Диссертация (1174241), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Результаты исследования представлены втаблице6.26.Количество колоний ревертантов в контроле с растворителем в вариантах МА- и МА+ было в пределах колебаний спонтанного уровня для данных штаммов. Ответ штаммов на стандартные мутагены также был в пределах обычных уровней.Позитивным контролем для штамма ТА 97 служил 9-аминоакридин(50 мкг на чашку). 9-аминоакридин увеличивал количество ревертантов в6,48 раз по сравнению с негативным контролем (таблица 6.26).Результаты исследования противоопухолевого соединенияАХ-554 сиспользованием штамма ТА 98 представлены в таблице 6.26.
Позитивнымконтролем для штамма ТА 98 служил 2-нитрофлуорен (5 мкг на чашку). 2Нитрофлуорен увеличивал количество ревертантов в 33,13 раза по сравнению с негативным контролем. Бромид этидия (10 мкг на чашку) использовали для контроля активности системы метаболической активации. В вариантебез метаболической активации (МА-) бромид этидия не проявил мутагеннойактивности, а в условиях метаболической активации (МА+) показал высокуюмутагенную активность – количество ревертантов увеличилась в 34,86 раз посравнению с негативным контролем.Позитивным контролем для штамма ТА 100 служил азид натрия (5 мкгна чашку).
Азид натрия увеличил количество ревертантов в 10,06 раз посравнению с негативным контролем. 2-аминоантрацен (5 мкг на чашку) использовали для контроля активности системы метаболической активации(таблица 6.26).В варианте без метаболической активации (МА-) 2-аминоантрацен не проявил мутагенной активности, а в условиях с метаболической активацией (МА+) показал высокую мутагенную активность – количество ревертантов увеличилось в 8,76 раз по сравнению с негативным контролем (таблица 6.26).96Таблица 6.26– Мутагенное действие соединения АХ-554 в тесте Эймса на штаммах Salmonella typhimuriumМетаболическаяактивация1Доза препара-Группата, мкг/чашку23Среднее количествоколоний ревертантов на чашку4Отношение среднего количестваколоний ревертантов на чашку вопыте к таковому в соответствующем контроле5Salmonella typhimuriumштамм ТА 97Негативный контроль (во-175,67±3,18-0,5171,67±2,730,985162,00±5,570,9250175,00±5,571,00500161,67±10,20,925000166,30±8,500,95501137,67±64,85*6,48148,00±16,640,84да)АХ-554МА -Позитивный контроль(9-аминоакридин)ДМСО (растворитель для 9аминоакридина)97Таблица 6.26, продолжение12345140,33±11,92-0,5148,33±12,881,065135,00±9,640,9650147,67±7,971,05500137,67±8,410,985000136,30±15,80,97Негативный контроль (вода)МА +АХ-554Salmonella typhimurium штамм ТА 98Негативный контроль (во-54,00±10,12-0.550,67±10,730,94562,00±3,511,155051,67±4,910,9650048,00±7,510,89500053,33±4,370,9951789,00±171,50а33,13да)МА -АХ-554Позитивный контроль(2-нитрофлуорен)98Таблица 6.26, продолжение12Контроль метаболическойактивации (бромид этидия)3451037,67±1,330,7059,33±2,73-0,555,00±9,290,93556,67±12,030,965059,67±9,961,0150054,67±10,840,92500061,00±10,071,03102068,33±138,23а34,86Негативный контроль(вода)МА +АХ-554Контроль метаболическойактивации (бромид этидия)Salmonella typhimurium штамм ТА 98Негативный контроль (вода)МА -АХ-554136,67±13,74-0.5128,00±10,390,945125,00±10,150,9150142,00±3,611,04500138,33±11,861,0199Таблица 6.26, продолжение12345АХ-5545000143,67±11,051,05101375,33±81,02а10,065125,67±8,290,92133,33±12,33-0,5140,67±6,571,065127±6,510,9550128,33±16,840,96500136,00±4,511,025000122,67±3,710,9251167,67±61,13а8,76Позитивный контрольМА -(азид натрия)Контроль метаболическойактивации(2-аминоантрацен)Негативный контроль(вода)АХ-554МА +Контроль метаболическойактивации(2-аминоантрацен)Примечание: * – различия достоверны по сравнению с ДМСО; а – различия достоверны по сравнению с негативным контролем (р<0,05, ANOVA, критерий Даннета).100Исследуемое лекарственное средство АХ-554 в виде фармацевтическойсубстанции во всех изученных концентрациях (0,5-5000 мкг/чашку) не продемонстрировало мутагенного эффекта на штаммах ТА 97, ТА 98 и ТА 100Salmonella typhimurium в присутствии системы метаболической активации ибез таковой.Следовательно, суммируя наши исследования мутагенного действиявещества, можно сказать, что однократное и 5-ти кратное внутрижелудочноевведение АХ-554 инбредным мышам в средне-терапевтической дозе 137,6мг/кг, а также однократное внутрижелудочное введение в 10-кратной СТД,составившей1376 мг/кг (максимальная доза в соответствии с Методическимирекомендациями) не индуцировало хромосомные аберрации в клетках костного мозга животных.
Проведенное исследование позволило установить, чтоисследуемое соединение аминохромена не индуцирует генные мутации наштаммах Salmonella typhimurium ТА 97, ТА 98 и ТА 100 в диапазоне концентраций 0,5 – 5000 мкг/чашка. Полученные данные позволяют заключить, чтоАХ-554 не оказывает мутагенного действия.6.2 Исследование канцерогенного потенциала вещества АХ-554Основная задача доклинического изучения канцерогенности 4-алкилзамещенного производного аминохромена АХ-554 состояла в том, чтобы вэксперименте на животных выявить или исключить канцерогенное действие,вызванное самим соединением или его метаболитами.
