Автореферат (1141403), страница 4
Текст из файла (страница 4)
1. Верхний эпидермис листа G. woronowii (1) и G. nivalis (2), 400×.12Рис. 2. Нижний эпидермис листа G. woronowii (1) и G. nivalis (2), 400×.12Рис. 3. Поперечный срез запасающей чешуи G. woronowii (1) и G. nivalis (2),окрашивание раствором Люголя, 100×.12кзкзРис. 4. Клетки паренхимы запасающей чешуи с крахмальными зёрнами (КЗ)G. woronowii (1) и G. nivalis (2), 400×.15Изучение БАС ГомЛРС и НГМ двух видов подснежниковДанные по компонентному составу и содержанию основных групп БАС двух видовподснежников представлены в таблицах 3 и 4.Изучение БАС ГомЛРС двух видов подснежниковВ ходе анализа АА ГомЛРС двух видов подснежников установлено, что общимипреобладающими АА являются тацеттин и ликорин.
Для ГомЛРС G. woronowiiхарактерными являются АА галантаминового типа (галантамин); для G. nivalis –нарциклазиновые (трисферидин, исмин) и гемантаминовые (дигидрогемантидин).Флавоноидный профиль ГомЛРС двух видов подснежников представлен гликозидамикверцетина. Для G. woronowii установлено также присутствие гликозидов изорамнетина сгалактозой и глюкозой в углеводной части, а для G. nivalis биозидов кемпферола. Средипроизводных ГКК в ГомЛРС G. woronowii обнаружены неохлорогеновая, хлорогеновая икриптохлорогеновая кислоты, в ГомЛРС G.
nivalis неохлорогеновая кислота отсутствует. Всоставе ОК G. woronowii и G. nivalis обнаружено три соединения: янтарная, яблочная ищавелевая кислоты. В аминокислотный состав ГомЛРС G. woronowii и G. nivalis входит20 аминокислот, в том числе 8 незаменимых. В наибольшем количестве содержатсязаменимые аминокислоты: аспартат, глутамат и аргинин. В ГомЛРС G. nivalis такжеобнаружено большое количество гистидина. В профиле свободных углеводов подснежниковотмечены глюкоза, фруктоза, сахароза, а связанных – глюкоза, галактоза, арабиноза, ксилоза,манноза.
Основными элементами ГомЛРС G. woronowii и G. nivalis являются: K, Ca, P, Cl, S,Mg, Na, Al.Изучение БАС НГМ двух видов подснежниковМетодом зонального КЭ определены основные катионы в НГМ G. woronowii G.nivalis:K+,Na+,Al3+, Mg2+,Ca2+.ПрофильАА,флавоноидов,органическихигидроксикоричных кислот, аминокислот, углеводов ГомЛРС и НГМ аналогичен.При оценке безопасности установлено, что содержание тяжелых металлов и мышьякав исследуемом ГомЛРС и НГМ двух видов подснежников соответствует требованиямдействующей нормативной документации.Из таблицы 4 видно, что в НГМ G.
