Диссертация (1141389), страница 15
Текст из файла (страница 15)
29).y=57,60x+199900800700600500400487429,4371,8314,2256,6300200775717,4659,8602,2544,6y=57,60x+199100012345678910Рис. 29. – Линейная зависимость содержания терпеноидных соединений в пересчете наментол от площадей пиков на хроматограммахПо методу наименьших квадратов установлено, что зависимостьподчиняется уравнению:y = 57.60 ⋅ x + 199Прецизионность аналитической методики выражает степень близости(или степень разброса) результатов для серии измерений, выполненных поданной методике на различных пробах одного и того же однородногообразца.Прецизионность аналитической методики обычно характеризуютдисперсией, стандартным отклонением или относительным стандартнымотклонением для серии измерений.110Сходимость (повторяемость) должна показать, что методика анализа припроведении в одинаковых условиях (на одном приборе, в один день, одинчеловек) обеспечивает получение сравнимых результатов.
Сходимостьустанавливалась определением суммы терпеноидов в пересчете на ментол висследуемых образцах препарата стоматофит в десяти повторностях. Втаблице 30 приведены результаты количественного определения суммытерпеноидных соединений в пересчете на ментол в исследуемых образцахпрепарата стоматофит.Сходимость аналитической методики№ анализаСодержание ментола, %11,4721,5231,6141,4851,4361,4571,4281,4291,37101,41Таблица 30Статистическая обработка результатов аналитической методикипредставлена в таблице 31.111Таблица 31.Статистическая обработка результатов аналитической методикиСтатистические характеристикиСодержаниементолаРезультатыНаименьшее значение, %1,37Наибольшее значение, %1,61Среднее значение, %1,458Стандартное отклонение0,0678Коэффициент вариации, %4,65Доверительный интервал (при Р=95%)1,458±0,048Промежуточная (внутрилабораторная) прецизионность доказывает, что внезависимости от изменения внешних условий анализа обеспечиваетсяполучение согласующихся результатов.Для оценки промежуточной прецизионности нами был выбран такойкритерий, как определение содержания ментола в исследуемых образцахпрепарата на 2 разных приборах в разные дни.
Результаты проведенныхиспытаний представлены в таблицах 32 и 33.Таблица 32.Результаты определения промежуточной прецизионности№ анализа12345678910Содержание ментола, %Прибор 1Прибор 21,471,451,521,531,611,611,481,471,431,421,451,441,421,411,421,401,371,381,411,40Из полученных расчетных и экспериментальных данных следует, чтодисперсии двух определений отличаются незначительно, значит, опытныеданные сравнимы и методика достоверна.112Критерий Фишера для данных результатов анализа равен F = 1,087<F(95%;9;9)=3,18.
Это указывает на то, что различие в значениях дисперсий,полученных по результатам анализа двух исследователей, не может бытьпризнано значимым. Следовательно, методика анализа воспроизводима, арезультаты испытаний двух исследователей различаются незначительно.Таблица 33.Статистическая обработка результатов аналитической методикиСтатистические характеристикиРезультатыПрибор 1Прибор 2Наименьшее значение, %1,371,38Наибольшее значение, %1,611,61Среднее значение, %1,4581,451Стандартное отклонение0,06780,0706Коэффициент вариации, %4,654,87Доверительный интервал1,458±0,0481,451±0,051Относительная ошибка отдельного значения3,3%3,5%СодержаниементолаF (95%; 9;9) = 3,18Контрольное значение: 1,087t (95%;18) = 2,101Контрольное значение: 0,1Правильность доказывалась на всем диапазоне применения с помощьюметода добавок ментола (стандартный образец) к пробам анализируемогопрепарата.
В таблице 34 приведены данные, полученные в опытах сдобавками; относительная ошибка результатов опытов с добавками непревышает относительную ошибку единичного определения и имеетотклонения в сторону как положительных, так и отрицательных значений,что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки в предлагаемойметодике анализа.113Таблица 34.Результаты опытов с добавками ментола к анализируемому препаратуВзято всырье, гДобавленоментола (г)Должнобыть (г)Найдено(г)0,014580,014580,014580,014580,0036450,0072900,0109350,0145800,018230,021870,025520,029160,018170,021920,025570,02909ОшибкаАбсолютная (г) Относительная(%)– 0,00006– 0,329+ 0,00005+ 0,229+ 0,00005+ 0,196– 0,00007– 0,240Аналитическая методика считается робастной, если на достоверностьполучаемых результатов не влияют небольшие, специально введенныеизменения условий опыта.В качестве показателя для проверки робастности нами был выбранпоказатель стабильности серий анализируемого препарата и стандартногообразца при хранении.
Опытным путем было доказано, что в течениезаявляемого срока хранения раствора стандартного образца ментола (1 месяцпри условии хранения в холодильнике при температуре не выше 4 ºС),содержание суммы терпеноидных соединений в пересчете на ментол,менялось незначительно, оставаясь приблизительно постоянным и в растворестандартного образца, и в анализируемых сериях препарата.4.1.4 Предложения по оптимизации анализа качества применяемых встоматологиимногокомпонентныхлекарственныхпрепаратов,содержащих спиртовые экстракты лекарственного растительного сырьяРезультатысопоставительногоГХ-МСанализаМЭ,МЭС,стоматофита и стоматофита А позволяют оптимизировать анализ качествамногокомпонентных препаратов растительного происхождения, содержащихспиртовые извлечения из ЛРС.На примере апробируемых объектов препаратов стоматофит истоматофит А показано, что предложенная методика ГХ-МС позволяет114провести достоверную идентификацию типичных соединений основныхгрупп БАВ для пяти видов растительного сырья, используемого припроизводстве препарата стоматофит, и шести видов растительного сырья,используемого при производстве препарата стоматофит А.
