Автореферат (1154690), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Подбор частоты иамплитуды стимулирующего тока производился индивидуально для каждогоживотного, с учетом порога болевой чувствительности.Микроциркуляцию на коже над областью АТПКЛ и на коже тыльнойповерхности стопы оперированной конечности исследовали методом ЛДФ сиспользованием анализатора «ЛАКК-ОП» (НПП «Лазма», Россия).Проводилось определение показателя перфузии, нормированных амплитудэндотелиальных (0,01–0,076 Гц), нейрогенных (0,076–0,2 Гц) и миогенных (0,2–0,74 Гц) осцилляций микрокровотока. Для ведения базы данных показателеймикроциркуляции использовалась специально разработанная программа(Свидетельство гос. регистрации № 201561650).Исследование электрофизиологических параметров у животных,осуществляли методом ЭНМГ с помощью электромиографа «Keypoint»(«Alpain Biomed», Дания).
Изучали основные параметры вызванныхпотенциалов (ВП) нерва и мышц: латентный период (ЛП) и амплитуда, а такжепроводили оценку тяжести денервационных процессов в мышцах голени.Определение концентрации нейротрофина-3 (NT-3), VEGF и тяжелогополипептида нейрофиламентов (NEFH) в сыворотке крови осуществляли спомощью твердофазного иммуноферментного анализа на микропланшетном10спектрофотометре «EpochBioTek Instruments» (США) с использованиемнаборов реактивов фирм USCN Life Science Inc (КНР) и RnD Systems (США).Гистологические препараты зоны АТПКЛ, поперечных срезовпроксимального и дистального сегментов оперированного нерва изготавливалипо стандартной методике, окрашивали гематоксилином и эозином (ООО«Биовитрум», Россия).
Исследование препаратов проводили при помощимикроскопа AxioImager Z2 (Carl Zeiss, Германия). На серии поперечных срезовокрашенных микропрепаратов седалищного нерва животных подсчитывалисреднее количество неизмененных, регенерирующих и дегенеративноизмененных нервных волокон в проксимальном и дистальном участках нерва вполе зрения при увеличении х1000.При гистоморфологическом исследовании зоны АТПКЛ оценивалиструктуру трансплантата и окружающих его мягких тканей (дермы игиподермы).
При оценке динамики клеточных популяций дермыаутотрансплантата проводили подсчет количества фибробластов, фиброцитов,нейтрофилов, эозинофилов, моноцитов и макрофагов, а также лимфоцитов вполе зрения при увеличении х400.Статистическуюобработкуполученныхданныхосуществлялинепараметрическими методами при помощи пакета программ Statistica 10.0.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ1. Изменения микроциркуляторных, электронейромиографических иморфологических показателей у крыс при нейрорафии седалищного нерваВ ходе исследования установлено, что при перерезке и нейрорафииседалищного нерва у животных развивается комплекс трофических идвигательных морфофункциональных нарушений.Трофические нарушения у животных данной группы характеризуютсяпоявлением отеков на стопах оперированных конечностей, выпадением волос внижней трети голени, у 60 % крыс на стопе наблюдались изъязвления на коже.С помощью ЛДФ выявлено снижение перфузии кожи оперированнойконечности, максимально выраженное на 14-е сутки (табл.
1), котороесопровождаетсяповышениемнейрогенноготонусаиугнетениемэндотелиальной вазодилататорной функции (табл. 1).11Таблица 1 – Изменения показателей микроциркуляции у животных принейрорафии и различных способах стимуляции регенеративных процессовПоказателиПоказательНормированные амплитуды колебаний, усл. едперфузии,эндотелиальных нейрогенныхмиогенныхГруппыперф.едКонтроль (n=15)11,6(10,1;13,3) 13,01(10,3;17,9)11,3(10,5;12,6) 6,55(5,0;7,9)Группа7 сутки 8,5(6.7;9,4)*7,2 (5,29;9,19)*6,9(4,95;9,32)* 7,4(5,97;9,2)сравнения14 сутки 7,45(6,7;8,5)*9,4(8,34;11,76)*7,1(5,43;7,96)* 6,8(5,27;8,1)(n=15)21 сутки 8,15(7,8;10)*11,7(8,59;13,32)7,64(6,80;8,58)* 7,2(6,5;10,3)АТПКЛ14 сутки 10,3(8,8;12,5)+ 21,8(17,8;23)* +10,29(6,7;15,8)+ 4,9(3,5;5,6)*+(n=15)21 сутки 11,8(9,7;13,1)+ 15,4(9,13;18,9)10,5(6,1; 14,1)+ 6,03(4,9;7,1)+АТПКЛ+ПЭС 14 сутки 9,6(8,4;11,1)*+ 18,7(16,9;22,5)*+ 13,3(10,6;16,7)+ 5,5(3,9;6,1)*+(n=16)21 сутки 10,4(9,4;17,1)+ 18,6(16,3;19,4)*+ 12,4(8,3;14,69)+ 5,1(4,1;6,4)*+Примечания: *- различия по сравнению с контролем статистически значимы (p<0,05);+- различия с группой сравнения в тот же срок наблюдения статистически значимы (p<0,05).Полученные данные характеризуют развитие признаков денервационнойгиперчувствительности сосудов у животных после перерезки и нейрорафииседалищного нерва.ЭНМГ-исследование параметров свидетельствует, что частичноевосстановление проводимости через зону нейрорафии происходит к 21-мсуткам эксперимента.
