Диссертация (1154791), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Для амплификации гена16SрРНКиспользовалипаруолигонуклеотидныхпраймеров27F(с44последовательностью аминокислот AGAGTTTGATCMTGGCTCAG) и 1492R(TACGGYTACCTTGTTACGACTT) на консервативный фрагмент гена 16S рРНК.Используя метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) был наработан фрагментДНК на приборе М Jmini (BioRad США). Для ПЦР реакции использовали TaqДНК полимеразу (Сибэнзим, Россия), геномную ДНК бактерий и праймеры 27F и1492R. Полученный в результате ПЦР фрагмент ДНК был сиквенирован в Центреколлективного пользования «ГЕНОМ» в Институте молекулярной биологии им.В.
А. Энгельгардта.Скрининг полученных нуклеотидных последовательностей гена 16S рРНКисследуемого штамма бактерии проводили на базе данных GenBank с помощьюпакета программ BLAST. При классификации бактериального штамма учитывализначения сходства нуклеотидных последовательностей гена 16S рРНК равныйболее 95% сходства.АнализполученныхнуклеотидныхпоследовательностейДНКбактериального изолята составил 99% идентичности с типовым штаммомStaphylococcus aureus. Далее идентифицированный бактериальный штаммStaphylococcus aureus использовали для дальнейших экспериментов.2.7. Статистическая обработка результатов исследованияСтатистическаяобработкаданныхэкспериментовпроводиласьсиспользованием U-критерий Манна – Уитни (англ. Mann – Whitney U-test).
Этостатистический критерий, используемый для оценки различий между двумянезависимыми выборками по уровню какого-либо признака, измеренногоколичественно. Он позволяет выявлять различия в значении параметра междумалыми выборками. Сравнительную оценку результатов лечения больныхвыполняли с помощью F-теста или критерия Фишера (F-критерием, φ*критерием). Так называют любой статистический критерий, тестовая статистикакоторого при выполнении нулевой гипотезы имеет распределение Фишера (Fраспределение).45Чтобы статистика имела распределение Фишера, необходимо, чтобычислитель и знаменатель были независимыми случайными величинами, исоответствующие суммы квадратов имели распределение Хи-квадрат.
Для этоготребуется, чтобы данные имели нормальное распределение. Кроме того,предполагается,чтодисперсияслучайныхвеличин,квадратыкоторыхсуммируются одинаково для малых групп (при р ≤ 0,05 группы считалидостоверно отличающимися).Также оценивали статистически достоверную разницу средних значенийпоказателей минерализации костной ткани в дефектах черепа у крыс, плотноститканей по срокам исследования. Были изучены средние величины совокупнойплотности костной ткани в замещающемся дефекте. Подвергнуты тщательномуанализу результаты лечения посттравматического остеомиелита традиционным иразработанным способом, который включал для этого оценку степень болевогосиндрома, вид заживления операционной раны, качественный и количественныйсостав отделяемого из послеоперационной раны, наличие и характер осложненияв послеоперационном периоде.Шкала оценки результатов лечения по разработанному способу:Хороший результат соответствовал отсутствию проявлений рецидивапосттравматического остеомиелита в срок не менее года после операции,отсутствие локальных и лабораторных признаков воспаления, трофическихнарушений.Удовлетворительнымрезультатомсчиталиотсутствиирецидивазаболевания на протяжении года, неполном купировании признаков локальноговоспалительного процесса либо их возникновение на протяжении периоданаблюдения,заживлениеоперационнойранысединичнымислучаямипринималирецидивотделяемого.Занеудовлетворительныйрезультатостеомиелитического процесса в течение года после операции, с наличиемсвищевогоходаилиместныхпризнаковвоспаления,бактериологическими и лучевыми методами диагностики.подтвержденных462.8.
Общая методика исследования ретроспективнойгруппы пациентов с посттравматическим остеомиелитомС целью определения ведущих факторов развития посттравматическогоостеомиелита выполнено ретроспективное исследование, которое включаетанализ историй 210 больных с посттравматическим остеомиелитом костейконечностей в период с 2009 по 2012 гг., лечившихся в ГКБ № 59, ГКБ № 68 иДорожной клинической больнице им. Н. А. Семашко на станции Люблино, ОАО«РЖД».2.8.1.
Общая характеристикаретроспективной группе пациентовклиническихисследованийвНами были изучены истории болезни 210 пациентов с посттравматическимостеомиелитом конечностей. Пациенты проходили лечение в отделенияхтравматологии и ортопедии, а также гнойной хирургии в период с 2009 по 2015гг. Средний койко-день имел значение 13,2 ± 7,5 суток. Женщины составили 28%(63).
Мужчины – 72% (147). Средний возраст равнялся 41,9 лет.При изучении историй болезней оценивали объем и характер оперативноголечения, количество госпитализаций, клиническую картину развития рецидивов,состояние мягких тканей, микробный спектр остеомиелитического очага.Возрастной состав пациентов колебался от 20 до 68 лет. При исследовании особоевнимание уделялось сбору анамнестических данных по симптоматике началаразвития рецидива заболевания. Для этого нами была разработана анкетаопросникнабазеSF36.Висследованиевключалисьпациенты,госпитализированные по поводу посттравматического остеомиелита конечностей.Отметим, что среди пациентов имелись больные с впервые выявленнымзаболеванием, а также больные, имеющие рецидивы остеомиелита.Ретроспективноеисследованиепациентовспосттравматическимостеомиелитом конечностей.