woronowii и G. nivalis переходят все группы БАС,входящие в состав ГомЛРС. Таким образом, НГМ является комплексным препаратом,фармакотерапевтический эффект которого определяется всей суммой БАС.16Таблица 3Компонентный состав и содержание БАС ГомЛРС, НГМ G. woronowii и G. nivalisGalanthus woronowiiГомЛРС1галантамин, тацеттин,галантин, ликорин, (1α,2β)9,10-диметокси-3,12дидегидро-галантан-1,2диолGalanthus nivalisНГМГомЛРС23АМАРИЛЛИСОВЫЕ АЛКАЛОИДЫ (АА)тацеттин, ликорин,галантамин, тацеттин,трисферидин, исмин,галантин, ликорин,6α-дезокси-6-метокси2,4-дидегидро-2кривеллин,десгидрокси-ликорин.11-гидрокси-виттатин,дигидро-гемантидин,дигидроэпината-лензин,3-эпимарконин, микелалбинНГМ4тацеттин, ликорин,6α-деокси-тацеттин,6α-дезокси-6-метоксикривеллин, микелалбинФЛАВОНОИДЫгиперозид, кверцетин,кверцетин-3-галактозилкверцетин-3-галактозилизорамнетин (или(1→6)-галактозид (или(1→6)-галактозидрамнетин), изорамнетин- кверцетин-3-O(кверцетин-3-OO-софорозид,софорозид), кемпферол-3софорозид), кемпферол-3изорамнетин-3-Oгалактозил-(1→6)галактозил-(1→6)галактозидгалактозид (илигалактозид (кемпферол-3кемпферол-3-OO-софорозид)софорозид)Кверцетин,%0,606±0,0080,075±0,00470,252±0,0090,029±0,0026Изорамнетин,%Кемпферол, %0,345±0,0050,043±0,00280,172±0,0060,011±0,0009ГИДРОКСИКОРИЧНЫЕ КИСЛОТЫ (ГКК)Неохлорогеновая51,7±4,1 мг/100 г3,78±0,30 мг/100 млХлорогеновая24,6±2,0 мг/100 г1,80±0,14 мг/100 мл58,2±4,7 мг/100 г3,04±0,24 мг/100 млКриптохлорогеновая7,8±0,6 мг/100 г0,86±0,07 мг/100 мл3,8±0,3 мг/100 г0,13±0,01 мг/100 млОРГАНИЧЕСКИЕ КИСЛОТЫ (ОК)Янтарная195,2±1,2 мг/100 г61,19±0,81 мг/100 мл334,7±2,3 мг/100 г64,25±0,85 мг/100 млЯблочная29,3±0,8 мг/100 г22,71±0,74 мг/100 мл42,4±1,8 мг/100 г32,17±0,68 мг/100 млЩавелевая13,2±0,4 мг/100 г2,94±0,19 мг/100 мл28,0±0,6 мг/100 г28,47±0,26 мг/100 млАМИНОКИСЛОТЫ (АК)Asp (0,57%) > Glu (0,31%) > Asp (0,071%) > Glu Asp (0,35%)> Glu (0,31%)> Asp (0,044%), > GluArg (0,20%) > Leu > Lys > (0,050%) > Arg (0,017%) His (0,30%) > Arg0,29% > (0,033%) > Arg (0,031%)>Ala > Pro > Val > Ser > Phe > > Ala > Leu > Ser > Lys > Leu > Lys > Ala > Gly > Leu > Pro > Ala > Ser > LysGly > Ile > Thr > His > Met > Pro > Gly > OH-Lys > Thr Val > Ser > Pro > Ile > Phe > OH-Lys > Gly > Thr > ValOHLys > Tyr > OHPro > Cys > Val > Phe > Ile > OH- > Thr > OHLys > Tyr > Met > Ile > Phe > His > Met >> OrnPro > His > Met > Tyr > > OHPro > Cys > OrnTyr > OH-Pro > Orn > CysOrn > CysУГЛЕВОДЫСвободные углеводы,%фруктоза (0,135),фруктоза (0,023),фруктоза (0,215),фруктоза (0,028),глюкоза (0,237),глюкоза (0,025),глюкоза (0,175),глюкоза (0,034),сахароза (0,103)сахароза (0,003)сахароза (0,058)сахароза (0,001)Связанные углеводы,%арабиноза (0,015), ксилозаглюкоза (0,177),арабиноза (0,046), ксилоза глюкоза (0,146), галактоза(0,038), глюкоза (1,455),галактоза (0,014)(0,040), глюкоза (1,234),(0,012), манноза (0,005)галактоза (0,166), маннозагалактоза (0,264), манноза(0,027)(0,025)гиперозид, кверцетин-3галактозил-(1→6)-галактозид(или кверцетин-O-софорозид),изорамнетин-3-галактозил(1→6)-галактозид (илиизорамнетин-O-софорозид),изорамнетин-3-галактозид (илиизорамнетин-3-глюкозид)17Продолжение таблицы 31K (1,301%) > Ca (0,844%) > P (0,273%) >Cl (0,205 %) > S (0,175 %) > Mg (0,111%)> Si (0,0481%) > Al (0,016%) > Na(0,0127%) > Fe (0,0113%) > Mn (0,0015%)> Zn (47,7 ppm) > Sr (14,9 ppm) > Ba (11,9ppm) > Cu (8,4 ppm) > Ti (6,3 ppm) > Pb (< 3 ppm) > Cr (< 2 ppm) > Rb (< 2 ppm) >Ni (< 1,5 ppm) > Zr (< 1 ppm).