Диссертация (1174190), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Действительно,совместное использование Prx 6 и паракринных факторов МСК прихимическоможогепоражённойкожизначительно(в2-3раза),увеличиваетчтоскоростьобусловленорегенерациинейтрализациейокислительного стресса, уменьшением апоптоза, увеличением пролиферацииклеток. Анализ профиля противовоспалительных и провоспалительныхцитокинов IL-6, IL-8, IL-10 в пораженной ткани также свидетельствует, что вгруппе с применением Prx6 и паракринными факторами МСК активнее всегопроходят процессы клеточной пролиферации и заживления ткани.В механической ране совместное применение Prx 6 и паракринныхфакторов МСК уменьшает выделение Cas 3 в клетках поражённой ткани, аследственно снижают интенсивность апоптоза, а также увеличивают степеньпролиферации.
При совместном использовании паракринных факторов МСКи Prx 6 при наиболее отчетливо отмечена пролиферативная активность104липоцитов, к 28 суткам фиброзная ткань представляется более зрелой, еёразрастания полностью достигают высоты предсуществующей кожи. Вкраевой зоне кожи выявлены новообразованные волосяные фолликулы спролиферирующими шеечными липоцитами и новообразованием волос.Таким образом, совместный эффект пероксиредокина 6 и паракринныхфакторов МСК не является синергетическим, однако данный эффектприводит к наилучшему терапевтическому результату при лечении какхимического ожога, так и механической полнослойной кожной раны.Наоснованиидемонстрирующаяпрорегенеративногополученныхмеханизмдействияданныхпротекторногопаракринныхпредлагаетсядействияфакторовсхема,Prx6МСКипримеханических и химических травмах кожи (рис.
33).Воспаление является ключевым процессом, который может определитьне только скорость заживления раны, но и степень фиброза. Воспалительнаяфаза начинается с коагуляции крови, за этим следует увеличение кровотока вобластях, прилегающих к ране, сопровождающееся набуханием и краснотойиз-за повышенной проницаемости сосудов местными воспалительнымиагентами (в том числе IL-1) [Harvey C., 2005], которые в свою очередьинициируют скопление нейтрофилов и макрофагов в области раны.Моноциты, проникающие в зону ранения, дифференцируются в макрофаги истимулируют ангиогенез и синтезируют оксид азота (NO) [Witte M.B.
andBarbul A., 2002]. Нейтрофилы удаляют зараженные патогены фагоцитозом, атак же выделяют АФК [Segal A.W., 2005; Wild T. and Auböck J., 2007].Однако чрезмерное накопление АФК приводит к окислительному стрессу,который, в свою очередь, замедляет процесс ангиогенеза и усиливает апоптоз(рис. 30А).105рис. 33. Особенности заживления кожной раны при использовании Prx 6 ипаракринных факторов МСК (кМСК). А – заживление раны без использования Prx 6и кМСК; Б – заживление раны с применением Prx 6 и кМСК.Условные обозначения: АФК – активные формы кислорода; ОС – окислительный стресс;NO – оксид азота; Cas 3 – Caspase 3 (маркер апоптоза); Ki 67 – маркер клеточнойпролиферации; IL 1 – интерлейкин 1 (провоспалительный интерлейкин); IL 6, 10 –интерлейкины 6, 10 (противовоспалительные интерлейкины).После воспалительной фазы стимулируется пролиферация сосудистыхэндотелиальных клеток и фибробластов.
Смежные здоровые ткани, а такжеэндотелиальные предшественники инициируют ангиогенез, что приводит кобразованию «грануляционной ткани» [Harvey C., 2005]. Затем следуетмиграция кератиноцитов с краев раны на поверхность грануляционной ткани[Rhett, J.M. et. al., 2008].Фибробласты синтезируют коллаген. Во времяпоследней фазы, ремоделирования, происходит повторная эпителизация106раны, а дерма восстанавливает свою прочность.
Тем не менее, шрам можетоставаться от нескольких месяцев до нескольких лет [Harvey C., 2005] (рис.30А).Prx6нейтрализуетгиперпродукцииАФКокислительныйопосредуетстрессауменьшениевране.апоптоза,Снижениеувеличениерегенеративной способности ткани, а также увеличению васкуляризациисосудов(рис.30Б).ПаракринныефакторыМСК,всвоюочередь,способствуют выработке большего количества противовоспалительныхцитокинов, таких как IL-6 и IL-10, снижению концентрации воспалитеьныхцитокинов,регулируятемсамымпроцессвоспаления.Cовместноеприменение как Prx 6, так и паракринных факторов МСК способствовалосокращению сроков закрытия раневой поверхности.
