панелиопухолевых систем, в том числе на моделях гетеро- и синтопических ксенографтов опухолей человека; разработку оптимальной лекарственной формыАХ-554 и изучение фармакокинетики АХ-554 в виде фармацевтической субстанции и готовой лекарственной формы.125ВЫВОДЫ1.
При изучении острой токсичности 4-алкил-замещенного производного 2-аминохромена АХ 554 для мышей и крыс обоего пола было показано,что степень интоксикации, вызванной введением вещества, носит дозозависимый характер. При внутрижелудочном введении АХ 554 ЛД50 для самцов исамок мышей и крыс составила более 5000 мг/кг. При внутрибрюшинномвведении АХ 554 ЛД50для самцов мышей составляет 1567,5±34,6 мг/кг; длясамок – 1694,0±28,6 мг/кг; для самцов крыс – 1222,6±28,4 мг/кг, для самок –850,8±29,4 мг/кг.2. По параметрам острой токсичности субстанция АХ 554 относится к4 классу опасности (малоопасные вещества) в соответствии с ГОСТ 12.1.00776.В соответствии с модифицированной классификацией Организации экономического содействия и развития (OECD) фармацевтическая субстанцияАХ 554 относится к VI классу токсичности (относительно безвредные вещества) при введении внутрижелудочно мышам и крысам и при введении внутрибрюшинно мышам.
При введении внутрибрюшинно крысам вещество относится к V классу токсичности (практически нетоксично).3. При вычислении эффективных противоопухолевых доз АХ-554 намодели солидной гетеротопической опухоли у мышейЭД20 составила 21,2мг/кг, ЭД50 составила 137,6 мг/кг, в то время как ЭД90 равнялась 384,0 мг/кг.Исследование эффективных концентраций АХ-554 в культуре клеток немелкоклеточного рака легкого позволило определить показатели ЭК20, ЭК50иЭК90– расчетные концентрации, вызывающие гибель 20%, 50% и 90% клеточной популяции в культуре соответственно, и составившие соответственно10-9, 2х10-7 и 10-4 М.
Таким образом, диапазон эффективных цитотоксическихконцентраций в отношении опухолевых клеток карциномы легкого находится в пределах от 10-9 до 10-4 М, при этом средняя эффективная концентрациясоставляет 2х10-7 М.1264. При изучении противоопухолевой и антиметастатической активности АХ-554 на модели солидной опухоли установлены преимущества вещества перед известными химиотерапевтическими средствами, входящими всовременные протоколы лечения заболевания: на сингенной модели карциномы легкого Lewis в СТД и ВТД АХ-554 превосходит цисплатин, вводимыйв сопоставимых дозах, по показателю торможения роста опухоли на 8-14%;по антиметастатической активности – не уступает цисплатину; с учетомошибок репрезентативности не уступает наиболее эффективному из известных препаратов на данной модели – доксорубицину; увеличивает продолжительность жизни животных более, чем на 50% при сравнении с контролем.5.
Курсовое и однократное введение АХ-554 в терапевтической и субтоксической дозах не вызывает явлений сенсибилизации и иммунотоксичности у животных-акцепторов; в опытах in vitro на тестовых системах Salmonella typhimuriumне повышает частоту хромосомных аберраций и не повышаетпроцент свободной ДНК в ДКН-кометах клеткок костного мозга, печени, селезенки и почек, следовательно, не обладает мутагенным и канцерогеннымдействием.
Внутрижелудочное курсовое введение вещества самкам (в томчисле беременным) и самцам крыс не сопровождается нарушением их репродуктивной функции и негативным влиянием на потомство первого поколения.127ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ1. Для дальнейшего доклинического исследования специфическойпротивоопухолевой активности и механизмов антибластомного действия 4алкил-замещенного производного 2-аминохромена АХ-554 рекомендованы киспользованию следующие дозы: МДД – 21,2 мг/кг, СТД – 137,6 мг/кг и ВТД– 384,0 мг/кг.
Поскольку доза 384 мг/кг соответствует 7,68% от показателяЛД50, определенного для данного пути введения у мышей, она соответствуетусловиям, согласно которым ВТД не должна превышать 10% от показателяЛД50.2. Для проведения фармакокинетических исследований и биодоступности АХ-554 рекомендована следующая схема постановки эксперимента:для определения системной кинетики и абсолютной биодоступности – однократное внутривенное введение в трех терапевтических дозах; для определения биодоступности, тканевого распределения, изучения кумулятивного действия и линейности кинетики при внутрижелудочном введении – в трех терапевтических дозах, а также при трехкратном введении СТД с интервалом 24часа.3. Учитывая высокую эффективность АХ-554 при курсовом внутрижелудочном введении и оптимальный профиль безопасности при данном пути введения, при решении вопроса о создании лекарственной формы потенциального лекарственного средства с учетом данных фармакокинетики субстанции рекомендована таблетированная или капсульная форма для приемавнутрь.128БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙСПИСОК1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
