Диссертация (1150276), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Точностьподдержания температуры ±0,1 ºС; весы электронные лабораторные Leki instrument В2104, 2 класс точности; pH-метр pH-410, Аквилон, Россия; автоматизированный станок KitMillRD 300/420 Originalmind Co., Япония фрезеровочная установка Hitachi Co. Ltd., Япония светодиоды 820 нм: LED 820-01AU, Roithner Laser Technik, Австрия, 314 нм:SETI Sensor Electronic Technology Inc., USA линза для фокусировки (nR = 1,517) BL-05, Edmund Optics, США источник постоянного тока 6146, DC Instruments, Inc., Япония фотоумножительная трубка H10722-20 Hamamtsu Photonics K.K., Япония блок питания фотоумножительной трубки Hamamtsu Photonics K.K., Япония декодер сигналов Graphtec Data Platform GL-7000, Graphtec Co., Япония жидкостной хроматограф Shimadzu LC-20, Shimadzu Co., Киото, Япония),колонка Supelco C18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм) система ВЭЖХ с51комбинированнымквадруполь-времяпролетныммасс-спектрометромсверхвысокого разрешения с ионизацией электроспреем «MaXis» (BrukerDaltonik GmbH, Германия) ЯМР-спектрометр AVANCE III 400 Bruker GmbH, Германия2.2.
Синтез 18-молибдодифосфатa аммонияДля синтеза 18-молибдодифосфата аммония (NH4)6(Р2Мо18O62)∙14Н2О 100 гNa2MoO4∙2H2O растворяли в 400 мл воды, прибавляли 15 мл 85%-ной Н3РО4 и 80мл концентрированной НСl при перемешивании. Образовавшийся раствор желтогоцвета кипятили в колбе с обратным холодильником в течение 8 ч. Далее к растворупри перемешивании добавляли NH4Cl до насыщения и приливали еще 200 млнасыщенного раствора NH4Cl. Из раствора выпадали желтые кристаллы 18молибдодифосфата аммония.
Кристаллы отфильтровывали, растворяли в 100 млводы, прибавляли 400 мл диоксана, что вызывало выпадение аммониевой соли.Продукт отфильтровывали, промывали последовательно смесью диоксана с водой(3:1), диоксаном и эфиром. Выход продукта составлял 25 г [148].Составсинтезированногогетерополикомлексаподтвержден спектрами ЯМР на ядрах(NH4)6Р2Мо18O62∙14Н2ОР.
Спектр (NH4)6(Р2Мо18O62)∙14Н2О в31дейтерированном диметилсульфоксиде имеет один сигнал при -2,46 ppm (Рисунок22), а в дейтерированной воде один сигнал при -1,99 ppm (Рисунок 23). Полученныеданные свидетельствуют о чистоте синтезированного реагента.52Рисунок 22. ЯМР-спектр на ядрах P31 (NH4)6(Р2Мо18O62)∙14Н2О в дейтерированномдиметилсульфоксиде.Рисунок 23. ЯМР-спектр на ядрах P31 (NH4)6(Р2Мо18O62)∙14Н2О в дейтерированнойводе.2.3.
Синтез 4-(2,3,3-триметил-3H-индолий-1-ил)бутан-1-сульфонатаИзвестная методика синтеза 4-(2,3,3-триметил-3H-индолий-1-ил)бутан-1сульфоната [149] была модифицирована, что привело к увеличению выхода53продукта. Так, на первом этапе 3,18 г 2,3,3-триметил-3H-индола (Sigma-Aldrich,США) и 4,08 г 1,4-бутансультона (Sigma-Aldrich, США) нагревали при 120 °C втечение 2 часов в закрытой колбе без растворителя. После охлаждения до 45 °C,смесь промывали ацетоном (100 мл) и перемешивали в течение 3-х часов прикомнатнойтемпературе,послечегообразовывалсярозовыйосадок.Образовавшийся осадок отделяли, промывали ацетоном и высушивали подвакуумом. Выход продукта составил 4,6 г.
Полученный таким образом реагентиспользовали в дальнейших экспериментах без дополнительной очистки.Структурасинтезированного4-(2,3,3-триметил-3H-индолий-1-ил)бутан-1-сульфоната подтверждена данными ЯМР-спектроскопии (Рисунок 24, 25), которыесогласуются с известными литературными данными [150].Согласно полученным ЯМР-спектрам в растворе D2O происходит обменпротонов метильной группы в положении 2 кольца на дейтерии:Об этом свидетельствуют исчезновение сигнала этой метильной группы впротонном спектре ЯМР (Рисунок 24 Б) и проявление ее в виде квинтета вуглеродном спектре (Рисунок 25 Б). В протонном спектре исходного реагента в H2O(Рисунок 24 А) сигнал метильной группы в положении 2 – синглет на 3 протонапри 2,81 м.д.. В протонном спектре в D2O (Рисунок 24 Б) этот сигнал практическиотсутствует (имеется лишь остаточный сигнал с частично незамещенным протоном(СHD2) при 2,73 м.д.). Аналогичная картина наблюдается в углеродных спектрах: врастворе H2O, где нет обмена (вернее протон меняется на протон), сигналметильной группы при 13,5 м.д.
