Диссертация (1154338), страница 12
Текст из файла (страница 12)
Азелнидипин также был эффективен приэкспериментальном фиброзе печени [321]. По данным метаанализа местныеинъекции верапамила эффективны в профилактике и лечении келоидных игипертрофических рубцов [507]. Его эффективность сравнима с эффективностьюинъекций кортикостероидов, а безопасность выше. Однако эти результатынеобходимоинтерпретироватьсосторожностью,посколькубольшинствовключенных в анализ исследований не отвечали всем необходимым требованиям.Верапамил был эффективен в клиническом исследованиикак средствопрофилактики гипертрофических и келоидных рубцов после абдомино- имаммопластики [540].
Верапамил используется при болезни Пейрони [311, 355] ипри контрактуре Дюпюитрена [449, 571]. Двойное слепое рандомизированноеконтролируемое исследованиепродемонстрировало эффективность инъекцийверапамила для профилактики рецидивов келоидных рубцов после иссечения[554].63РезюмеВ приведенном выше обзоре литературы описаны возможные объектыфармакологического воздействия при формировании послеоперационных спаек ипослеожоговых рубцов - основные клетки соединительной ткани фибробласты иклетки их микроокружения; межклеточные и клеточно-матриксные механизмы,реализующиеся в процессе избыточного образования соединительной ткани,сопровождающегосяразвитиемфиброзаинарушениемпаренхиматозно-стромальных отношений.Демонстрируется наличие у фибробластов интенсивного кальциевогообмена как фрагмента метаболизма, изменения которого закономерно отражаютсяна функциональном состоянии клеток.
Этот вид обмена веществ в цитоплазме,митохондриях, эндоплазматическом ретикулуме фибробластов протекает сактивным участием кальций-транспортирующих белков, локализованных во всехперечисленных органеллах, а также входящих в структуру наружных мембран.Участие кальция в регуляции основной функции фибробластов – строительствесоединительной ткани и, в частности, продукции коллагена – доказано. Указаназначимость роли Са2+ гомеостаза в регуляции протеостаза, транскрипции генов иклеточных процессов, связанных с дифференцировкой, пролиферацией и гибельюклеток, участвующих в фиброгенезе.Описана группа лекарственных препаратов, способных регулироватьфункцию кальций-транспортирующих белков, а, следовательно, изменяющихинтенсивность прохождения иона через соответствующие каналы и закономерноучаствующих в регуляции функции фибробластов - БМКК.
Приведенынемногочисленные сообщения об их действии на функциональную активностьфибробластов и макрофагов, экспрессию транскрипционного фактора NF-kB,сопровождающуюсяуменьшениемобразованияпослеоперационныхэпидуральных и внутрисуставных спаек, келоидных и гипертрофических рубцов.Определены актуальные области клинического использования антифиброгенногодействияБМККиобоснованацелесообразностьихпримененияв64фармакологическойрегуляцииобразованиясоединительнотканныхпослеоперационных перитонеальных спаек и избыточных (гипертрофических икелоидных) рубцов у пациентов с ожоговой травмой.65ГЛАВА 2МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯРешение поставленных задач требует поиска методологических подходов кизучению наличия у блокаторов медленных кальциевых каналов (БМКК) новыхсвойств - способности к регуляции образования заместительной соединительнойткани на месте повреждения.
При этом, действие данных лекарственных средствна формирование рубцовой ткани может быть описано неким множествомпоказателей, полученных адекватными методами исследования. Последниедолжны обладать значительной разрешающей способностью, дополнять другдруга и нести максимальное количество информации. Методическое построениеэкспериментальной части исследования с разработкой универсальной для разныхвидов животных модели асептического перитонеального спайкообразования ивыявлением факторов формирования избыточного роста соединительной тканипри данной патологии; проведением опытов in vivo и in vitro; изучение, на ихосновании,наличия у БМКК способности к регуляции анаболической ипролиферативнойфункцииперитонеальныхфибробластовиклетокихмикроокружения; с определением наиболее эффективного препарата в даннойгруппе лекарственных средств;использование во всех сериях опытов единогодизайна исследования (рис.1), основой которого является моделированиегемоперитонеума;подбор групп животных разных видов, но одного пола ивозрастной категории; проведение экспериментов в сходных условиях (времясуток, однотипность воздействия); применение плана параллельных групп и66Объект исследованияПеревиваемая культурадермальных фибробластовКрысы (n=277)Крысы с патологическимирубцами кожи (n=106)Кролики (n=64)Модель in vitro:Модель in vitro:Модель in vivo:перевиваемая культура HumanDermal Fibroblasts (n=160)культура активированныхперитонеальных фибробластови макрофагов крысы (n=720)аутогемоперитонеум сисходом вспайкообразованиеОсновнаягруппаГруппасравненияСредстваводные растворы БМККСредствоРазработка оптимальнойлекарственной формыводный раствор верапамилаверапамилдилтиазем0.00005 мл-10.00005 мл-1нифедипин0.00005 мл-10,1 мг/кг0,2 мг/кгМазеваяосноваСредство0,4 мг/кгверапамил (крем антирубцовый)0.0001 мл-1-10.0001 мл-10.0001 млМетоды исследования in vitroкультуральныеNF-kBиммуногистохимическиеМетоды исследования in vivoиммунологическиебиохимическиефункциональныеМетоды исследованияморфологическиеСтатистические методы исследованияРисунок 1.
