Автореферат (1154690), страница 4
Текст из файла (страница 4)
1) за счет измененияактивных механизмов контроля микроциркуляции – эндотелиальнойвазодилатации и снижения нейрогенного тонуса сосудов (табл. 1). Различий ввеличинах перфузии и нормированных амплитуд эндотелиальных, нейрогенныхи миогенных колебаний при комплексной стимуляции по сравнению сизолированным применением АТПКЛ на 21-е сутки после нейрорафии невыявлено.Изменения электрофизиологических показателей, свидетельствуют, чтопод влиянием комплексной стимуляции у животных после нейрорафииулучшается проведение возбуждения через зону нейрорафии относительногруппы сравнения (табл.
2). Время проведения импульса на уровне зонынейрорафии и амплитуда неврального потенциала в данной группе не имеютразличий с таковым в группе крыс, которым выполнялась только АТПКЛ на14фоне нейрорафии. В то же время амплитуда мышечного ответа прикомплексной стимуляции в среднем вдвое превышает таковую в группеживотных с изолированным выполнением АТПКЛ на фоне нейрорафии(табл. 2). Увеличение амплитуды М-ответа отражает интенсификациюпроцессов реиннервации мышечных волокон и свидетельствует о болеевыраженном регенеративном влиянии комплексной стимуляции по сравнениюс изолированным использованием АТПКЛ.Анализ морфологических препаратов седалищного нерва у животныхданной группы подтверждает данные функциональных исследований исвидетельствует о значительной стимуляции регенеративных процессов.
Этопроявляется увеличением в проксимальном сегменте относительно группысравнения общего количества, числа неизмененных и регенерирующихнервных волокон. В дистальном отделе седалищного нерва общее количествонервных волокон составляет 77 (56; 95) в поле зрения, превышая данныйпоказатель группы сравнения в 2,4 раза.
При этом отмечается увеличение числарегенерирующих и снижение количества дегенеративно измененных нервныхволокон относительно группы сравнения, что отражает регенеративноедействие комплекса АТПКЛ и ПЭС. Следует отметить, что значимыхморфологических различий в нервном стволе при использовании изолированноАТПКЛ и ее комбинации с ПЭС не выявлено.4.Механизмыреализациирегенеративныхэффектоваутотрансплантированного кожного лоскута в качестве компонентакомплексной стимуляции репаративных процессов при повреждениипериферического нерваС целью установления роли травматизации мягких тканей при выполнениинейрорафии на состояние микрокровотока было изучено влияние оперативноговмешательства соответствующего объема без повреждения седалищного нерва.Обнаружено, что на 7-е сутки после операции в объеме доступа к седалищномунерву все исследуемые микроциркуляторные показатели не имеют значимыхотличий от контрольных значений.В ходе работы выявлено, что АТПКЛ реализует дистантныйстимулирующий эффект на микроциркуляцию у животных без повреждениянервных стволов.
В условиях сохраненной иннервации дистантноестимулирующее влияние АТПКЛ на микроциркуляцию осуществляетсяпосредством снижения нейрогенного тонуса сосудов. Нивелирование эффекта15происходит к 21-м суткам эксперимента – быстрее, чем в условиях нарушеннойиннервации.При изучении тканевых реакций зоны аутотрансплантации выявленоистончение аутотрансплантата с деградацией его эпидермиса к 21-м суткамэксперимента.
Изменения состава клеточных популяций дермы проявляютсяувеличением числа эозинофилов максимально до 6 (4; 8) на 7-е суткиэксперимента, лимфоцитов – максимально до 13 (5; 19) на 21-е сутки ифибробластов, количество которых в 2,5-3 раза превышает значения образцовинтактной кожи. Кроме того, как в эпидермисе, так и дерме аутотрансплантатаимеется значительное количество макрофагов, гигантских многоядерныхклеток, в отдельных участках, образующих гранулемы.
Фибробласты,макрофаги, эозинофилы и лимфоциты способны выделять целый рядбиологически активных соединений, которые, в свою очередь, могутобусловливать дистантное стимулирующее действие на микроциркуляцию ирегенеративный эффект АТПКЛ.При биохимических исследованиях установлено, что на 7-е сутки посленейрорафии седалищного нерва происходит увеличение концентрации VEGF всыворотке крови по сравнению с контролем (табл. 3).
