Автореферат (1141397), страница 2
Текст из файла (страница 2)
И.М.Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) 27 ноября 2017 г.Личный вклад автораАвтор принимал непосредственное участие в постановке целей и задач настоящегоисследования, их экспериментальной реализации, анализе и систематизации полученныхданных, изложении полученных результатов в виде научных публикаций. В работах,выполненных в соавторстве, автором проведена аналитическая и статистическаяобработка, научное обоснование и обобщение полученных результатов. Автором личнопроанализирована научная литература по данной теме, проведен патентный поиск,подобран состав и разработана технология получения ПЛФ ормустина, предложеныметодики качественного и количественного анализа ЛП.
На основании полученныхданных разработан лабораторный регламент на производство и проект НД «Ормустин,лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 125 мг».Внедрение результатов исследованияРазработаны и внедрены в практику лабораторный регламент и проект НД на ПЛФ«Ормустин, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 125 мг».Результаты исследований внедрены в научную и практическую деятельностьлабораторий разработки лекарственных форм и химико-фармацевтического анализа НИИЭДиТО ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н.
Блохина» Минздрава России; научную и6преподавательскую деятельность кафедры фармацевтической технологии и фармакологииИПО ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (СеченовскийУниверситет).Соответствие диссертации паспорту научной специальностиНаучные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.01 –технология получения лекарств.
Результаты проведенного исследования соответствуютобластиисследованияспециальности,конкретнопунктам1,3и4паспортаспециальности.Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической наукиДиссертационная работа выполнена в рамках научной темы «Развитие научных инаучно-методических основ, базовых и инновационных подходов при разработке,внедрении и применении лекарственных средств» (номер государственной регистрации01201261653) ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М.
Сеченова Минздрава России(Сеченовский Университет), а также в соответствии с планом научно-исследовательскихработ НИИ ЭДиТО ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России потеме «Разработка лекарственных форм противоопухолевых препаратов с организациейлабораторного производства» (2013-2018 гг.) и в рамках государственного контракта№13411.1008799.13.163«Доклиническиеисследованияпротивоопухолевоголекарственного средства класса нитрозомочевин».Объем и структура диссертацииДиссертация изложена на 127 страницах и представлена введением, пятью главами,общим заключением, выводами, списком литературы и приложением.
Работа содержит 20таблиц и 32 рисунка. Список литературы содержит 163 наименования, 65 из которыхиностранные.ПубликацииСодержание выполненной работы отражено в 18 научных публикациях, из них 10работ опубликованы в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки России, 2 статьи –в журналах, индексируемых в базе SCOPUS.ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериалы и методы исследованияОбъектом исследования являлась АФИ ормустина (рис. 1), синтезированная вИнституте органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН.7Рисунок 1. Структурная формула ормустинаВ процессе проведения исследований использовали химические субстанции,растворители и реактивы, отвечающие требованиям различных НД (ГОСТ, ТУ,российской и зарубежных фармакопей).1. Изучение растворимости субстанции ормустинаИзучение растворимости субстанции ормустина проводили визуально притемпературе 20±2 ºС (согласно ОФС.1.2.1.0005.15) и выражали в процентномсоотношении.2.
Приготовления ПЛФ «Ормустин, лиофилизат для приготовленияраствора для инъекций 125 мг»Получение концентратаСубстанцию ормустина растворяли на ультразвуковой (УЗ) бане TranssonicT310(Elma, Германия) в заранее приготовленном растворе 0,1 М кислоты хлористоводородной,охлажденном до 15 ºС. К полученному раствору добавляли частями Kollidon 17 PF (BASFThe Chemical Company, Германия) до получения светло-желтого прозрачного раствора.Стерилизация ПЛФ ормустинаСтерилизацию раствора ормустина проводили под вакуумом через мембранныефильтры с размером пор 0,22 мкм.Лиофилизация 2,5% раствора ормустинаЛиофилизацию проводили на сублимационной сушке MinifastDO.2.
При этомраствор ормустина дозировали по 5 мл во флаконы объемом 20 мл, загружали на полкисублимационной сушки и лиофилизировали с использованием различных температурныхрежимов.3. Методы анализа ПЛФ ормустина3.1. Определение подлинности ормустинаДля установления подлинности компонентов изучаемой ЛФ использовали ТСХ,СФМ и ВЭЖХ.8ТСХ проводили с использованием стандартных образцов (СО) по методикирекомендованной российской фармакопеей. Электронный спектр поглощения в области200-450 нм должен содержать два максимума при 229±2 нм и при 396±2 нм. Приопределении методом ВЭЖХ (ВЭЖХ хроматограф Agilent 110 с колонкой PhenomenexLunaC18(2),Agilent,США)должныобнаруживатьсядвапоследовательноэлюирующихся пика: неактивный изомер 1 (время выхода 8,0-9,0 мин) и активный изомер2 (время выхода 11,3-12,8 мин).3.2.