В частности,методом ГХ-МС в апробируемых объектах определены следующиесоединения основных групп БАВ растительного сырья, используемого впроизводстве указанных препаратов: цинеол, камфора, 3α-гидроксиманоол(Salvia officinalis L.); ментол (Mentha piperita L.),камфен, азарон,изокаламендиол (Acorus calamus L.), тимол (Thymus vulgaris L.); бисабололаоксид,(Matricaria2-(2,4-гексадиинилиден)-1,6-диоксаспиро[4,4]нон-3-енchamomilla L.); кадален, 7-гидроксикадален, 7-метокси-2Н-1-бензопиран-2-он(Arnica Montana L.).Предложенная методика ГХ-МС позволяет провести объективноеисследование, идентификацию и количественное определение химическогосостава основных групп БАВ ЛРС, синтетических компонентов и экстрагентав момент получения экспериментальных данных в одной аналитическойпробе анализируемого препарата.Комбинированиефизико-химическихихимическихметодовопределения основных групп БАВ, обусловливающих фармакологическуюактивность, является одним из основных требований, предъявляемых ГФ XIIIканализукачествамногокомпонентныхлекарственныхпрепаратоврастительного происхождения.
Полученные результаты ГХ-МС анализа МЭи МЭС шалфея лекарственного листьев, ромашки аптечной цветков, мятыперечной листьев, травы тимьяна обыкновенного, корневищ аира, коры дуба,цветковарникидополнительноймогутбытьобъективизациииспользованыоценкипринеобходимостикачестванаэтапахтехнологического цикла производства экстрактов, простых и сложныхнастоек ЛРС, многокомпонентных лекарственных препаратов, содержащихспиртовые извлечения из указанных видов растительного сырья.115На основании результатов ГХ-МС исследования МЭ и МЭС могут бытьпредложены следующие рекомендации для оценки качества лекарственныхпрепаратов (в качестве подтверждающего метода анализа), содержащихспиртовые извлечения из вышеуказанных видов растительного сырья сцелью идентификации химических соединений основных групп БАВ (табл.35).Таблица 35.Рекомендации по ГХ-МС определению химических соединенийосновных групп биологически активных веществ в лекарственныхпрепаратах, содержащих спиртовые извлечения из семи видов растительногосырьяРастительноесырьеРаздел нормативной документации«Определение основных групп биологически активных веществ»Требования НД на виды растительного Предлагаемые дополнения присырьяоценке качества препаратов,содержащихспиртовыеизвлечения из ЛРСЦветки арникиОпределение основных групп БАВ непредусмотрено.Раздел «Качественные реакции»:сексвитерпеновые лактоны азуленовогоряда, флавоноиды.ГОСТ 13339-89ГХ-МС (карвакрол, кадален, 7гидроксикадален, 7-метокси-2Н-1бензопиран-2-он)Мяты перечной ТСХ (тимол, ментол)листьяФС.2.5.0029.15ГХ-МС (неоментол, ментол,пиперитон, ментен)Корневища аираОпределение основных групп БАВ непредусмотрено.ГФ XIГХ-МС (шиобунон, альфакалакорен, азарон, камфен,изокаламендиол)ШалфеялекарственноголистьяТСХ (лютеолин-7-гликозид, цинеол)(ФС.2.0051.15)ГХ-МС (цинеол, камфора, 3αгидроксиманоол, бета-туйон)Кора дубаОпределение основных групп БАВ непредусмотрено.Раздел «Качественные реакции»:дубильные вещества.ГФ XIГХ-МС (2-метокси-4-ропилфенол,сиреневый альдегид, меллеин,антиарол, 1-дезоксиинозитол,сцилло-инозитол, фриделин).Трава тимьянаобыкновенногоОпределение основных групп БАВ непредусмотрено.ГФ XIГХ-МС (тимол)Ромашкиаптечной цветкиТСХ (рутин, кверцетин)(ФС.2.5.0037.15)ГХ-МС (бисаболола оксид,герниарин, тонгаосу)116Полученные типичные хроматограммы МЭ и МЭС могут являтьсяприкладной базой для создания хроматографических профилей основныхгрупп БАВ.
Например, хроматографических профилей эфиромасличнойфракции, т.е. перечня БАВ, выбранных из репрезентативных и характерныхкомпонентов.Результаты ГХ-МС также могут быть рекомендованы для экспрессскрининга химического состава основных групп БАВ растительного сырья,используемого при разработке и создании новых лекарственных препаратоврастительного происхождения, применяемых в стоматологии.Выводы1. Проведена апробация методики ГХ-МС, предлагаемой в качествеподтверждающегометодаанализакачествамногокомпонентныхпрепаратов растительного происхождения, на образцах промышленныхсерий препаратов стоматофит и стоматофит А. В апробируемых объектахопределены следующие типичные химические соединения основныхгруппБАВрастительногосырья,используемоговпроизводствеуказанных препаратов: цинеол, камфора, 3α-гидроксиманоол (SalviaofficinalisL.);ментол(MenthapiperitaL.),камфен,азарон,изокаламендиол (Acorus calamus L.), тимол (Thymus vulgaris L.);бисаболола оксид, 2-(2,4-гексадиинилиден)-1,6-диоксаспиро[4,4]нон-3-ен(Matricaria chamomilla L.); кадален, 7-гидроксикадален, 7-метокси-2Н-1бензопиран-2-он (Arnica Montana L.).2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