На 21-е сутки отмечалосьзначимое снижение концентрации VEGF по сравнению с 7-ми суткамиэксперимента (табл. 3). Следовательно, выделение VEGF при нейрорафииявляется непродолжительным и нивелируется к 21 суткам (табл. 3).Таблица 3 – Изменения биохимических показателей у животныхпри нейрорафии и различных способах стимуляции регенеративных процессовПоказателиГруппыVEGF, пг/млNEFH, пг/млNT-3, нг/млКонтроль5,97(3,32;7,3)72,0(39,86; 88,94)0 (0; 0)Группа7 сутки21,9(16,6; 31,2)* 166,3(130,1; 239,9)*0,0025(0; 0,0040)*сравнения21 сутки13,3(9,96; 15,3)* 219,1(189,4; 299,4)*0 (0; 0)++АТПКЛ7 сутки23,2(20,6; 50,6)*63,97(62,7; 80,9)0,0046(0; 0,0596)* +21 сутки25,2(17,9; 28,5)*+ 71,8 (56,2; 81,99)+ 0,092(0,059; 0,179)* +АТПКЛ+ПЭС7 сутки16,6(9,96; 24,6)*+48,02(42,9; 56,5)+0,1(0,087; 0,124)*+21 сутки29,9(20.6; 31,2)*+67,23(48,4; 96,9)+0(0;0)Примечания: *- различия по сравнению с контролем статистически значимы (p<0,05);+- различия с группой сравнения в тот же срок наблюдения статистически значимы (p<0,05).16Содержание VEGF при АТПКЛ, выполненной на фоне нейрорафии,статистически значимо увеличивалось на 7-е сутки и сохраняло повышенныйотносительно контроля уровень до 21-х суток (табл.
3). Относительноаналогичных показателей группы сравнения, значимое увеличение отмечалосьтолько на 21-е сутки, свидетельствуя, что АТПКЛ пролонгирует продукциюVEGF при нейрорафии седалищного нерва (табл. 3).При комплексной стимуляции изменения концентрации VEGF не имелиотличий от группы животных, которым выполнялась только АТПКЛ на фоненейрорафии. При этом на 21-е сутки у животных, подвергнутых комплекснойстимуляции, уровень VEGF значимо превышал таковой в группе сравнения(табл. 3).Обнаружено, что у животных без повреждения нервных стволов АТПКЛтакже оказывает стимулирующее влияние на продукцию VEGF, нарастаниеконцентрации которого происходит к 21-м суткам. При этом интенсивностьпродукции VEGF одинакова у крыс с поврежденным и интактным нервом.Увеличение продукции VEGF под влиянием АТПКЛ может рассматриваться вкачестве механизма реализации регенеративного эффекта, способствующегоулучшению трофики денервированных тканей и как следствие стимуляциирегенеративных процессов.При исследовании концентраций нейроспецифических белков в кровиустановлено, что на 7-е сутки после нейрорафии седалищного нервапроисходит повышение уровня NT-3 и NEFH (табл.
3). К 21-м суткам посленейрорафии содержание NEFH в крови продолжало нарастать (табл. 3),свидетельствуя об активных процессах дегенерации, развивающихся воперированном нерве, а концентрация NT-3 снижалась до уровня контрольныхзначений (табл. 3), отражая малую продолжительность регенеративногодействия данного механизма.На 7-е и 21-е сутки после АТПКЛ в межлопаточной области и нейрорафииседалищного нерва уровень NEFH в крови не отличался от контроля (табл. 3),свидетельствуя в пользу того, что АТПКЛ уменьшает выраженностьдегенерации в нервном стволе.
При этом уровень NT-3 на 7-е сутки превышаетуровень значений группы сравнения и продолжает нарастать к 21-м суткамэксперимента (табл. 3), свидетельствуя, что пролонгация продукции данногофактора роста является одним из механизмов регенеративного эффектаАТПКЛ.17При комплексной стимуляции так же, как при изолированном примененииАТПКЛ, на 7-е и 21-е сутки после нейрорафии у животных сохраняетсянормальный уровень NEFH в крови (табл. 3).
