Автореферат (1141397), страница 4
Текст из файла (страница 4)
С этой целью оценивали влияние наиболеечасто применяемых растворителей для инъекционного пути введения (вода для инъекций,0,9% раствор NaCl, 5% раствор глюкозы, раствор Рингера, Гемодез-Н и фосфатныйбуферный раствор с pH=6,8-7,1) на значение рН и стабильность раствора, получаемогопосле регидратации лиофилизата ормустина (табл.
6 и рис. 5).Все растворители обеспечивали получение истинного раствора, но значительноеповышение pH наблюдалось только при регидратации лиофилизата фосфатным буфером.При использовании растворов Рингера и Гемодеза-Н уже через 1 ч после регидратациилиофилизата наблюдали снижение содержания действующего вещества на 4 и 8%,соответственно.Применениевкачестверастворителейводыдляинъекций,изотонического раствора NaCI и фосфатного буферного раствора позволяло сохранитьисходную концентрацию ормустина в течение 1 ч, а 5% раствора глюкозы – в течение 3 ч.Однако низкий показатель pH при внутривенном введении мышам приводил кпроявлениюместно-тканевыхисследованийреакций,предпочтительнейпоэтомуиспользоватьдляпроведенияфосфатныйдоклиническихбуферныйрастворсpH=6,8-7,1.Таблица 6Изменение рН при добавлении различных объемов растворителей клиофилизированной ПЛФ ормустинаОбъемдобавляемогорастворителя, мл51015Значение рН при добавлении к лиофилизату раствора:0,9%5%вода дляфосфатныйрастворрастворРингера Гемодез-НинъекцийбуферNaClглюкозыне2,12,02,02,02,3растворился2,12,02,12,12,56,52,12,12,22,32,9-16Содержание ормустина,мг/флакон130120Гемодез-НРингер1100,9 % NaCl5 % глюкоза100Фосфатный буферВода для инъекций9002468Время после регидратации, чРисунок 5.
Стабильность растворов ормустина после регидратации прииспользовании различных растворителей2. Разработка методов контроля качества ЛФ ормустина2.1. Качественное определения компонентов ЛФ методом ТСХПосле изучение литературных данных по проведению ТСХ-анализа препаратовгруппы АНМ остановились на ряде подвижных систем, которые приведены в табл. 7.Таблица 7Значение показателей Rf ормустина и Kollidon 17PFв различных системах растворителей№п/пПодвижная фазарастворители12345678спирт 95%: ледянаяуксуснаякислота(ЛУК): водан-бутанол:ЛУК:водапропанол-2: аммиакводныйспирт 95%: аммиакводныйн-бутанол: аммиакводныйн-бутанол: аммиакводныйэтилацетат:спирт95%: аммиак водныйхлороформ:спирт95%Времяподъемафронтасоотношениерастворителя,минЗначение RfормустинKollidon 17PFЛФСО-1ЛФСО-212:3:5900,070,070012:3:5900,420,42003:22400,50,50,630,633:21500,610,610,780,783:21800,070,07002:1240000010:4:11600,340,350,080,097:11800,630,630017Из всех приведенных систем наиболее быстрое (90 мин) поднятие фронтарастворителя с достаточно высоким показателем фактора удерживания (Rf) для ормустинанаблюдалосьвсистемен-бутанол:ЛУК:вода(12:3:5),поэтомувдальнейшихисследованиях для идентификации ормустина методом ТСХ использовали даннуюсистему.
Kollidon 17PF малоподвижен, из восьми систем он поднимался от линии стартатолько в трех системах, причем наиболее быстрый (в течение 150 мин) подъем фронтаподвижной фазы наблюдался в системе этанол 95%: аммиак водный (3:2). Дляидентификации Kollidon 17PF следует применять систему этанол 95%: аммиак водный(3:2). Для детектирования ормустина использовали раствор нингидрина, Kollidon 17PFпроявляли парами йода.2.2. Разработка и валидация количественного определения ормустина методом СФМЭлектронный спектр субстанции ормустина имеет две полосы поглощения: одну,интенсивную, с максимумом поглощения вблизи 228±2 нм и другую – меньшейинтенсивности, с максимумом при 396±2 нм.
Обе эти полосы можно использовать дляколичественного определения ормустина, но использование коротковолновой полосысопряжено с большой вероятностью случайных и систематических ошибок. Многиеорганические соединения поглощают в этой области спектра. По этой причинеопределение содержания ормустина в ЛФ проводили при λ=396±2 нм.Рисунок 6. Спектры поглощения ПЛФ ормустина (1), субстанции ормустина (2),6% раствора Kollidon 17PF (3) и раствора 0,1 М хлористоводородной кислоты (4)Для изучения влияния ВВ (Kollidon 17PF и 0,1 М хлористоводородной кислоты),входящих в состав ПЛФ исследовали их спектры поглощения. В диапазоне 350-450 нмпоказано, что ВВ не поглощают в данной области (рис.
