Автореферат (1141397), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Оказалось, что введение в составраствора лимонной кислоты в концентрации 2–6% вызывает гибель лабораторныхживотных, связанную с гемолитической реакцией. В связи с этим, в качестве растворителяормустина выбрали раствор 0,1 М хлористоводородной кислоты.1.2. Выбор метода растворения ормустина в растворе 0,1 Мхлористоводородной кислотыПосле выбора растворителя изучали влияние различных методик интенсификациирастворимости – нагревание на водяной бане при 60оС, обработка УЗ, перемешивание намагнитной или пропеллерной мешалке с целью уменьшения времени растворения инедопущения значительного снижения концентрации действующего вещества в растворе.При этом проводили растворение 2,5 г АФИ в 100 мл раствора 0,1 М хлористоводороднойкислоты, после получения прозрачного раствора определяли содержание действующеговещества (табл. 2).Наиболее быстро процесс растворения проходит при использовании нагревания наводяной бани и обработке УЗ, однако применение нагревания нецелесообразно из-зазначительного снижения на 20% концентрации ормустина в растворе.Таблица 2Влияние различных методик на скорость растворения ормустинаМетодика растворенияПоказатель качестванагреваниепри 60 оСУЗобработкаперемешиваниена магнитноймешалкеперемешиваниенапропеллерноймешалке0,70,890,160,3580±499±185±289±1средняя скоростьрастворения, г/минсодержание ормустинав растворе послеполного растворения,% от теоретическогоПредставленныетехнологическомданныепроцессеуказываютполучениянаЛФто,чтопозволяетиспользованиезначительноУЗвснизитьпродолжительность растворения АФИ и при этом обеспечивает сохранение концентрацииактивного вещества практически на исходном уровне.111.3.
Изучение влияние УЗ обработки на изомерный состав ормустинаСубстанция ормустина представляет собой смесь двух изомеров (неактивного иактивного). От стабильности изомерного состава зависит противоопухолевая активностьразрабатываемого препарата.
В процессе растворения 10 г АФИ под действием УЗисследовали влияния времени и температуры, при которых происходит растворение, наизомерный состав ормустина (табл. 3).Таблица 3Влияние УЗ на изомерный состав ормустинаТемпература, оСВремя гидролиза, мин022480225620±215±2Соотношение изомеров, %1:279,75 : 20,2579,77 : 20,2379,89 : 20,1179,81 : 20,1979,83 : 20,1780,11 : 19,89Из данных, представленных в табл. 3, видно, что непродолжительное воздействиеУЗ (до 48 мин при 20±2 оС) практически не влияет на изомерный состав ормустина исодержание второго изомера находится в пределах нормы (20,0-24,0%). Поэтому можносделать вывод о целесообразности применения УЗ в технологии получения ПЛФормустина.1.4.
Изучение стабильности раствора ормустина в процессе храненияИзучали стабильности 2,5% раствора ормустина в процессе хранения течение 5суток. При этом свежеприготовленный раствор ормустина хранили при комнатнойтемпературе (22°С) и в холодильнике (4°С). В определенные промежутки времениоценивали внешний вид растворов и контролировали содержание действующего вещества(рис. 2) и pH раствора.Содержаниеормустина, мг/мл274°С2522°С2321191715036244872120Время, чРисунок 2. Изменение содержания ормустина в растворе в процессе хранения12За все время эксперимента не наблюдалось внешних изменений (прозрачный,светло-желтый раствор), а также изменения pH (2,1-2,2).
Но концентрация раствора за 5суток упала на 12,5 и на 37% при хранении в холодильнике и при комнатной температуресоответственно. Поэтому с целью увеличения срока хранения раствора необходимовведение стабилизаторов или проведение лиофилизации данной ЛФ.1.5. Изучение влияния формообразователей на стабильность ормустина в растворе2,5% раствор ормустина нестабилен при хранении, для повышения срока храненияЛФ необходимо проводить её лиофилизацию.
В связи с этим, изучали влияние введения всостав раствора ормустина формообразователей.Готовили ряд модельных составов: 2,5 г субстанции ормустина растворяли в 10 мл0,1 М хлористоводородной кислоты под действием УЗ, к полученному растворудобавляли одно или смесь вспомогательных веществ (ВВ) в различных концентрациях ифильтровали полученные растворы.Рисунок 3. Влияние формообразователя на время растворения и % потерьормустина за 3 ч после полного растворенияВсе растворы были прозрачные, светло-желтого цвета.
pH сразу после растворенияи через 3 ч оставалось постоянным и составляло для всех растворов 2,0-2,1. Результатыизмерений, представленные на рис. 3, указывают на то, что добавление в составмодельного раствора в качестве сорастворителя и формообразователя 6% Kollidon 17PFзначительно снижает потерю действующего вещества с 7,3% до 1,4% в процессеприготовления концентрата. В растворе, содержащем смесь 6% Kollidon 12PF и 0,1%лимонной кислоты, наблюдали небольшое снижение потери ормустина, тогда какдобавление 10% Kollidon 12PF или смеси 4% Kollidon 12PF с 2% лактозой приводило кускорению разрушения действующего вещества в 1,5 раза.
