Автореферат (1141403), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Статистическую обработку результатов проводили в соответствии с требованиямиГФ XIII изд. с использованием ПО «Microsoft Office Excel 2010».Достоверность научных положений и выводов Выводы, научные положения ирезультаты основаны на большом объёме экспериментальных исследований, подкрепленыисчерпывающими доводами и логически вытекают из результатов экспериментов. В работеприменялся комплекс сертифицированного современного оборудования с действующимисвидетельствами о поверке.
Методики, разработанные в ходе работы, были валидированы,6что позволило получить достоверные и воспроизводимые результаты. Экспертная оценкаподтвердила достоверность первичных материалов. В работе также исследован максимальнодоступный объём литературных научных источников, как зарубежных, так и отечественныхавторов.Апробация результатов исследования Апробация работы состоялась на научнойконференции кафедры фармакогнозии ФГАОУ ВО Первый МГМУ им.
И.М. СеченоваМинздрава России (Сеченовский Университет) (18 апреля 2017 г., Москва).Основные положения и результаты исследований доложены на: XXV, XXVI, XXVIIМосковской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатическогометода в современной медицине» (Москва, 2015, 2016, 2017 гг.), III, IV, V научнопрактической конференции «Современные аспекты использования растительного сырья исырья природного происхождения в медицине» (Москва, 2015, 2016, 2017 гг.), на 20-омМеждународном Конгрессе «Фитофарм 2016» (Санкт-Петербург, 2016 г.), научнопрактической конференции, посвящённой 70-летию Ботанического сада «Лекарственныерастения Ботанического сада» (Москва, 2016 г.).Личный вклад автора Автору принадлежит первостепенная роль в выборе объекта инаправленияисследования,постановкецелиирешениизадач,проведенииэкспериментальной работы, обобщении полученных результатов, статистической обработкеи анализе данных. Весь объем экспериментальной работы выполнен автором самостоятельно.
Автором лично проведена разработка, валидация методик определения АА вГомЛРСиНГМподснежниковметодомВЭЖХ-УФврежимегидрофильныхвзаимодействий. Вклад автора является определяющим на всех этапах проводимогоисследования: начиная от постановки цели и задач до их практической реализации,обсуждения результатов исследования в научных публикациях, выступлениях с докладом инепосредственного внедрения в практику.ВнедрениерезультатовисследованияРазработаныпроектынормативнойдокументации для включения в ГФ РФ: «Подснежник Воронова растения целые свежие –Galanthus woronowii planta tota recens», «Galanthus woronowii, Galanthus – Настойкагомеопатическая матричная», «Подснежник белоснежный растения целые свежие – Galanthusnivalis planta tota recens», «Galanthus nivalis, Galanthus – Настойка гомеопатическаяматричная».
Проекты НД переданы для утверждения в ФГБУ «Научный центр экспертизысредств медицинского применения» в установленном порядке (Сопроводительное письмо от13.12.16, Вх. № 19972). Результаты диссертационного исследования используются в учебномпроцессе кафедры фармакогнозии ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова7Минздрава России (Сеченовский Университет) (акт внедрения в учебный процесс ФГБОУВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России от 07. 12. 2016).Соответствие диссертации паспорту научной специальности Научные положения,изложенные в диссертационной работе, соответствуют формуле паспорта специальности14.04.02 – «Фармацевтическая химия, фармакогнозия», а именно пунктам 2, 3, 6 областейисследования.Связь исследования с проблемным планом фармацевтической науки Выполнениедиссертационной работы проводилось в рамках плана и в соответствии с тематикой научноисследовательской работы на кафедре фармакогнозии ФГАОУ ВО Первый МГМУ им.
И.М.Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) по теме: «Совершенствованиеобразовательныхтехнологийдодипломногоипоследипломногомедицинскогоифармацевтического образования» (номер государственной регистрации 01.2.011.68237).Объём и структура диссертации Диссертация изложена на 255 страницах, включаяприложения (основной текст 207 стр.), машинописного текста и состоит из введения, обзоралитературы, описания материалов и методов исследований, 6 экспериментальных глав,выводов, библиографического указателя, включающего 190 источников, из которых 77 наиностранных языках и 6 приложений.
Работа иллюстрирована 84 рисунками и 64 таблицами.Публикации По теме диссертации опубликовано 43 печатные работы, из них 11статей – в профильных журналах, включенных в перечень ведущих периодических изданийВАК РФ, 5 статей – в журналах, входящих в международные базы данных (индексируемых вScopus и 3 статьи также в Web of Science).ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫОбъекты исследованияОбъектами исследования являлись образцы ГомЛРС свежих цветущих растенийG. woronowii и G.
nivalis, заготовленные в Ботаническом саду Первого МГМУ им. И.М.Сеченова в 2014-2016 гг. в марте-апреле в период массового цветения. НГМ готовили изсвежих растений подснежников, содержащих все части – листья, цветки, цветоносы,луковицы, корни – (planta tota) согласно правилам гомеопатической технологии (ОФС«Настойки гомеопатические матричные») по способу 3 а.Материалы и методы исследованияИсследование анатомо-морфологических и микроскопических признаков ГомЛРСосуществляли в соответствии с требованиями ОФС ГФ XIII изд.: «Корни, корневища,луковицы, клубни, клубнелуковицы» (ОФС.1.5.1.0006.15), «Травы» (ОФС.1.5.1.0002.15),«Листья» (ОФС.1.5.1.0003.15), «Цветки» (ОФС.1.5.1.
