Диссертация (1174190), страница 14
Текст из файла (страница 14)
р-р (контроль); Б – Prx 6, В –кМСК, Г – Prx 6 + кМСКТаблица 3Динамика изменения площади ожоговой раны (M ± m, мм2)Суткипосле Контрольтравмы(физ.раствор)Prx 6кМСК (группа 2)(группа 1)Prx 6 + кМСК(группа3)1478,6±1,078,5±0,977,5±1,278,1±0,31678,1±1,376,1±1,9*74,0±3,4*75,5±1,8*1870,5±3,163,4±3,6*59,8±2,4*58,6±3,1*2058,9±4,553,0±5,6*42,9±3,3*#38,4±3,7*#2247,1±4,138,3±2,7*26,2±4,5*#18,3±4,1*#2434,0±4,121,4±2,3*14,2±2,0*#9,2±1,3*#x2624,7±4,412,2±2,8*9,8±1,0*5,3±0,9*#x2818,2±1,09,6±1,8*5,4±0,6*#2,3±0,5*#x* – достоверно по сравнению с контролем, р < 0,05.#– достоверно по сравнению с группой 1, р < 0,05.х – достоверно по сравнению с группой 2, р < 0,05.ǂ – достоверно по сравнению с группой 3; р < 0,05.89Результаты количественных исследований (таблица 3) показали, чтопосле снятия устройства, в результате совместного применения кМСК и Prx6 площадь раны на 28 сутки значительно уменьшилась, регенерацияпрактически завершена.
Применение Prx 6 и кМСК так же оказываетположительное действие, по сравнению с контрольной группой.Заживление травматических повреждений мягких тканей – хорошоорганизованныйпроцесс,которыйприняторазделятьна4фазы,характеризирующие стадию заживления дефекта, что позволяет судить обэффективности применения препарата.
Первой фазой течения раневогопроцесса считают фазу воспаления, ее пик приходится на 3 сутки.Рис.27. Морфологическая картина состояния механическойполнослойной раны на 3 сутки при использовании Prx 6 и кМСКОкраска гематоксилином и эозином. Дно раны (х200) , N=15А –физ. р-р (контроль); Б – Prx 6, В –кМСК, Г – Prx 6 + кМСК90На 3 сутки в контрольной группе дно язвенного дефекта представленомолодой грануляционной тканью с микроабсцессами, очагами некроза иявлениями отека (рис.27А). Поверхность грануляционной ткани покрытаслоем тканевого детрита с примесью гнойного экссудата.В группе животных, где применялся Prx 6 дно язвенного дефектапредставлено грануляционной тканью с наличием микроабсцессов и покрытотканевым детритом и гнойным экссудатом (рис.27Б).
Более зрелаягрануляционная ткань определяется в глубоких отделах (среди мышечнойткани), где также встречаются участки абсцедирования.В группе, где применялись паракринные факторы МСК дно язвенногодефекта алогично контрольной группе и группе с использованием Prx 6(рис.27В). Грануляционная ткань представляется в этой зоне более зрелой(больше фибробластов, меньше явления отека).В группе, где совместно применялись Prx 6 и кМСК дно язвыпредставленно молодой грануляционной тканью (рис.27Г). В глубокихотделах наблюдается отек, по краям язвенного дефекта – новообразованиеэпидермиса. В глубоких отделах более зрелая грануляционная ткань, степеньзрелости соответствует группе, где применяли Prx 6.После заполнения дня раны грануляционной тканью начинается этапэпителизациии.
Для оценки влияния препаратов в фазу ремоделированияживотных выводили из эксперимента на 14 сутки.В контрольной группе дно раны представлено грануляционной тканью,богатоймелкимисосудамивповерхностныхучастках(рис.28А).Некротического слоя не наблюдается. Присутствует новообразованныйэпидермис с явлениями акантоза и обилием новообразованных волосяныхфолликулов.В группе, где применялся Prx 6 дно раны представленно созревающейгрануляционной тканью, богатой сосудами, без некротического слоя (рис.28Б).91В группе, где использовали кМСК дно язвы представлено созревающейгрануляционной тканью без некротического слоя на поверхности грануляций(рис. 28В).В гпуппе с использованием комбинациии Prx 6 и кМСК дно язвыпредставленосозревающейгрануляционнойтканью,богатойновообразованными мелким сосудами в поверхностных участках (рис.
28Г).Некротического слоя не наблюдается.Рис. 28. Морфологическая картина состояния механическойполнослойной раны на 14 сутки при использовании Prx 6 и кМСКОкраска гематоксилином и эозином. Дно раны (х200) , N=15А –физ. р-р (контроль); Б – Prx 6, В –кМСК, Г– Prx 6 + кМСК.Таким образом, на 3 и 14 сутки во всех исследованных группах вблизикраев антиконтракционного кольца под узким воспалительно-некротическимслоем отмечено большее по сравнению с центральными отделами раныскоплениеполиморфноядерныхлейкоцитов(ПЯЛ).Послеудаления92антиконтракционного кольца количество ПЯЛ снижалось и соответствовалоцентральным отделам раны. Другая особенность заживления кожных ран,выявленная в группах с использованием кМСК – диффузно-очаговаямакрофагальная реакция.
Преимущественно в поверхностных участках раныотмечены скопления макрофагов, наиболее отчетливо макрофагальнаяреакция была отмечена на 14 сутки применения препаратов.В краях раневого дефекта кожи отмечена пролиферация клетокбазального слоя эпидермиса, наползающего, по мере формирования исозревания грануляционной ткани, на её поверхность.