Введение в состав 4% лактозы13и 4% маннита привело к усилению деструкции ормустина примерно в 2,5 раза. В связи свышесказанным,вкачественаиболееоптимальногоформообразователя,стабилизирующего раствор ормустина, выбран Kollidon 17PF в концентрации 6%.1.6. Изучение влияния фильтрующего материала на содержаниеормустина в раствореДля растворов термолабильных веществ, к которым относится ормустин, наиболееэффективным методом стерилизации, оказывающим наименьшее негативное воздействиена качество ЛП, является стерилизующая фильтрация.
Для определение наиболееподходящего фильтрующего материала проводили фильтрование раствора ормустиначерез нейлоновые («Pall»N66 с диаметром 25, 47 мм и размером пор 0,22 мкм, PallCorporation,США;ОООПаллЕвразия,Россия);иполиэфирсульфоновые(Фильтрационная система Stericup GP Millipore Express Plus, Merk Millipor) мембранныефильтры.Таблица 4Влияние фильтрующего материала на содержание ормустина в раствореФильтрующийматериалнейлонполиэфирсульфонСодержание ормустина в растворе, мг/млдо фильтрациипосле фильтрации25,0±0,324,8±0,525±0,314±0,5При использовании полиэфирсульфоновых фильтров наблюдалось значительноеснижение, более чем на 40% содержание ормустина в растворе, тогда как прииспользовании нейлоновых фильтров потери не превышали 2% (табл.
4). Анализполученных данных позволяет говорить о вероятном взаимодействии субстанции илихлористоводородной кислоты с полиэфирсульфоновыми мембранами и невозможности ихдальнейшего применения в технологии получения инъекционной ЛФ ормустина. Наосновании вышеизложенного сделан вывод об использовании нейлоновых мембранныхфильтров для получения стерильного раствора.1.7. Разработка режима лиофилизации раствора ормустинаПеред разработкой режима лиофилизации ЛФ проводили изучение влиянияпроцесса замораживания на стабильность действующего вещества.
При этом флаконы,содержащие по 5 мл раствора, выдерживали при температуре минус 18оС в течение 24 ч.Заморозка приводила к незначительному снижению содержания ормустина, потери непревышали 1-1,5%, следовательно, данный раствор можно лиофилизировать.14В процессе выбора режима сушки сравнивали данные по качеству полученноголиофилизата трех режимов лиофилизации на сублимационной сушке «Edwards MinifastDO.2» (Ero Electronic S.p. A., Италия):• загрузка раствора во флаконах на теплые полки (20оС) с быстрым замораживаниемдо минус 45 оС и равномерным подъемом температуры со скоростью 2-3 оС/ ч;• загрузка раствора во флаконах на теплые полки (20оС) с быстрым замораживаниемдо минус 45 оС и длительным выдерживанием при данной температуре (10 ч), споследующим равномерным подъемом температуры со скоростью 2-3 оС/;• загрузка раствора во флаконах на холодные полки (минус 45 оС) с быстрымзамораживанием продукта до минус 45 оС и равномерным подъемом температур соскоростью 2-3 оС/ ч.Использование 1 и 2 режимов позволяет получить лиофилизат надлежащегокачества с незначительными потерями действующего вещества (до 1,4%), однако т.к.
1режим требует меньших затрат времени, он предложен для получения ПЛФ ормустина.Таблица 5Сравнение лиофилизатов ормустина, полученных приразличных режимах лиофилизации1Режим лиофилизации23727672однороднаяпористая «таблетка»однороднаяпористая «таблетка«таблетка» скристаллическойструктуройпроходит легкопроходит легкозатрудненаПараметрпродолжительностьлиофилизации, чвнешний видлиофилизатаТемпература, ⁰Срегидратируемостьводой3020100-10 0-20-30-40-505 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75Время, чРисунок 4. График изменения температуры на препарате в процессе лиофилизациипо 1-му режиму151.8. Выбор растворителя для регидратации лиофилизированной ПЛФормустина перед введениемНа завершающем этапе технологических исследований подбирали растворительдля регидратации полученного лиофилизата.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