Дизайн исследования фармакодинамических эффектов БМКК верапамила,дилтиазема и нифедипина, направленных на регуляцию фиброгенезафармацевтические67методапростойрандомизацииприразделенииживотныхнагруппы,математического аппарата обработки материала обеспечивает статистическуюкорректность оценки полученных данных.Анализ клинического материаладополняет полученные в эксперименте сведения, позволяет оценить возможностиэкстраполяции опытных данных на человека, в том числе и для предотвращенияизбыточного образования рубцовой ткани у пострадавших с ожоговой травмой сиспользованием наиболее эффективного в группе БМКК препарата.2.1.
Общая характеристикаэкспериментального и фармацевтического материалаЭкспериментальные исследования проведены на 383 белых крысах-самцах,массой 200 – 240 г. и 64 половозрелых кролика-самца породы Шиншилла массойтела 2500 – 3200г., на 720 первичных культурах перитонеальных фибробластов имакрофагов и на 160перевиваемых культурах дермальных фибробластовчеловека.
Выполнено 1542 эксперимента. Проведены фармакотехнологическиеисследования по разработке оптимального состава антирубцового крема сверапамилом.Экспериментальные исследования проводили на базе ЦНИЛ ГБОУ ВПО«Омская государственная медицинская академия» Министерства здравоохраненияРоссии. Животные, получанные из питомника Института цитологии и генетикиСО РАН (г. Новосибирск), содержались в стандартных условиях вивария ЦНИЛОмГМА на обычном рационе при свободном доступе к воде и пище, в условияхнормального температурного и светового режимов, с соблюдением требованийприказов № 1179 МЗ СССР от. 10.10.1983 г.
и № 267 МЗ РФ от 19.06.2003, атакже требований Европейской конвенции (Страсбург, 1986) по содержанию,кормлению и уходу за подопытными животными, выводу их из эксперимента ипоследующей утилизации. Все серии экспериментов проводились в соответствиис«Правиламипроведенияработсиспользованиемэкспериментальныхживотных» (приказ МЗ РФ №755 от 12.08.77, пункт 5.1). В постановке опытов68руководствовались требованиями Всемирного общества защиты животных(WSPA) и Европейской конвенции по защите экспериментальных животных86/609.
Эвтаназию животных и забор материала осуществляли под эфирнымнаркозом путем декапитации крыс и эмболизации легочной артерии кроликоватмосферным воздухомв соответствии с требованиями методическихрекомендаций по выведению животных из эксперимента «Приемы работы сэкспериментальными животными (Методические рекомендации. М.: МЗ СССР,1989).Спаечный процесс крысам и кроликам моделировался однократныминъекционным внутрибрюшинным введением стерильнойаутокрови согласноразработанному нами способу моделирования внутрибрюшинных спаек (патент2260854 РФ). У крыс спаечный процесс в брюшной полости воспроизводилсяпутем забора крови (мл) из дорсальной хвостовой вены в количестве 1% массытела (грамм), с соблюдением правил асептики, и однократного инъекционноговведения аутокрови, в течение не более чем 20 секунд с момента взятия,вбрюшинную полость через прокол в каудальной трети белой линии живота.
Укроликов аутокровь из расчета 1% массы тела забиралась из краевой вены уха ивводилась внутрибрюшинно аналогичным способом.Моделирование крысам патологических рубцов кожи, соответствующихгипертрофическим икелоидным рубцам кожи человека, проводили поС.В.Логвинову и Е.Г. Арий(2002).
Под ингаляционным масочным наркозомпарами диэтилового эфира (ОАО «Медхимпром») производили иссечениеполнослойного лоскута кожи 5х4 см2 в центре спины в продольном направлении.Края кожного дефекта подшивали к подлежащим мышцам. На 55 суткиэксперимента формировались обширные грубые послеоперационные рубцы.Исследования проводились in vivo на целостном организме и in vitro вкультуреклеток:первичнойкультуреперитонеальныхфибробластовимакрофагов и перевиваемой культуре дермальных фибробластов человека (HumanDermalFibroblasts(Adult)производстваAxolBioscience).Дизайн69экспериментальногоисследованияфармакодинамическихэффектовБМККверапамила, дилтиазема и нифедипина представлен на рис.2. Распределениеживотных по разделам исследования, сериям и группам с указанием видавоздействия количества животных и выполненных экспериментов отражены втабл.2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