6) и, таким образом, не влияют наспектральные характеристики ормустина. Поэтому чтобы упростить процесс измеренияKollidon 17PF не использовали при создании СО и раствора сравнения.182.3. Стандартизация ПЛФ ормустинаВ соответствии с требованиями ГФ XIII для составления проекта НД на готовуюЛФ «Ормустин, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 125 мг» выбраныследующие показатели качества: описание, подлинность, средняя масса и однородностьпо массе, прозрачность и цветность раствора, pH раствора, отсутствие механическихвключений, изомерный состав, посторонние примеси, количественное определение,потеря в массе при высушивании, пирогенность, аномальная токсичность и стерильность.Три серии ПЛФ ормустины были заложены на хранения при двух температурныхрежимах (4 оС и минус 18 оС). Мониторинг стабильности данных серий осуществлялся посрокам установленным в ГФ: первый год – сразу после получения и через каждые 3 мес;второй год и третий год – через каждые 6 мес (табл.
8).Во время всего срока хранения (2 года) трех серий при обоих температурныхрежимах не наблюдаются значительные изменения в показателях качества, поэтому впроект НД на ПЛФ ормустина в раздел условия хранения установили требование: хранитьв защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °С. Изучение стабильностипрепарата в процессе хранения продолжается.Таблица 8Изменение показателей качества трех серий ПЛФ ормустина в процессе храненияПоказателькачестваПределы попроекту НДСрокхранения, мес36количественноеопределение,мг/флакон116-13491218243средняя масса,мг420-460691219Режимхранения, оСминус 184минус 184минус 184минус 184минус 184минус 184минус 184минус 184минус 184минус 184Серия ПЛФ ормустина090310041204124,7125,0125,1124,8124,9125,0124,8125,0125,1124,8124,9125,1124,8124,9125,1124,7125,0125,1124,8125,0125,0124,7125,0125,0124,8124,9125,1124,8124,9125,1124,8124,9125,1124,8125,0125,1124,8124,9125,1440,0440,9440,7440,2441,7441,6440,2441,8441,6441,7442,5442,4441,5442,6442,3441,6443,1443,1441,8443,0443,0443,0443,7443,8442,9443,6443,7минус 184минус 184минус 184минус 184минус 184минус 184минус 184минус 1841824369pH2,0-2,5121824443,5443,6444,8444,82,02,12,12,12,02,12,12,12,12,02,12,12,1444,8444,7445,9446,12,12,12,02,02,02,12,02,12,12,02,12,12,1444,8444,8445,7445,92,12,12,12,12,12,12,12,12,12,02,12,12,13.
Изучение противоопухолевой активности готовой ЛФ ормустина3.1. Определение терапевтической дозыТерапевтическую дозу препарата определяли при однократном внутривенномвведении ПЛФ в различных дозах мышам с асцитными вариантами лимфолейкозов P-388и L-1210.Препарат вводили в диапазоне 50-175 мг/кг, по данным графиков представленныхна рис. 7 видно, что ормустин дозозависимо ингибирует рост изучаемых лейкозов.
В дозах50-100 мг/кг на обоих моделях наблюдался постепенный рост показателей: увеличениепродолжительности жизни (УПЖ) с 70% до 242% для L-1210 и с 90% до 178% для P-388 иизлечения животных в опытных группах. Максимальное УПЖ (174 % у мышей слимфолейкозом P-388 и 346% у мышей с L-1210) и излечение животных (33,3% у мышей слимфолекозом P-388 и 66,7% у мышей с L-1210) достигнуто при однократномвнутривенном введении в дозе 125 мг/кг. В более высоких дозах наблюдалось проявлениетоксичности, гибель испытуемых наблюдалась в 22,2-25% случаях.Рисунок 7. Противоопухолевая активность ПЛФ ормустина при однократномвнутривенном введении на лейкозах в диапазоне доз 50-175 мг/кг20В качестве терапевтической дозы ПЛФ ормустина выбрана доза 125 мг/кг.3.2.
Противоопухолевая активность ормустина на различных солидных моделяхОпределение противоопухолевой активности готовой ЛФ ормустина на различныхсолидных опухолях проводили при однократном введении ЛФ в дозе 125 мг/кг.Таблица 9Противоопухолевая активность ПЛФ ормустинана различных солидных моделях опухолейПараметрТорможениеопухоликарцинома легкогоЛьюиса LLCростаОпухолевая модельрак шейки маткиРШМ-5излечение 100%93,0%мелонама B-1684,0-91,0%Как видно, по данным табл. 9, ормустин оказывает высокую противоопухолевуюактивность при лечении солидных опухолей, при терапии рака шейки матки РШМ-5излечение достигает 100%.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
