Диссертация (1141406), страница 13

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 13)

Проведено сравнительное изучение флавоноидов почек и листьевчерной смородины. Методом ВЭЖХ в почках установлено 4 флавоноида, изних 2 производных кверцетина и 2 производных мирицетина, в листьях черной смородины содержится 2 производных кверцетина и 2 производныхкемпферола, производные кверцетина, выделенные из почек и листьев похимическомустроениюсовпадают:кверцетин-3-O-[6-O-малонил-β-D-глюкопиранозид], кверцетин-3-O-D-галактопиранозид (гиперозид), мирицетин-3-O-[6-O-малоноил-β-D-глюкопиранозид],мирицетин-3-O-β-D-глюкуронид;: кверцетин-3-O-[6-O-малонил-β-D-глюкопиранозид], кверцетин3-O-D-галактопиранозид(гиперозид),кемферол-3-O-[6-O-малоноил-β-D-глюкопиранозид], кемферол-3-O-D-галактопиранозид.98Глава 5.

РАЗРАБОТКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА СЫРЬЯ ИНАСТОЕКГОМЕОПАТИЧЕСКИХМАТРИЧНЫХСМОРОДИНЫЧЕРНОЙ5.1. Стандартизация сырья и разработка проектов НД на свежие ивысушенные листья смородины черной5.1.1. Определение числовых показателей и подлинностиВ качестве сырья для настойки гомеопатической матричной были использованы свежие и высушенные листья смородины черной. Исследованияпроводились по показателям, включенным в проекты ФС на сырье: «Внешние признаки», «Микроскопия», «Подлинность», «Числовые показатели»,«Количественное определение», «Микробиологическая чистота», «Упаковка», «Тяжелые металлы», «Радиоактивность», «Остаточные количества пестицидов», «Упаковка, маркировка и транспортирование», «Хранение».Микроскопический анализ проводили в соответствии с указанием статьи«Техника микробиологического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья» (ГФ ХI, вып.

1, с. 277). Из аналитической пробы сырья готовили микропрепараты по методике приготовления микропрепаратов из цельного растительного сырья (ГФ ХI, вып. 1, с. 278). Готовыепрепараты изучали под микроскопом МБИ – 3 (при увеличении на х 125, х200) результаты фиксировали в виде микрофотографий. К разделу «Микроскопия» приложены фотографии микропрепаратов. Результаты исследованияприведены в Главе 3.Определение влажности сырья проводили по методике ГФ ХI, вып. 1, с.285. Для установления золы общей и золы нерастворимой в 10 % растворекислоты хлористоводородной использовали методику ГФ ХI, вып. 1, с. 24.Содержание примесей в сырье определяли в соответствии с методикой ГФ ХI, вып. 1, с.

276.99Полученные результаты представлены в табл. 16, 17.Таблица 16Содержание влажности, общей золы, золы нерастворимой в 10 %растворе кислоты хлористоводородной, органические и минеральныепримеси в свежих листьях смородины чернойСерияВлажность, %Золаобщая,%Зола нерастворимая в 10 % кислотехлористоводородной, %Органические примеси, %Минеральные примеси, %1234565,0067,4268,2663,7165,003,214,512,434,564,230,190,040,040,130,040,310,270,330,410,290,400,340,290,350,38Из табл. 16 видно, что норму влажности для свежих листьев можноустановить не менее 60,0 %, зола не должна превышать 10 %, зола нерастворимая в 10 % раствора кислоты хлористоводородной – не более 0,5 %, органических примесей – не более 0,5 %, минеральных примесей – не более 0,5%.Таблица 17Содержание влажности, общей золы, золы нерастворимой в 10 %растворе кислоты хлористоводородной, органические и минеральныепримеси в высушенном сырье смородины чернойСерия Влажность, ЗолаЗола нерастворимая Органические Минеральные%общая, в 10 % кислоте хлопримеси, %примеси, %%ристоводородной, %19,108,340,10,310,40210,0413,60,540,270,34314,1011,740,420,330,29412,5211,050,200,410,35511,7311,910,110,290,38На основании экспериментальных данных установлены нормы для высушенных листев смородины черной: влажность - не более 15,0 %, зола не100должна превышать 14 %, зола нерастворимая в 10 % кислоте хлористоводородной - не более 1,0 %, органических примесей - не более 0,5 %, минеральных примесей – не более 0,5 %.Флавоноиды являются одним из основных действующих веществ сырьясмородины, в связи с этим целью данного исследования было: разработка методик качественного и количественного определения флавоноидов и установление их количественного содержания в листьях и почках черной смородины.Для определения подлинности использовалиреакцию наобщеизвестную качественнуюналичие флавоноидов с порошком магния или цинка в присутствиихлористоводородной концентрированной кислоты и метод ТСХ.ПодлинностьМетодикаСвежие листья смородины чернойАналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц 5 мм.