Оценивали гендерный состав группы, возраст,количество рецидивов и повторных госпитализаций, койко-день. Также былизучены: локализация процесса, клиническая картина развития рецидивов(свищевая или флегмонозная форма), объем дефекта костной ткани, состояние47мягких тканей. Всем пациентам проводилось рентгенография, фистулография, попоказаниям компьютерная томография. Осуществляли анализ микробногопейзажа и микрофлоры из остеомиелитического очага.В отдаленный послеоперационный период удалось связаться с 114пациентами из ретроспективной группы больных, которые заполняли анкетуопросник.У47человекизнихпроведеноконтрольноеклинико-рентгенологическое обследование.Дляоценкианализасостояниябольных,лечившихсяпоповодупосттравматического остеомиелита мы использовали неспецифический опросникSF-36 (The Short Form-36) для оценки качества жизни пациента).
Данныйопросник широко используется при проведении исследований качества жизни вСША и европейских странах. Опросник SF-36 был установлен для оценкикачества жизни в США, Австралии, Франции, Италии. В США и в европейскихстранах исследовались отдельные группы людей, в результате исследований былиполученынормыдляздоровогонаселенияитипичныезначения(сгруппированием согласно полу и возрасту) для людей, имеющих различныехронические заболевания.Опросник SF-36 показывает степень удовлетворенности основнымисторонами жизнедеятельности человека, которые зависят от состояние здоровьячеловека, а также отражает общее благополучие. Опросник SF-36 включает в себя36вопросов,разбитыенагруппыпо8шкалам:1) общеездоровье;2) жизнеспособность; 3) ролевая деятельность; 4) социальное функционирование;5) физическое функционирование; 6) телесная боль; 7) психическое здоровье;8) эмоциональное состояние.Для каждый шкалы более высокий показатель (от 0 до 100) соответствуетлучшей оценке.
Из показателей шкал формируют два ключевых параметра:1) физический компонент здоровья;2) психологический компоненты здоровья.Преимущества опросника:48– можетиспользоватьсядляоценкикачестважизниприлюбыхзаболеваниях;– можно сравнивать значение показателей SF-36 с со значениямипоказателей российского популяционного контроля по аналогичным группам;– дает возможность комплексной оценки (включая психологические исоциальные отклонения) качества жизни людей.Шкалы оценокПоказатели группируются по следующим 8 шкалам:1) «физическое функционирование (Physical Functioning – PF);2) ролевое функционирование, обусловленное физическим состоянием(Role-Physical Functioning – RP);3) интенсивность боли (Bodily pain – BP);4) общее состояние здоровья (General Health – GH);5) жизненная активность (Vitality – VT);6) социальное функционирование (Social Functioning – SF);7) ролевое функционирование, обусловленное эмоциональным состоянием(Role-Emotional – RE);8) психическое здоровье (Mental Health – MH).Далее показатели шкалы агрегируются в два показателя:1) физический компонент здоровья (Physical health – PH), который обобщаетпоказатели 4 шкал: общее состояние здоровья; ролевое функционирование,обусловленноефизическимсостоянием;физическоефункционирование;интенсивность боли;2) психологический компонент здоровья (Mental Health – MH), которыйобобщаетпоказатели4шкал:жизненнаяактивность;социальноефункционирование; ролевое функционирование, обусловленное эмоциональнымсостоянием; психическое здоровье» [McHorney CA, Kosinski M, Ware JE, Jr.Comparisons of the costs and quality of norms for the SF 36 Health Survey collected bymail versus telephone interview: Results from a national survey.
Medical Care 1994;32:551–567.]Пример заполнения анкеты пациентом49Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ3.1. Анализ больных с посттравматическим остеомиелитом длинных костейконечностейАнализ ретроспективного исследования основано на изучении результатовлечения 210 пациентов с посттравматическим остеомиелитом конечностей. Всепациенты проходили лечение на стационарных койках отделений травматологиии ортопедии, гнойной хирургии ГКБ № 59, ГКБ № 68 и Дорожной клиническойбольнице им.
Н. А. Семашко на станции Люблино, ОАО «РЖД».Обработке подверглись истории пациентов лечившихся в период с 2009 по2015 гг. средний койко-день имел значение 13,2 ± 7,5 суток. Женщины составили28% (66), мужчины –72% (147). Средний возраст равен 41,9 лет.Локализация остеомиелитического поражения костей34151586417165бедрокости тазаголеностопный суставголеньтазобедренный суставкистьверхняя конечностьколенный суставРисунок 15 – Локализация остеомиелитического поражения костейКак видно из диаграммы (Рисунок 15), посттравматический остеомиелитпреимущественно поражал кости голени и бедро, в то время как реженаблюдается поражение костей кисти и таза.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
