Диссертация (1150273), страница 13
Текст из файла (страница 13)
При определенииизониазида в моче было изучено несколько серий градуировочных растворовпри разных степенях разбавления от 1 до 0,05.91Таблица 12Составы градуировочных растворов в смесительных камерах и формулы длярасчета концентраций аналита (Сст – концентрация аналита в стандартномрастворе).СмесительнаякамераСостав1Разбавитель,стандартный раствор2Проба, разбавитель,стандартный раствор3Проба, стандартныйраствор, разбавитель4Разбавитель, проба5Стандартный раствор,разбавитель и проба6Стандартный раствор,разбавительОбъемноесоотношениеИнтерпретацияФормулаA4 2 c стA1Ac 2 3 2 c ст1:1:3A6A4c3 2 cст1:1:3A2 A3A3c4 2 cст1,75 : 0,75A5 A4AA4c5 6 2 cст1 : 0,75 : 0,75A5 A4 A11 : 1,51 : 1,5c1 c6 A3A 1 2 c стA2 A3 A6Метод градуировочногографика(интерполяционный), неучитывается влияниематрицыИнтегрированный метод,частично учитываетсявлияние матрицыМетод стандартныхдобавок(экстраполяционный),полностью учитываетсявлияние матрицыСогласно полученным данным (Рисунок 54), при разбавлении пробы болеечем в 10 раз разница между наибольшим и наименьшими значениямиконцентрации изониазида не превышает 5%, и при дальнейшем разбавлениипрактически не изменяется.
Следует отметить, что степень разбавления пробмочи может изменяться и подбираться в условиях проточного анализаиндивидуально.Было исследовано влияние потенциально мешающих ионов, особенновеществ,которыеявляютсямакрокомпонентамивкомбинированныхпрепаратах для лечения тубуркулеза, рифампицина и пиразинамида, иосновных компонентов мочи (мочевины, ЭДТА, аскорбиновой кислоты, виннойкилоты, щавелевой кислоты, PO43-, H2PO4-) на определение аналита. Для этого вмочу, содержащую изониазид, вводили добавки известной концентрацией92ионов PO43-, H2PO4-, мочевины, аскорбиновой кислоты, винной килоты,щавелевой кислоты, рифампицина и пиразинамида.Рисунок 54.
Влияние степени разбавления на результаты определенияизониазида в моче.Анализ приготовленных образцов показал, что мешающее влияние(отличие сигнала от исходного значения больше чем на 5%) не былообнаружено для концентраций, реально присутствующих в моче. Мешающеевлияние на определение изониазида не оказывают: мочевина до 1000-кратногоизбытка, ЭДТА – до 200-кратного избытка, аскорбиновая кислота – до 100кратного избытка, PO43-, H2PO4- – до 2000-кратного избытка, винная ищавелевая кислоты – до 1500-кратного избытка, рифампицина и пиразинамида– до 1200-кратного избытка.Для проверки правильности разработанных методик ЦИА проводилиопределение изониазида в пробах мочи.
В отобранную у добровольцев пробумочивводилидобавкуизониазида.Дляподтвержденияправильностиполученных результатов параллельно проводили анализ при помощи известнойметодикиВЭЖХ[166].Результатыопределенияизониазидавмоче93представленывтаблице13.Правильностьполученныхрезультатовразработанными методами подтверждена методом ВЭЖХ. Результаты былисравнены с помощью F- и t-тестов. Полученные F-значения ≤ 6,4 указывают нанезначительное различие в величинах стандартных отклонений, а полученныеt-значения ≤ 2,78 указывают на то, что нет статистически значимого различиямежду результатами, полученными при помощи методик ЦИА и ВЭЖХ.Таблица 13Результаты определения изониазида в пробах мочи(n = 5, P = 0,95, Fкр = 6,4, tкр = 2,78).Проба123Найдено изониазида в моче,мкМЦИАВЭЖХ4,4±0,14,2±0,115,0±0,515,3±0,425,0±0,824,6±0,6Введеноизониазида,мкМ4,51525АналитическиеиметрологическиеF-значениеt-значение3,14,42,52,11,51,0характеристикиразработаннойметодики приведены в таблице 14.
Предложенная схема анализа может бытьиспользована для спектрофотометрического определения других аналитов вбиологических жидкостях. Следует отметить, что впервые разработанапроточная методика определения изониазида. Найденные методическиерешения позволяют сократить расходы пробы и реагентов по сравнению с ПИАи SIA в 16 и 2 раза соответственно раз.
Кроме того, удалось упростить схемыon-line разбавления проб и введения добавок.Сравнениеинструментальнойаналитическихсхемыхарактеристикпробоподготовкидляразработаннойанализановойбиологическихжидкостей, включающая метод комбинированных градуировок и схемумультикоммутационного ЦИА, с комбинированными методами на принципахПИА, SIA и НПА представлены в таблице 15.Найденные методическиерешения позволяют сократить расходы пробы и реагентов по сравнению с ПИА94и SIA в 16 и 2 раза соответственно. Кроме того, удалось упростить схемы online разбавления проб и введения добавок.Таблица 14Аналитические характеристики методики определения изониазида в моче.Диапазон определяемых10-6 – 10-4концентраций, МКоэффициент корреляции, r20,999Предел обнаружения, мМ0,3СКО (n= 10), %5,0Время анализа, мин12Таблица 15Сравнение аналитических характеристик комбинированных методов,включающих метод комбинированных градуировок, на принципах ПИА, SIA иНПА и ЦИА.Проточный метод анализаПараметрЧисло измеряемыханалитическихсигналовЧислоградуировочныхзависимостейЧисло результатованализаВремя анализа,минОбъем пробы, млНПА [119]ПИА [120]SIA [122]ЦИА77774444666684361210810,5Сравнение аналитических характеристик разработанной методики сизвестными методиками определения изониазида в биологических жидкостях илекарственных препаратах представлено в таблице 16.