Около 4,3 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в круглодоннуюколбу вместимостью 250 мл, прибавляют 60 мл 70 % этанола и нагревают накипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 45 мин. Послеохлаждения до комнатной температуры фильтруют через бумажный фильтр вмерную колбу вместимостью 100 мл. В колбу прибавляют 40 мл 70 % этанола, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают в течение 15 мин.После охлаждения извлечение фильтруют через тот же фильтр в ту же мерную колбу. Объем раствора в колбе доводят 70 % этанолом до метки и тщательно перемешивают (раствор А).Высушенные листья смородины чернойАналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц проходящих сквозь сито по ТУ 23.2.2068-89 с отверстиями диаметром 2 мм.Около 2 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 60 мл 70 % этанола и нагревают на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 45101мин.

После охлаждения до комнатной температуры фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. В колбу с сырьем прибавляют 40 мл 70 % этанола, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают в течение 15 мин. После охлаждения извлечение фильтруют черезтот же фильтр в ту же мерную колбу. Объем раствора в колбе доводят 70 %этанолом до метки и тщательно перемешивают (раствор А).20 мл раствора А помещают в выпарительную чашку и упаривают накипящей водяной бане до удаления запаха спирта. Остаток разбавляют водойдо 30 мл, переносят в делительную воронку вместимостью 100 мл, прибавляют 20 мл н-бутанола и встряхивают в течение 10 мин. Водный (нижний)слой отбрасывают, бутанольное извлечение переносят в круглодонную колбуи упаривают на горячей водяной бане под вакуумом досуха.

Сухой остатокрастворяют в 2 мл 70 % этанола (раствор Б).Приготовление раствора СО кверцетина10 мг кверцетина растворяют в 20 мл этанола 96%.1. К 0,5 мл раствора А прибавляют 0,1 г порошка магния или цинка и0,2 мл кислоты хлористоводородной концентрированной постепенно образуется малиновое окрашивание (флавоноиды).2. На линию старта аналитической хроматографической пластинки сослоем силикагеля на алюминиевой основе размером 10×15 см наносят по 10мкл СО кверцетина и 30 мкл раствора Б.

Пластинку с нанесенными пробамипомещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 30 мин смесьюрастворителей н-бутанол - уксусная кислота ледяная - вода (40:10:20), хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет 1112 см, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе до удаления следоврастворителей, опрыскивают 2 % спиртовым раствором алюминия хлорида инагревают в сушильном шкафу при температуре 100-105 0С в течение 5 мин.На хроматограмме СО кверцетина должна обнаруживаться зона желтозеленого цвета с Rf около 0,74.102На хроматограмме испытуемого раствора Б должны обнаруживатьсязоны желто-зеленого цвета с Rs 1,0, 0,79, 0,64 и 0,51 (по кверцетину).Хроматограмма представлена на рис.

37.▲▲12Рис. 37. ТСХ извлечения из листьев смородины черной1 – извлечение из листьев черной смородины; 2 – 0,05 % растворкверцетина в этаноле 96 %.5.1.2. Количественное определение флавоноидовДля количественного определения флавоноидов нами применен спектрофотоколориметрический метод после проведения реакции комплексообразования с алюминия хлоридом, который вызывает батохромный сдвиг 1полосы поглощения флавоноидов с 330-350 нм до 390-412 нм.Это позволяет применять в качестве контроля испытуемый раствор безреактива и тем самым исключить влияние окрашенных сопутствующих веществ. Для проведения более воспроизводимых результатов реакцию комплексообразования проводят в среде 55 – 60 % этанола.103В качестве стандартного вещества выбран рутин, дифференциальныйспектр поглощения которого с алюминия хлоридом совпадает с дифференциальным спектром поглощения флавоноидов листьев черной смородины (рис.38).Оптимальными условиями экстракции являются: измельченность сырья 2 мм (для высушенного сырья) и 5 мм (для свежего сырья); экстрагент 70% этанол; соотношение сырья и экстрагента 1:50 (для высушенного сырья) и2:50 (для свежего сырья); извлечение на кипящей водяной бане с обратнымхолодильником в течение 45 мин (первое извлечение) и 15 мин (второе извлечение).Методика.

Характеристики

Список файлов диссертации