ЭЛЕМЕНТНЫЙ СОСТАВ23K+ (828,3 ppm) K (1,709 %) > P (0,402 %) > Ca (0,383 %) >> Na+ (67,3 Cl (0,279 %) > S (0,162 %) > Mg (0,114 %) >ppm) > Al3+ Si (0,0378 %) > Na (0,0203 %) > Fe (0,0111(65,4 ppm) > %) > Al (0,0062 %) > Mn (0,0014 %) > ZnMg2+(43,4 (46,3 ppm) > Sr (18,2 ppm) > Rb (17,7 ppm) >ppm) > Ca2+ Ba (12,9 ppm) > Cu (6,6 ppm) > Ti (4 ppm) >(21,4 ppm)Pb (< 3 ppm) > Cr (< 2 ppm) > Ni (< 1,5 ppm)> Zr (< 1 ppm).K+ppm)(69,6Na+ppm)(27,4Ca2+ppm)4(867,3> Mg2+ppm) >(53,5> Al3+ppm) >(26,2Таблица 4Суммарное содержание групп БАС в ГомЛРС, НГМ G.
woronowii и G. nivalisСодержание, %Группа БАСААФлавоноидыГККОКАКСвязанные углеводыСвободные углеводыПолисахаридыГомЛРСG.woronowii0,0551,4590,0840,2381,8921,7010,4751,952НГМG.nivalis0,0200,5290,0620,4052,7831,6090,4482,370G.woronowii0,0110,1180,0060,0860,2040,1910,0510,231G.nivalis0,0040,0400,0030,1240,2080,1630,0630,282Изучение биологической активности НГМ и их разведенийНами изучалось влияние НГМ, гомеопатических разведений (D1-D12, С1-C3) и СОгалантамина и ликорина на жизнеспособность клеток линий HeLa и Fet MSC.
Стандарты ААв концентрациях 1 и 0,5 мг/мл оказывают влияние на жизнеспособность клеток обоих линий.Клетки HeLa и Fet MSC наиболее чувствительны к ликорину. Галантамин практически неоказывает цитотоксических эффектов на клетки линии Fet MSC. Цитотоксические эффектыликорина несколько более выражены на культуре опухолевых клеток линии HeLa, нежели налиниинормальныхклетокFetMSC.Установлено,чтонаиболеевыраженнойцитотоксической активностью обладают сами настойки и их гомеопатические разведенияD1, D2, С1 G.
woronowii и G. nivalis. Таким образом, изученные образцы НГМ и разведенийгомеопатических двух видов подснежников оказывают цитотоксические эффекты наопухолевые клетки HeLa и нормальные клетки Fet MSC. Цитостатические эффекты болеевыражены у НГМ и разведений G. nivalis, цитостатическая активность G. woronowiiнесколько ниже.
На основании полученных экспериментальных данных можно сделатьзаключение о том, что биологическая активность двух видов подснежников различается засчёт различного компонентного состава АА.Разработка и валидация ВЭЖХ-УФ методики количественного определения ААОптимизированы условия разделения АА в условиях хроматографии гидрофильныхвзаимодействий на колонке С18 с поверхностно-пористым сорбентом (непривитым силикагелем) с использованием изократического элюирования ПФ (ацетонитрил – 20 Ммоль/л р-р18ацетата аммония водн., 9:1).
ВЭЖХ-УФ хроматограммы представлены на рис. 5.Идентификацию пиков АА проводили с использованием МС-детектора (дополнительноподключали систему LC/MSD Trap SL с МСД 1946А (Agilent Technologies, США)).АБ112 32 34Рис. 5. ВЭЖХ-УФ (HILIC) хроматограмма (ДМД, λ= 290 нм) извлечения ГомЛРСG. woronowii(А) и ГомЛРС G. nivalis (Б). 1 – тацеттин; 2 – галантин; 3 – ликорин; 4 – галантамин.Разработана ВЭЖХ-методика с УФ-детектированием для идентификации и количественного определения АА в ГомЛРС и НГМ G. woronowii и G. nivalis.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
