Автореферат (1151567), страница 3
Текст из файла (страница 3)
В собственном веществероговицы наблюдали отёк, лейкоцитарно-фибробластическую инфильтрацию,присутствиебольшогоколичествафибробластовспризнакамибиосинтезирующей активности (обширная цитоплазма, светлое ядро сядрышком), а также неоваскуляризацию в поверхностных слоях основноговещества роговицы (рисунок 3).132Рисунок 3.
Микроморфологическая картина центральной зоны роговицы глаза у кроликаконтрольной группы через 7 суток после нанесения дефекта.1 – эпителиальный пласт, наползающий на соединительнотканный регенерат основноговещества роговицы (2), кровеносный сосуд (3).Толуидиновый синий, об.40, ок.10.Через 14 суток у всех животных, за исключением одной особи, былаобнаружена эпителизация центральной области дефекта. С формированиемрегенерата роговицы,представленного(2-3слоя)истонченнымэпителиальнымпластом.Субэпителиальнорасполагаласьзрелаягрануляционная ткань с признаками умеренной клеточной инфильтрации,содержащая кровеносные сосуды, а под ней — фиброзная ткань с плотноупакованными, параллельно расположенными пучками коллагеновых волокони очагами дезорганизации.
Далее располагались десцеметова мембрана ивнутренний эпителий (рисунок 4 А, Б).10112233А5Б4Рисунок 4. Структурное состояние центральной зоны роговицы кролика контрольной группына 14 сутки после нанесения дефекта.Гематоксилин и эозин, А – об.10, ок.10.; Б – об.40, ок.10.А – общий вид: эпителиальный пласт (1), созревающая грануляционная ткань (2),основное вещество (3).Б, – эпителиальный пласт (1), 2 – созревающая грануляционная ткань (2), очаги дезорганизациистромы (3), десцеметова мембрана (4), внутренний эпителий (5).В лимбальной зоне эпителиальный пласт был сохранен, всубэпителиальной соединительной ткани выявлено расширение сосудовмикроциркуляторного русла и умеренная клеточная инфильтрация (рисунок 5А, Б).112БА2Рисунок 5.
Структурная организация лимбальной зоны роговицыу кролика контрольной группы на 14 сутки наблюдения.Гематоксилин и эозин, А – об.20, ок.10. Б – об.40, ок.10.А – эпителиальный пласт (1), субэпителиальная соединительная ткань (2) с расширеннымисосудами микроциркуляторного русла (стрелки) и признаками выраженной клеточнойинфильтрации.Б – область, пограничная между лимбальной и центральной: расширение сосудов и клеточнаяинфильтрация субэпителиальной зоны.Заживление роговицы глаза кролика при использовании аллогенныхстволовых клеток лимба (лимбальные стволовые клетки – ЛСК)Клиническая картинаНа 3 сутки после введения гомологичных ЛСК у животных былвыраженный блефароспазм, сочетающийся с острым блефаромейбомиитом игиперемия конъюнктивы в зоне введения клеточной суспензии.
Сильныйокулярный дискомфорт наблюдали только в одном случае, у остальныхживотных признаки болезненности и фотофобии отсутствовали. Окрашиваниероговицы флюоресцеином выражено слабо, а степень ее помутнения по шкалеВойно-Ясенецкого составляла от 1 до 4 баллов.11На 7 сутки после введения ЛСК степень выраженности воспаленияпальпебральной конъюнктивы была менее выражена, чем в предыдущие срокинаблюдения, но гиперемия в зоне введения ЛСК сохранялась (рисунок 6 Б, В,стрелки). Явления блефарита, а также степень окулярного дискомфортанивелировались.
Поверхностное окрашивание роговицы флюоресцеиномнаблюдали только у одного животного (рисунок 6 В), а степень её помутненияпо шкале Войно-Ясенецкого составила от 1 до 4 баллов (рисунок 6 А, Б, В).АВБРисунок 6. Макрокартина глаза кроликов после моделирования дефекта и введения суспензииЛСК на 7 сутки наблюдения.А, Б – окулярный дискомфорт не выражен, окрашивание роговицы флюоресцеином отсутствует,видны четкие границы трепанационной зоны, имеет место гиперемия бульбарной конъюнктивыв месте введения клеточной суспензии; В – слабоположительная флюоресцеиновая проба,сильная гиперемия пальпебральной конъюнктивы в зоне введения клеточной суспензии(стрелка)На 14 сутки после введения ЛСК окулярный дискомфорт у всехживотных отсутствовал, гиперемия конъюнктивы и явления блефаритасохранялись у одного животного (рисунок 7 А, Б). Поверхностноеокрашивание роговицы флюоресцеином не выраженно. Границы зонытрепанации были нечёткими, было выявлено лишь центральное помутнениероговицы в виде нубекулы (рисунок 7 А, Б), а степень её помутнения по шкалеВойно-Ясенецкого составила от 0 до 4 баллов (рисунок 7 А, Б, В).АВБРисунок 7.