Количественный спектрофотометрический анализ ормустина в ПЛФКоличественное содержание ормустина в ЛФ определяли методом СФМ в видимомдиапазоне при длине волны 396±2 нм с использованием спектрофотометра Cary 100(Varian, Inс., Австралия).3.3. Определение рН в концентрате и ПЛФ ормустинаОпределение рН концентрата и лиофилизата (после его регидратации) ормустинапроводили потенциометрически на pH-метре HANNA рН 211 (Hanna Instruments,Германия).
Все измерения проводили в интервале температур от 20 до 25°С.3.4. Определение изомерного состава методом ВЭЖХПриготовление испытуемого раствора: содержимое флакона растворяют в воде иколичественно переносят в мерную колбу на 100 мл, доводят объем колбы водой дометки, перемешивают и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.Подвижная фаза: 10 мл спирта 96 % и 90 мл 0,01 М раствора калия фосфатаоднозамещенного смешивают в круглодонной колбе, перемешивают.
Раствор фильтруютчерез мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм и дегазируют.Проведение анализа: хроматографируют испытуемый раствор, получая не менее 5хроматограмм. На хроматограмме определяются два пика, соотношение площадейкоторых соответствует соотношению изомеров в ормустине.Содержание второго изомера Х2 в % вычисляют по формуле 1:Х2 = 22 +1× 100%,(1),где S1 – площадь пика, соответствующего первому изомеру;S2 – площадь пика, соответствующего второму изомеру.4. Исследование противоопухолевой активности ПЛФ ормустина в опытах in vivoПротивоопухолевую активность ПЛФ ормустина изучали на иммунокомпетентныхмышах линий C57Bl/6j, DBA/2 и СВA (доноры опухолевого материала) и гибридахпервого поколения BDF1 (C57Bl/6j×DBA/2) массой 18–22 г, самки и самцы с перевитымиопухолями:лимфоцитарнойлейкемиейР-388,9лимфоиднойлейкемиейL-1210,эпидермоидной карциномой легкого Льюис (LLC), меланомой В-16, раком шейки маткиРШМ-5.
Мышей получали из питомника лабораторных животных «Столбовая», а также изотделения лабораторных животных ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина»Минздрава России и содержали в конвенциональных условиях на брикетированномрационе кормления.Результаты собственных исследований1. Разработка состава и технологии получения ПЛФ ормустина1.1. Изучение растворимости субстанции ормустинаТак как субстанция ормустина медленно и умеренно растворима в воде (100 мг в 10мл) с целью возможности повышения растворимости сравнивали растворяющуюспособность различных растворителей, разрешенных для применения в инъекционныхЛФ.
На данном этапе в качестве растворителей, способствующих повышениюрастворимости субстанции, использовали растворы высокомолукулярных соединений(ВМС), органической и неорганической кислот, сахара, маннита (табл. 1).Оказалось, что повышение растворимости субстанции ормустина более чем в 1,5раза наблюдается при добавлении маннита и таких ВМС, как Kollidon 17PF, декстран70000. Более значимого повышения растворимости – в 2 и более раза удалось достичьтолько с применением лимонной и хлористоводородной кислот.Таблица 1Изучение растворимости АФИ ормустина в различных растворителях№ п/п1.2.3.4.5.6.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.Растворитель3,93,53,53,63,62,92,42,32,22,02,0Концентрацияормустина, %1,01,71,81,71,61,52,02,52,52,02,23,11,63,21,73,11,83,22,01,82,5рНвода для инъекцийраствор маннита 5 %раствор Kollidon 17PF 2 %2 % раствор декстрана 70000раствор маннита 5 %, 2 % Kollidon 17PF0,2 % раствор лимонной кислоты2 % раствор лимонной кислоты4 % раствор лимонной кислоты6 % раствор лимонной кислотыраствор лимонной кислоты 2 %, 6% лактозыраствор лимонной кислоты 2 %, 4% лактозыраствор Kollidon 17PF 10 %, 0,1 % лимоннойкислотыраствор Kollidon 12PF 10 %, 0,1 % лимоннойкислотыраствор Kollisolv PEG-400 10 %, 0,1 % лимоннойкислотыраствор ПЭГ-1500 10 %, 0,1 % лимонной кислотыраствор 0,1 М хлористоводородной кислоты10Для окончательного выбора растворителя из двух кислот (лимонной и 0,1 Мхлористоводородной)проводилиисследованиябиологическойактивностидвухполученных растворов на лабораторных животных.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