Фермент-антиоксидантPrx6стимулировалангиогенез,апаракринныефакторыМСКспособствовали миграции фибробластов в зону поражения, тем самым,регулируя выработку коллагена. Таким образом, совместное действие Prx 6 ипаракринных факторов МСК на этапе пролиферации направлено настимуляцию образования грануляционной ткани, способствуя сокращениюсроков регенерации поврежденной ткани.107ЗАКЛЮЧЕНИЕПолученные данные свидетельствуют о том, что и химическое, имеханическое повреждение кожи сопровождается окислительным стрессом иувеличением уровня провоспалительных биомаркеров в поражённом участкекожи.Применениепероксиредоксина6улучшаловаскуляризациюгрануляционной ткани, что свидетельствует о благоприятном действииданного фермента на заживление ран.
Таким образом, нейтрализацияокислительного стресса с помощью ферментов-антиоксидантов в начальнойстадии заживления полнослойной механической раны является важнымфактором для ускорения их заживления. Следует отметить, что посколькупероксиредоксин 6 является белковой молекулой, то, по-видимому, он неможетпроникнутьвклеточнуюмембрану.Отсюдаследует,чтопероксиредоксин 6 нейтрализует, в первую очередь, избыточные формыкислорода в межклеточном пространстве, защищая мембраны клеток отперекисного окисления липидов.Паракринные факторы МСК также показали свою эффективность наобеих моделях заживления ран, при этом наибольший эффект наблюдалсяпри их использовании при заживлении механической полнослойной раны.По-видимому, это связано с тем, что паракринные факторы МСКспособствуют миграции фибробластов в зону поражения, которые, в своюочередь, синтезируют коллаген, что играет ведущую роль в заживлениимеханической полнослойной раны.Установлено, что эффект пероксиредоксина 6 связан с пероксидазнойактивностью, тогда как механизм действия паракринных факторов МСК покане выяснен из-за многочисленных регуляторных факторов в культуральнойсреде МСК.Совместное использование пероксиредоксина 6 и паракринныхфакторов мезенхимальных стволовых клеток, благодаря их протекторному и108прорегенеративному эффекту вызывает наилучший терапевтический эффект,ускоряя процесс заживлении ран.Таким образом, в данной работе показано действие трех разных типовпрепаратов для заживления кожных ран.
Было показано, что в зависимостиот типа поражения, целесообразно использование того или иного препарата:пероксиредоксина 6 – при химическом ожоге кожи, препарата паракринныхфакторов МСК – при механической полнослойной кожной ране. Третий жепрепарат – комбинация фермента антиоксиданта пероксиредоксина 6 ипаракринных факторов мезенхимальных стволовых клеток, оказываетнаилучшее терапевтическое действие, независимо от этиологии раны,являясь наиболее перспективным средством для заживления кожных ран.109ВЫВОДЫ1. Как химический ожог, так и механическая полнослойная рана кожив первые сутки вызывает разрушение тканей, которое сопровождаетсяокислительным стрессом (увеличение концентрации МДА в 2,5 раза),увеличением уровня оксида азота в 2,5 раза, увеличением уровня клеточногоапоптоза (по Cas 3 в 2,3 раза) в пораженной коже.2.
Внутрикожное введение Prx 6 при химическом ожоге уменьшаетконцентрацию МДА в 1,5 раза, снижает уровень клеточного апоптоза болеечем в 2 раза (по Cas 3) и повышает пролиферацию клеток в 2 раза (по Ki-67);уменьшает уровни провоспалительных цитокинов в 2 раза в пораженнойткани. Аппликации Prx 6 в процессе заживления механической раныспособствуют снижению уровня апоптоза в 2 раза (по Cas 3) и повышениюпролиферации в 1,5 раза (по Ki-67), а также улучшают васкуляризациюгрануляционной ткани в пораженной коже.
Эффект пероксиредоксна 6определяетсяиспользованииегоегопероксидазноймутантногоактивностью,аналогачтоPrx6C47S,показанонеприобладающегопероксидазной активностью.3. Применение паракринных факторов МСК при химическом ожогекожи приводит к снижению в 2 раза уровня апоптоза (по Cas 3) и повышениюпролиферации клеток в 2 раза (по Ki-67), а также к уменьшению уровнейпровоспалительныхцитокиноввпораженнойткани.Использованиепаракринных факторов МСК при заживлении полнослойной механическойкожной раны в 2 раза снижает уровень апоптоза (по Cas 3) и в 2 разаповышает пролиферацию клеток (по Ki-67), а также увеличивает содержаниефибробластов в ране в 2 раза, ускоряя процесс созревания грануляционнойткани в области раневого дефекта.4.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