Клиническая картина глаза кроликов после введения ЛСК на 14 сутки.А, Б – окулярный дискомфорт отсутствует, границы трепанационной зоны размыты, степеньпомутнения по шкале Войно-Ясенецкого 2-4 балла, сохранена воспалительная реакция век(стрелка) и гиперемия конъюнктивы (стрелка); В – окулярный дискомфорт полностьюотсутствует, степень помутнения роговицы по шкале Войно-Ясенецкого 0 баллов.Результаты морфологических исследованийПри морфологическом исследовании области повреждения через 7 сутоквыявлено полное закрытие дефекта роговицы регенератом, имеющим12соединительнотканную и эпителиальную части. В центральной частирегенерата (рисунок 8 А) эпителиальный пласт представлен 3-4 слоямиуплощенных клеток, боуменова мембрана — рыхло упакованными пучкамиколлагеновых волокон с расширенными кровеносными сосудами.
Всобственном веществе роговицы дифференцировалась зрелая грануляционнаяи фиброзная ткань с веретеновидными фибробластами и тонкими пучкамиколлагеновых волокон.В периферической части регенерата (рисунок 8 Б) в эпителиальномпласте количество слоёв возрастало до 8-10, они характеризовалисьпризнаками вертикальной анизоморфии.
Соединительнотканная частьрегенерата представлена тонковолокнистой фиброзной тканью, богатойфибробластами (рисунок 8 А, Б).1123А2БРисунок 8. Структурная организация роговицы кролика после введения ЛСКна 7 сутки наблюдения. Центральная (А) и периферическая (Б) зоны регенерата.Толуидиновый синий, об.40, ок.10.А – эпителиальный пласт (1) тонкий, количество слоев уменьшено. Собственное веществороговицы (2) сформировано плотно упакованными пучками коллагеновых волокон, средикоторых видны фибробласты.Б – эпителиальный пласт с признаками вертикальной анизоморфии (1), уплотнениекомпозиции пучков коллагеновых волокон и увеличение количества фибробластов в областибоуменовой оболочки (2), фиброзная ткань с разнонаправленными пучками коллагеновыхволокон в собственном веществе роговицы (3).Через 14 суток наблюдений выявлено уплотнение и истончениецентральной части роговицы без выраженных признаков отёка.Восстановление эпителиального пласта выражалось в присутствии 5-6 слоёвэпителиоцитов.
Собственное вещество роговицы было сформированофиброзной тканью, в поверхностных слоях которой обнаружен диффузныйклеточный инфильтрат (рисунок 9 А, Б).112Б35А413Рисунок 9. Состояние центральной зоны роговицы кролика на 14 сутки после введения ЛСК.Гематоксилин и эозин, А, Б – об.20, ок.10.1 - эпителиальный пласт, 2 – фиброзная ткань регенерата, 3 – собственное вещество роговицы,4 – десцеметова мембрана, 5 – внутренний эпителий.В области лимба эпителиальный пласт был сохранен, всубэпителиальной рыхлой соединительной ткани обнаружены расширенныекровеносные и лимфатические сосуды, умеренная клеточная инфильтрация. Всобственном веществе роговицы выявлены сосуды микроциркуляторногорусла, незначительный отёк межклеточного вещества и диффузная клеточнаяинфильтрация (рисунок 10).12345Рисунок 10.
Микроморфологическая характеристика лимбальной зоны роговицы у животных на14 сутки после моделирования дефекта и введения суспензии ЛСК.Гематоксилин и эозин. об.20, ок.10.1 - эпителиальный пласт, 2 – субэпителиальная соединительная ткань, 3 – собственное веществороговицы, 4 – десцеметова мембрана, 5 – внутренний эпителий. Стрелками показаныкровеносные сосуды.Таким образом, после трансплантации ЛСК через 7 суток в 100%случаев происходила полная эпителизация дефекта роговицы, в то время какв контрольной группе сохранялся поверхностный дефект, а в 50% –персистирующая эрозия. Через 14 суток в группе ЛСК выявленоформирование по сравнению с контрольной группой более нежного бельмароговицы (5 и 10 баллов по шкале Войно-Ясенецкого, соответственно).
Приэтом степень васкуляризации в группе ЛСК по сравнению с контролем,составила 1 и 3 балла, а выраженность воспалительной реакции – 0 и 1 балл,соответственно.Заживление роговицы глаза кролика при использовании аллогенныхмезенхимных стволовых клеток жировой ткани(ММСК)Клиническая картинаНа 3 сутки после введения ММСК во всех случаях наблюдалигиперемию конъюнктивы в зоне введения клеточной суспензии, у одногоживотного блефароспазм и признаки блефаромейбомиита и окрашиваниероговицы флюоресцеином.
Степень её помутнения по шкале ВойноЯсенецкого составила от 1 до 4 баллов.14На 7 сутки эксперимента в подопытной группе животных, которымвводили гомологичные ММСК, признаки окулярного дискомфортаотсутствовали, вместе с тем, сохранялось незначительное (на 1,5 мм в зонедефекта) окрашивание роговицы флюоресцеином. Степень помутненияроговицы по шкале Войно-Ясенецкого соответствовала 3-5 баллам(рисунок 11).Рисунок 11. Клиническая картина глаза кролика после введения гомо-ММСКна 7 сутки наблюдения.Окулярный дискомфорт, блефароспазм, фотофобия отсутствуют.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