Изучение канцерогенного действия субстанции проводили с помощью теста на повреждения ДНК(ДНК-комет) методом щелочного электрофореза.Уровень ДНК-повреждений (% ДНК в хвосте) определяли в клеткахпечени, почек, селезенки и костного мозга мышей-самцов линии C57Bl/6 через 3 и 18 часов после внутрижелудочного введения фармацевтической субстанции АХ-554.101В таблице 6.27 представлены результаты исследования влияния АХ554 в виде фармацевтической субстанции на уровень ДНК-повреждений вклетках указанных органов экспериментальных животных после экспозициив течение 3 часов и 18 часов.Таблица 6.27– Влияние однократного внутрижелудочного введения АХ-554в СТД, 5- и 10-кратной СТД на уровень ДНК-повреждений в органах и тканях мышей линии C57Bl/6 в условиях 3- и 18-часовой экспозиции (%ДНК вхвосте, M±m, n=5 в каждой группе)ГруппаКлеткиКлеткиКлеткипеченипочекселезенкиКлеткикостногомозгаЧерез 3 часа после внутрижелудочного введенияКонтрольЦиклофосфамид(50 мг/кг)4,96±0,9611,45±1,78*5,98±1,186,41±1,1513,99±1,01* 13,44±2,43*5,74±0,8612,05±1,62*АХ-554 (137,6 мг/кг)5,37±0,984,91±1,336,67±0,345,06±0,88АХ-554 (688 мг/кг)3,70±0,716,27±0,726,75±0,626,71±0,90АХ-554 (1376 мг/кг)4,78±0,707,44±1,165,16±1,435,02±1,05Через 18 часов после внутрижелудочного введенияКонтрольЦиклофосфамид (50мг/кг)4,70±0,8213,73±2,35*5,88±0,955,65±0,7711,54±1,56* 12,78±2,14*4,73±1,0214,14±1,55*АХ-554 (137,6 мг/кг)6,28±0,994,94±0,646,21±0,625,94±0,45АХ-554 (688 мг/кг)5,04±0,856,20±0,535,09±1,124,84±1,26АХ-554 (1376 мг/кг)5,89±1,055,14±1,227,18±0,334,38±0,85Примечание: *- различия статистически достоверны по сравнению с контрольной группой при р<0,05 (одномерный дисперсионный анализ, критерийНьюмена-Кейлса)102Проведенное исследование показало отсутствие достоверных различий между уровнями ДНК-повреждений клеток всех исследованных органовчерез 3 часа после внутрижелудочного введения субстанции АХ-554 в дозах137,6 мг/кг, 688 мг/кг и 1376 мг/кг, составляющих средне-терапевтическую,5- и 10-кратную средне-терапевтическую дозы по сравнению с контрольнойгруппой животных, получавших растворитель.Циклофосфамид, использованный в качестве позитивного контроля,при внутрибрюшинном введении мышам в дозе 50 мг/кг веса животных, эффективно индуцировал разрывы ДНК в паренхиматозных клетках всех исследуемых органов линейных мышей при экспозиции в течение 3 часов (таблица 6.27).Через 18 часов после фармакотерапевтического воздействия у животных группы позитивного контроля введение циклофосфамида в дозе 50 мг/кгпривело к статистически значимому увеличению ДНК-повреждений клетокво всех исследованных органах/тканях.
Внутрижелудочное введение вещества АХ-554 в дозах 137,6 мг/кг, 688 мг/кг и 1376 мг/кг, не привело к достоверному увеличению ДНК-повреждений клеток всех исследованных органов/тканей.Таким образом, результаты исследования ДНК-повреждающей активности фармацевтической субстанции позволяют сделать заключение об отсутствии канцерогенных свойств у вещества АХ-554.6.3Влияние внутрижелудочного введения АХ-554 на репродуктивнуюсферу экспериментальных животныхОсновная задача доклинического изучения влияния АХ-554 на репродуктивную систему состояла в том, чтобы в эксперименте на животных доказать или исключить отрицательное действие вещества на репродуктивнуюфункцию, эмбриотоксические свойства вещества, т.е.
выявить способностьвещества оказывать токсическое действие на развивающиеся эмбрионы, на103рушения эмбрионального развития, проявляющихся в постнатальном периоде.При изучении влияния АХ-554 на репродуктивную (генеративную)функцию самок внутрижелудочное 15-суточное введение АХ-554 в дозах68,8 мг/кг/сут и 688 мг/кг/сут (соответствующих СТД и 10-кратной СТД длякрыс с учетом коэффициента биологического переноса) самкам крыс у животных не зафиксировано отклонений в общем виде, физическом состоянии иповедении. Масса тела самок, получавших ФС АХ-554, не отличалась от массы тела контрольных животных (рис. 6.20).320Вес животного, г30028026024022012КонтрольАХ-554 68,8 мг/кг/сут3АХ-554 688 мг/кг/сутПримечание: 1 – до начала введения, 2 – 15-е сутки введения, 3 – 20 сутокбеременностиРисунок 6.20 — Влияние курсового внутрижелудочного введения АХ-554 намассу тела самок крыс (M±m, n=20 в каждой группе)До начала введения ФС АХ-554 в дозах 68,8 мг/кг и 688 мг/кг, а также втечение всего эксперимента, животные в исследуемых группах не различались по потреблению корма и воды.В дальнейшем производили ссаживание опытных животных с интактными.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