0004.15), «Техника микроскопическогои микрохимического исследования ЛРС и ЛРП» (ОФС.1.5.3.0003.15). Микроскопический8анализ проводился на микроскопе «Альтами 139T» (окуляр 10× и объективы: 4×, 10×, 40×,100×); фотоснимки выполнялись с помощью цифровой окулярной камеры UCMOS 05100KPA, обрабатывались при помощи ПО Altami Studio.Для проведения ТСХ-анализа групп БАС (флавоноидов, АА) в качестве НФиспользовали пластинки «Сорбфил» ПТСХ-АФ-А (УФ) 10×15, в качестве ПФ – различныесистемы растворителей для конкретной группы БАС, детектирование – УФ-свет (λ = 365 нм,флавоноиды), реактив Драгендорфа (АА).
Следующие показатели определяли согласно ОФСГФ XIII изд.: влажность ГомЛРС – «Определение влажности ЛРС и ЛРП (ОФС.1.5.3.0007.15), содержание примесей в ГомЛРС – «Определение подлинности, измельченности исодержания примесей в ЛРС и ЛРП» (ОФС.1.5.3.0004.15), плотность НГМ – «Плотность»(ОФС.1.2.1.0014.15, метод 1), сухой остаток НГМ – «Настойки» (ОФС.1.4.1.0019.15).Пробоподготовка.
Для количественного определения АА, флавоноидов, ОК, ГКК,аминокислот, углеводов в каждом конкретном случае использовался способ пробоподготовки (оптимальные условия: степень измельчения, тип экстрагента, режим и времяэкстрагирования), позволяющий максимально извлечь БАС из ГомЛРС или НГМ.Анализ АА методом ГХ-МС.
Разделение АА проводили на системе Agilent 7000 SeriesTriple Quadrupole GC-MS System, оснащенной газовым хроматографом Agilent 7890A Series(Agilent Technologies, США), ПО – Agilent Technologies MassHunter Workstation SoftwareQualitative Analysis ver. B.06.00 Build 6.0.633.0. НФ – колонка HP-5 МС (30 м × 250 мкм ×0,25 мкм). Масс-спектрометр работал в режиме электронного удара (EI) при 70 эВ, диапазонсканирования от 40 до 400 m/z. Температурная программа хроматографирования – изотерма1 мин при t = 80 °С, линейный нагрев от 80 до 220 °С со скоростью 30 °С в мин и изотерма 1мин при t = 220 °С, линейный нагрев от 220 до 280 °С со скоростью 5 °С в мин и изотерма 30мин при t = 280 °С, tиспарителя = 280 °С.
Скорость потока газа-носителя (гелия) – 2 мл/мин.Режим ввода – Split 1:30. Объем вводимой пробы – 1 мкл. АА определяли, сравнивая массспектр соединения со стандартными эталонными спектрами из базы данных NIST 05 (NISTMS Database, ver. 5.0).Определение флавоноидов. Проводили методом ультраэффективной жидкостнойхроматографии (УЭЖХ) с масс-селективным и УФ-детектированием (λ = 360 нм). Хроматограф «ACQUITY™ UPLC TQD» (Waters, США) оборудован двумя видами детекторов: фотодиодноматричным (Waters PDA, США), масс-спектрометрическим типа тройной квадруполь(Waters ACQUITY Triple Quadrupole Detector, США). НФ – колонка Acquity UPLC BEH C18(2,1×150 мм, 1,7 мкм).
Градиентный режим элюирования – ПФ «А» (смесь вода / ацетонитрил / муравьиная кислота – 95:5:0,1) и «В» (ацетонитрил / муравьиная кислота – 100:0,1).9Скорость потока ПФ – 0,3 мл/мин, tколонки = 35°C. Оценка содержания агликонов проводиласьпосле кислотного гидролиза (кипящая водяная баня, 1,5 часа) аналогичным методом.Определение гидроксикоричных кислот (ГКК). Проводили методом ОФ ВЭЖХ врежиме градиентного элюирования, содержание ГКК определяли в пересчете насоответствующий СО (нео-, крипто-, хлорогеновая кислота).
Хроматограф Agilent 1100 SeriesHPLC System (Agilent Technologies, США) с УФ-детектором Agilent 1100 Series (DiodeArray). ПО – ChemStation. НФ – колонка ProteCol C18 НРН 125 (4,6×250 мм, 5 мкм). ПФ:«А» – 0,1% р-р муравьиной кислоты, «В» – ацетонитрил. Скорость подачи ПФ – 1 мл/мин,tколонки = 25 °C, детектирование – УФ (λ = 330 нм), объем вводимой пробы – 10 мкл.Определение органических кислот (ОК). Осуществляли методом ион-парной ВЭЖХ,содержание ОК определяли в пересчете на соответствующий СО (янтарная, яблочная,щавелевая кислота). Хроматограф Agilent 1260 Series (Agilent Technologies, США) с УФдетектором Agilent 1260 Infinity Diode Array Detector (DAD) под управлением ПО –ChemStation (ver. B.01).
Колонка – Waters Atlantis dc18 (4,6×250мм, 5 мкм). ПФ: к 970 млраствора дигидрофосфата калия 0,01М добавляли 1,0 мл 20% тетрабутиламмония гидроксидаи 30 мл метанола; pH = 2,75. Скорость подачи элюента (изократический режим) – 1,5 мл/мин,tколонки = 25 °C, детектирование – УФ (λ = 210 нм), объем вводимой пробы – 10 мкл.Анализ аминокислот.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