(Рисунок 25 А); в растворе D2O – сигналпревращается в мультиплет при 13,00 м.д., за счет расщепления ядрами дейтерия(Рисунок 25 Б).54Рисунок 23. ЯМР-спектры 4-(2,3,3-триметил-3H-индолий-1-ил)бутан-1-сульфоната на ядрах Н1: А – растворитель Н2О; Б растворитель D2O.55Рисунок 24. ЯМР-спектры 4-(2,3,3-триметил-3H-индолий-1-ил)бутан-1-сульфоната на ядрах С13: А – растворитель Н2О; Б растворитель D2O.562.4. Приготовление растворовПриготовление растворов 18-молибдодифосфата аммонияДля приготовления 5 мМ 18-молибдодифосфата аммония 0,79 г реагентарастворяливэкспериментом.50млдистиллированнойРабочиерастворыводыготовилинепосредственнометодомпередпоследовательногоразбавления.Приготовление растворов гидрохлорида цистеина0,157 г гидрохлорида цистеина (Wako, Япония) растворяли в 100 млдистиллированной воды, для приготовления 0,01 М раствора цистеина.
Растворготовили непосредственно перед экспериментом. Градуировочные растворыготовили методом последовательного разбавления.Приготовление растворов эпинефрина гидрохлорида0,2 г/л раствор эпинефрина гидрохлорида (Sigma-Aldrich, США) готовилирастворением соответствующей навески препарата в 0,01 М HCl непосредственноперед экспериментом.
Рабочие растворы аналитов готовили последовательнымразбавлением 0,2 г/л раствора эпинефрина гидрохлорида в 0,01 М растворе HCl.Приготовление растворов куркумина1 мМ куркумина (Wako, Japan) готовили растворением соответствующейнавески в этаноле (99,5 %, Sigma-Aldrich, США) непосредственно передэкспериментом.Рабочиерастворыготовилиметодомпоследовательногоразбавления деионизированной водой непосредственно перед экспериментом.Приготовление ацетатного буферного раствора (рН=5,0)Для приготовления 100 мл ацетатного буферного раствора (рН=5,0)смешивали 7 мл 2 М раствора ацетата натрия и 3 мл 2 М раствора уксусной кислотыидобавляли90млдистиллированнойводы.рНбуферногорастворакорректировали добавлением 1 М HCl или 1 М NaOH и контролировали с помощьюрН-метра.57Приготовление фосфатного буферного раствора (рН=7,0)Для приготовления фосфатного буферного раствора (pH=7,0) смешивали 0,1М раствор однозамещенного фосфата калия и 0,1 М раствор двузамещенногофосфата натрия в соотношении 1:1.
рН буферного раствора корректировалидобавлением 1 М HCl или 1 М NaOH и контролировали с помощью рН-метра.2.5. Пробоотбор и пробоподготовка биологически активных добавокПредварительную пробоподготовку биологически активных добавок (БАД)для определения цистеина осуществляли следующим образом. Из желатиновойкапсулы извлекали порошкообразное содержимое БАД и высушивали при 100◦C втечение 12 часов, тщательно перетирали в агатовой ступке до полученияоднородного порошка.
Далее навеску полученного порошка (0,1 – 0,2 г) помещалив колбу на 25 мл и доводили до нужного объема дистиллированной водой.Полученный раствор центрифугировали при 5000 оборотов в минуту в течение 15минут, после чего супернатант пропускали через мембранный фильтр (диаметр пор0,45 мкм) для отделения не растворившихся частиц. Полученный растворанализировали методами ЦИА, ПИА и ВЭЖХ.Экстракцию куркумина из образцов проб биологически активных добавоквыполняли согласно методике [151].
Из желатиновой капсулы извлекалипорошкообразное содержимое БАД, высушивали при 100◦C в течение 24 часов,тщательно перетирали в агатовой ступке до получения однородного порошка.Далее навеску полученного порошка (0,04–0,1 г) растворяли в этаноле. Нерастворившиеся частицы удаляли центрифугированием. Прозрачный послецентрифугирования раствор переносили в колбу объемом 50 мл и доводилиэтанолом объем до метки. Аликвоту полученного раствора помещали в мернуюколбу объемом 10 мл и доводили деионизированной водой до метки.
Полученныйраствор анализировали методами ЦИА и ВЭЖХ.58Глава 3. Миниатюризация циклического инжекционногофотометрического анализа3.1. Изготовление мезофлюидного устройства для миниатюризациициклического инжекционного фотометрического анализаНа сегодняшний день для изготовления микро- и мезофлюидных устройствпредложено использовать различные материалы: полимерные, стеклянные,кварцевые, металлические и др. Для изготовления недорогих и многоразовыхустройств предпочтение отдают полимерным материалам, среди которых наиболеечасто используют полиметилметакрилат (ПММА), полидиметилсилоксан иполикарбонат.ДляизготовлениямезофлюидногоустройстваЦИАсфотометрическим детектированием был выбран ПММА, так как этот материалявляется оптически прозрачным в видимом и ближнем ИК-диапазоне спектра,легко поддается механической обработке, полированию и склеиванию.Известны различные технологии изготовления микро- и мезофлюидныхустройствизполимерныхматериалов:фрезерная,техникатеснения,фотолитография и техника химического травления.В данном исследовании использовалась фрезерная технология, котораяпредполагает механическое сверление каналов и отверстий в монолитном блоке споследующей склейкой с покровной пластиной.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