Регенеративный эффекткомплексной стимуляции, реализуемый за счет повышения уровня NT-3 вкрови, хотя и превосходит таковой при изолированном применении АТПКЛ на7-е сутки эксперимента, к 21-м суткам нивелируется полностью (табл. 3), чтоможетбытьобъясненоингибированиемвыделенияданногонейроспецифического белка по механизму отрицательной обратной связи приактивации реиннервации мышц у животных данной группы.ЗАКЛЮЧЕНИЕТрофические нарушения при перерезке и нейрорафии седалищного нервапроявляются снижением перфузии кожи, сопровождающимся повышениемнейрогенного тонуса, и угнетением эндотелиальной вазодилатации, чтоотражает денервационную гиперчувствительность сосудов, которая достигаетмаксимального развития на 14-е сутки после нейрорафии.
При этомдегенеративно-регенеративные процессы в седалищном нерве протекают спреобладанием дегенеративных изменений и характеризуются медленнойрегенерацией нервных волокон, небольшая часть которых способна проводитьвозбуждение через зону нейрорафии, но к 21-м суткам не формирует синапсовна своих мишенях.АТПКЛ, выполненная одновременно с нейрорафией, оказываетрегенеративный эффект, заключающийся в снижении дегенерации аксоновпроксимального сегмента седалищного нерва, увеличении количества нервныхволокон в дистальном участке, улучшении проведения нервных импульсовчерез зону нейрорафии, ускорении наступления импульсной стадии процессарегенерации. Кроме того, наблюдается дистантное стимулирующее действие насистему микроциркуляции, характеризующееся поддержанием адекватнойперфузии тканей пораженной конечности.При сочетании АТПКЛ с ПЭС седалищного нерва после его нейрорафииотмечаются регенеративный эффект, а также дистантное стимулирующеедействие на микроциркуляцию.
ПЭС усиливает регенеративный эффектАТПКЛ, что выражается в увеличении интенсивности процессов реиннервациимышечных волокон.18РегенеративныйэффектАТПКЛвзаимосвязансдистантнымстимулирующим действием на систему микроциркуляции, который реализуетсяв условиях нейрорафии седалищного нерва за счет эндотелий-зависимойвазодилатации и снижения нейрогенного тонуса сосудов, что препятствуетразвитию их денервационной гиперчувствительности и обеспечиваетадекватные условия трофики для процессов регенерации нервных волокон иреиннервации мышц. Регенеративное действие и дистантный стимулирующийэффект на систему микроциркуляции осуществляются посредством стимуляциипродукции NТ-3 и VEGF, что ассоциировано с привлечением ваутотрансплантат и его перифокальную зону эозинофилов, макрофагов илимфоцитов.ВЫВОДЫ1.При пересечении и нейрорафии седалищного нерва у крысразвивается денервационная гиперчувствительность сосудов оперированнойконечности, что сопровождается преобладанием дегенеративных процессов внервных волокнах и их медленной регенерацией.2.АТПКЛ, выполненная на фоне нейрорафии седалищного нерва,оказывает дистантное стимулирующее действие на микроциркуляцию,способствуя поддержанию адекватной перфузии в тканях оперированнойконечности за счет снижения нейрогенного тонуса сосудов прекапиллярногоотдела микроциркуляторного русла и стимуляции эндотелиальнойвазодилатации.3.Регенеративный эффект АТПКЛ проявляется сохранениембольшего числа аксонов в проксимальном участке, увеличению числарегенерирующих в дистальном отделе нерва, улучшению проводимости череззону нейрорафии, стимуляции процессов реиннервации мышц.4.Сочетание АТПКЛ с ПЭС на фоне нейрорафии позволяетувеличивать продолжительность эндотелиальной вазодилатации в тканяхоперированной конечности, а также интенсифицировать процессыреиннервации мышц.5.АТПКЛ, выполненная животным без повреждения нервных стволовза счет снижения нейрогенного тонуса прекапиллярного звена оказываетдистантный стимулирующий эффект на микроциркуляцию, продолжительностькоторого меньше чем в условиях нарушенной иннервации.196.Дистантное стимулирующее действие на микроциркуляцию ирегенеративный эффект АТПКЛ ассоциированы с деградацией эпидермисааутотрансплантата и увеличением числа эозинофилов, лимфоцитов, макрофагови фибробластов в составе клеточных популяций его дермы.7.Механизм реализации дистантного стимулирующего действия намикроциркуляцию и регенеративный эффект при АТПКЛ на фоне нейрорафииреализуются за счет стимуляции продукции NТ-3 и VEGF.Практические рекомендации.