В участках кожикраевой зоны во всех группах отмечена пролиферация липоцитов шеекволосяных фолликулов. Наиболее отчетливо пролиферативная активностьлипоцитов отмечена в группе с применением паракринных факторов МСК исовместном использовании кМСК и Prx 6.В опытных группах к 28 суткам эпителизация полностью завершена,эпидермис покрыт роговым слоем. Раневой дефект замещен созревающейфиброзной тканью. В группах, где применялись паракринные факторы МСКфиброзная ткань представляется более зрелой, её разрастания полностьюдостигают высоты предсуществующей кожи (рис.
29В, 29Г). В краевой зонекоживыявленыновообразованныеволосяныефолликулыспролиферирующими шеечными липоцитами и новообразованием волос.Наибольшее их количество обнаружено так же в группах, где применяликМСК. При комбинированном использовании Prx 6 и кМСК к 28 суткамотмечено более активное новообразование волосяных луковиц в пограничнойзоне кожных краев.93Рис. 29. Морфологическая картина состояния механическойполнослойной раны на 28 сутки при использовании Prx 6 и кМСКОкраска гематоксилином и эозином. Дно раны (х200) , N=15А –физ. р-р (контроль); Б – Prx 6, В –кМСК, Г– Prx 6 + кМСКДля объективизации степени созревания грануляционной ткани мыпровели количественные исследования центральных участков кожных ран.
Входе исследования фиксировали общее количество клеток, появлениерассеянныхфибробластов,врастаниевповерхностныйслойновообразованных сосудов, развитие вертикальных сосудов и формированиеслоягоризонтальныхфибробластовглубокогослоя,атакжепролиферативная активность эпителия в краях кожной раны. Было отмечено,что созревание грануляционной ткани в экспериментальных группахпроисходит быстрее, а сама ткань выглядит более зрелой, особенно через 28суток после нанесения повреждения. Полученные результаты приведены втаблицах 4 и 5.94Таблица 4Количество клеточных элементов и сосудов грануляционной тканив единице площади препарата, М±mГруппы исследованияОбщее количествоКоличество фибробластовКоличествоклетоки фиброцитовсосудов14 суткиКонтроль (физ.р-р)452±55107±4815±5Группа 1 (Prx6)453±59112±1119±6Группа 2 (кМСК)568±92201±54*ǂ17±5Группа 3 (Prx6+кМСК)516±84161±21ǂ20±828 суткиКонтроль (физ.р-р)371±64128±3311±3Группа 1 (Prx6)385±99184±6221±7*Группа 2 (кМСК)328±51258±50*ǂ11±2ǂГруппа 3 (Prx6+кМСК)314±93217±61*ǂ12±5*- достоверно по отношению к контролю (р<0,05)ǂ- достоверно по отношению к группе 1 (р<0,05)Индекс созревания грануляционной ткани выявил наибольший эффектпри использовании паракринных факторов МСК (таблица 5).Таблица 5Индекс созревания грануляционной ткани в кожной ранеГруппы исследованияИндекс созревания грануляционной ткани14 суток28 сутокКонтроль (физ.р-р)0,240,35Группа 1(Prx6)0,250,48Группа 2 (кМСК)0,350,79Группа 3 (Prx6+кМСК)0,310,79Коэффициент (индекс) созревания грануляционной ткани - отношение количествафибробластов/ к общему количеству клеток в единице препарата.95Такимобразом,применениеPrx6улучшаловаскуляризациюгрануляционной ткани, через 14 и 28 суток (таблица 5), что свидетельствует облагоприятном действии данного фермента на заживление ран.
Наибольшийэффектнаблюдаетсянейтрализациейвпервыеокислительногодни,что,стресса.по-видимому,Использованиесвязаноспаракринныхфакторов МСК увеличивало процентное содержание фибробластов в ране итем самым ускоряло процесс созревания грануляционной ткани.2.2. Влияние Prx6 и кМСК на уровень апоптоза в механическойранеСравнивая эффект применения Prx 6, паракринных факторов МСК, атак же их совместного применения на механической кожной ране во всехтрех группах наблюдается понижение относительной концентрации Cas 3 в 2раза, относительно группы с применением физиологического раствора (рис.30).Концентрация,%(относительные значения)250*200150100500Здоровая Физ.растворРис. 30.Prx 6кMCKPrx 6+кMCKКонцентрация Cas-3 в механической ранеприиспользовании Prx 6 и кМСКОтносительная концентрация Cas-3 в ране через 24 часа после нанесения ожогаТХУ.
Данные рассчитаны относительно контроля (здоровая кожа) ± SE (стандартнаяошибка). N=15. Контроль принят за 100%.*- достоверно по отношению к контролю (р<0,05)96Концентрация Cas 3 в группах с использованием препаратов Prx6 икМСК достоверно незначима относительно контрольной группы (здороваякожа).Таким образом, Prx 6 и паракринные факторы МСК уменьшаютвыделение Cas 3 в клетках поражённой ткани, а следственно снижаютинтенсивность апоптоза.2.3. Влияние Prx6 и кМСК на уровень пролиферации вмеханической ранеКонцентрация Ki-67 позволяет судить о процессе пролиферации,Концентрация,%(относительные значения)который происходит на краях раны.350300150*кMCKPrx 6+кMCK*250200**100500Здоровая Физ.растворРис. 31.Prx 6Концентрация Ki-67 в механической ранеприиспользовании Prx 6 и кМСКОтносительная концентрация Ki-67 в ране через 24 часа после нанесения ожогаТХУ.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