У животных данной группы М-ответ при стимуляции невыявляется, что свидетельствует об отсутствии синаптических контактоврегенерирующих нервных волокон.Данные исследования гистологических препаратов соответствуютрезультатам функциональных тестов и свидетельствуют, что в оперированномнерве среднее количество нервных волокон значимо снижается в дистальномотделе относительно проксимального. Как в проксимальном, так и вдистальном отделах наблюдается большое количество дистрофическиизмененных нервных волокон (45% и 70% от общего числа волоконсоответственно), при относительно малом числе регенерирующих нервныхволокон (15% и 30% от общего числа волокон соответственно), чтосвидетельствует об одновременно протекающих регенеративно-дегенеративныхпроцессах с преобладанием дегенерации.122.
Влияние аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута надинамикумикроциркуляторных,электронейромиографическихиморфологических показателей у крыс при нейрорафии седалищного нерваУ животных при выполнении АТПКЛ одновременно с нейрорафиейседалищного нерва отмечаются менее выраженные трофические нарушения посравнению с крысами, которым на фоне нейрорафии АТПКЛ не проводилась. Вчастности, только у 20% животных данной группы наблюдались изъязвления накоже стопы. При исследовании состояния микроциркуляции установлено, чтоперфузионный показатель у крыс данной группы на 14-е и 21-е суткиэксперимента не отличается от контрольных значений (табл.
1). Поддержаниеадекватной перфузии под влиянием АТПКЛ после нейрорафии седалищногонерва осуществляется за счет перестройки активных механизмов контролямикроциркуляции – увеличения эндотелиальной вазодилатации, и уменьшениянейрогенного тонуса сосудов (табл. 1).АТПКЛ оказывает влияние на развитие двигательных нарушений приповреждении и нейрорафии седалищного нерва. Согласно ЭНМГ-данным, на21-е сутки у животных данной группы регистрировались низкоамплитудныеневральные потенциалы, составляющие не более 33,7% от нормы, но значимовыше значений группы сравнения (табл. 2).
Важным отличием данной группыявлялось наличие низкоамплитудного мышечного ответа (табл. 2),регистрируемого с икроножной мышцы при стимуляции нерва выше местапересечения.Таблица 2 – Изменения электрофизиологических параметров у животныхна 21-е сутки после нейрорафии при различных способах стимуляциирегенеративных процессовПоказателиГруппаКонтрольЛП нерва(мс)1,8 (1,45; 2,7)Амплитуда ВПнерва (мкв)222,5(199; 297)ЛПМ-ответа (мс)3,5(3,2; 4,85)АмплитудаМ-ответа (мкв)19608(14163; 21372)Группа сравнения11,3(8,5;13,6)*18(12; 30) *--АТПКЛ11,7(9,9; 13,1)*75(43,7; 82,7)*+ 10,6(10,5; 16,9)*65,3(61,9; 124)*АТПКЛ+ПЭС10,9(6,7; 11,4)*66(46,3; 98,7)*+122,6(95,3; 180)*14,4(12,1;15,4)*Примечания: *- различия по сравнению с контролем статистически значимы (p<0,05);+- различия с группой сравнения статистически значимы (p<0,05).13При гистологическом исследовании препаратов проксимального отделаседалищного нерва на 21-е сутки эксперимента установлено, что общееколичество нервных волокон в два раза превышает аналогичный показатель вгруппе сравнения и составляет 96 (72; 112) в поле зрения.
Неизмененныхнервных волокон обнаруживается около 69 (54; 78) в поле зрения, что в 4 разапревышает значения группы с нейрорафией. Также в данной группе отмечаетсязначимое относительно группы сравнения снижение числа дистрофированныхволокон и увеличение числа регенерирующих волокон. В дистальном сегментеседалищного нерва у животных данной группы дистрофированных волоконобнаруживается около 11 (6; 16) в поле зрения, что в два раза меньше, чем вгруппе сравнения.
Количество регенерирующих волокон, напротив,увеличивается и составляет в среднем 55 (42; 76) в поле зрения против 9 (6; 13)в группе сравнения, что свидетельствуют о преобладании регенеративныхпроцессов в нерве над дегенеративными.3. Влияние аутотрансплантации полнослойного кожного лоскута ипрямой электростимуляции на состояние микроциркуляции воперированной конечности и регенеративные процессы в оперированномнерве у крысПри комплексной стимуляции, включающей АТПКЛ и ПЭС, у животныхпосле нейрорафии седалищного нерва в оперированной конечностивыраженные трофические нарушения развиваются только в 15% случаев.Комплексная стимуляция способствует поддержанию перфузионногопоказателя на уровне контрольных значений (табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