Из этих данных можно95сделать вывод, что разработанная методика не уступает по пределуобнаружениясуществующимавтоматизированныхметодикам.Следуетспектрофотометрическихотметитьаналоговотсутствиеразработаннойметодики.Таблица 16Аналитические характеристики методик определения изониазида в биологическихжидкостях и лекарственных веществах.МетодопределенияПробоподготовкаАвтомати-зированаВЭЖХЖидкостнаяэкстракцияНетВЭЖХРазбавлениеНетВЭЖХКЭ ХЛКЭ ХЛСФТвердофазная экстракцияРазбавлениеРазбавлениеРазбавлениеНетНетДаНетАнализируемыйобъектМоча,кровьМоча,кровьМоча,кровьКровь, ЛВКровь, ЛВМоча, ЛВДиапазонопределяемыхконцентраций,мкМПО, мкМСсылка1,5-7500,15[166]12-1200-[167]1,5-6-[168]4-14004-8000,5-3152,12,80,3[169][170][171]КСФРазбавление НетЛВ10-1001[172]СФРазбавление НетЛВ2,1-251,8[173]СФРазбавление НетЛВ0,7-1000,35[174]СФРазбавление НетЛВ7-853,5[175]СФРазбавление НетЛВ14-407[176]ХЛРазбавление НетЛВ50-50017,5[177]ХЛРазбавление ДаЛВ10-805[178]ХЛРазбавление НетЛВ10-10002,7[179]ХЛРазбавление ДаМоча0,5-200,2[180]ХЛРазбавление ДаЛВ80-100042[181]ХЛРазбавление ДаЛВ200-800070[182]ХЛРазбавление ДаЛВ1-2000,2[183]ФРазбавление ДаЛВ0,3[184]ВАРазбавление НетМоча50-110017[185]ЦИАМКГДаМоча1-1000,3[186]ВЭЖХ – высокоэффективная жидкостная хроматография, КЭ ХЛ – капиллярныйэлектрофорез с хемилюминесценцией, СФ – спектрофотометрия, КСП – кинетическаяспектрофотометрия, ХЛ – хемилюминесценция, Ф – флуориметрия, ВА – вольтамперометрия,ЦИА – циклический инжекционный анализ.96Выводы•Разработаны схемы циклического инжекционного анализа слюны,включающие дериватизацию аналитов с последующим микроэкстракционнымвыделениемиконцентрированиемдеривативовпридиспергированииэкстрагента полярным растворителем и газовой фазой, реализованные вметодиках определения антипирина в слюне.•Выбраны условия микроэкстракционного выделения и концентрирования4-нитрозоантипирина из проб слюны с диспергированием экстрагентаполярным растворителем и газовой фазой.•Разработана схема циклического инжекционного анализа, включающаякапельное микроэкстракционное выделение и концентрирование аналитов,реализованная в методике потенциометрического определения кофеина вслюне.•Представленыградуировоккрезультатыусловиямадаптациициклическогометодакомбинированныхинжекционногоанализа,продемонстрированные на примере методики определения изониазида в моче.•Обоснованы условия стабилизации комплекса изониазида с метаванадат-ионами в присутствии цитрат-ионов в кислой среде и возможности егоиспользования в качестве аналитической формы при спектрофотометрическомопределении изониазида в моче.•Представленырезультатыреальных объектах анализа.испытанийразработанныхметодикна97Принятые условные сокращения и обозначенияЦИА – циклический инжекционный анализЖМЭ – жидкостная микроэкстракцияМКГ – метод комбинированных градуировокВЭЖХ – высокоэффективная жидкостная хроматографияГХ – газовая хроматографияМС – масс спектрометрияКЭ – капиллярный электрофорезСФ – спектрофотометрияААС – атомная адсорбционная спектрометрияМЭДЭ – микроэкстракция с диспергированием экстрагентаЭИП – экстрагент с изменяемой полярностьюSIA – последовательный инжекционный анализПДКА – пирролидиндитиокарбамат аммонияДДФА – диэтилдитиофосфат аммонияНПА – непрерывный проточный анализПИА – проточно-инжекционный анализМО – микросомальные оксидазыСКО – среднеквадратичное отклонениеПО – предел обнаруженияМЭКХ – мицеллярная электрокинетическая капиллярная хроматографияЭДС – электродвижущая силаВА – вольтамперометрияЦВА – циклическая вольтамперометрияNAT – N-ацетилтрансферазаМВА – метаванадат аммонияСК – смесительная камераХЛ – хемилюминесценцияФ – флуоресценция98Список литературы1.
Крылов, В.А. Жидкофазное микроэкстракционное концентрированиепримесей / В.А. Крылов, А.В. Крылов, П.В. Мосягин, Ю.О. Маткивская // ЖАХ.– 2011. – 66. – C. 341-360.2. Мозжухин, А.В. Циклический инжекционный анализ – новый методпроточного анализа / А.В. Мозжухин, А.Л. Москвин, Л.Н. Москвин // ЖАХ. –2007. – 62. – С.527-531.3. Kościelniak, P. The Integrated Calibration Method – Comparison of VariousFlow Approaches / P. Kościelniak, M.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
