Диссертация (1141389), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Присутствие листьев шалфея и травы тимьянаобыкновенногодополнительноподтверждаетсяопределением3-гидроксиманоола – соединения, характерного для растений семействаLamiacea. Масс-спектры БАВ представлены на рисунках 24а – 24г.99AbundanceScan 97 (4.993 min): MENTHA2.D\data.ms712000008119000018000095170000160000HO1500001400001300001200001100001000009000041551238000070000600001385000040000109300002000010000046405060866560100708090100155114110120130140150m/z-->IAbundanceScan 144 (3.418 min): stomat_3.D\data.ms (-135) (-)112100009000O8000700013960006950001224000977730001541058320001000051405060708090100110120130140150160m/z-->IIAbundanceAverage of 3.964 to 4.005 min.: STOMAT_3.D\data.ms13575000700006500060000550005000045000OH400003500030000150250002000015000911151000050000655140506010777121102708090100110120128130142140155150m/z-->IIIРис.
24а. – Масс-спектры БАВ препарата стоматофит А:I – ментол; II – ментанон; III – тимол100AbundanceAverage of 5.249 to 5.266 min.: STOMAT_3.D\data.ms (-)208850008000075000700006500060000O5500050000O45000O40000350001931653000025000120200001500069100009113779150105500051040501775960129708018590 100110120130140150160170180190200210m/z-->IAbundanceScan 494 (5.452 min): STOMAT_3.D\data.ms (-493) (-)14390008000105700081600050001615940009313467121300017920001000018715120522023860 70 80 90 100110120130140150160170180190200210220230m/z-->Abundance#171172: Bisabolol oxide B $$ 2-Furanmethanol, tetrahydro-.alpha.,14390008000857000600050005971400013412593161300017922010720002381000060 70 80 90 100110120130140150160170180190200210220230m/z-->IIAbundanceScan 508 (5.534 min): STOMAT_3.D\data.ms (-506) (-)1834600044000420004000038000360003400032000300002800026000240002200019820000180001600016814000120001000080001536000400083 912000068 765040506070801211289914116017620590 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200m/z-->IIIРис.
24 б. – Масс-спектры БАВ препарата стоматофит А:I – азарон; II – бисаболола оксид; III – кадален101AbundanceScan 540 (5.720 min): stomat_3.D\data.ms (-538) (-)1761333500014830000O25000OO20000150001000077515000631058943117125 140 155 169 184030 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 18097m/z-->IAbundanceScan 553 (5.795 min): stomat_3.D\data.ms (-550) (-561) (-)223140000130000120000110000100000900008000011170000600004000015555 71500004383300009520000137123100000406080177166205238190272295100 120 140 160 180 200 220 240 260 280m/z-->IIAbundanceScan 97 (4.993 min): SALVIA.D\data.ms (-90) (-)9516000140001200081O1000041800069556000108152400020000494050636087708090102115121137144100 110 120 130 140 150 160m/z-->IIIРис.
24 в. – Масс-спектры БАВ препарата стоматофит А:I – 7-метокси-2Н-1-бензопиран-2-он; II – изокаламендиол; III – камфора102AbundanceScan 667 (6.458 min): stomat_3.D\data.ms (-664) (-)19944000420004000038000360003400032000300002800021426000HO240002200020000180001600014000120001841000080006000400020000441159167 765512816914115210022821022019020018016017015013014011012030 40 50 60 70 80 90 100m/z-->IAbundanceScan 710 (6.707 min): stomat_3.D\data.ms (-705) (-)1378500080000750007000081 95650006000055000257500006945000400003500030000OH107 12355412500017718920000203161149150002292165000024427210000290406080100 120 140 160 180 200 220 240 260 280m/z-->IIAbundanceScan 702 (8.509 min): CHAMOMIL.D\data.ms (-706) (-)200240000220000200000OO18000011516000014000012000012876100000157800001025060000424000018567872000001701415830405060708090 100110120130140150160170180190200m/z-->IIIРис.
24 г. – Масс-спектры БАВ препарата стоматофит А:I – 7-гидроксикадален; II – 3α-гидроксиманоол; III – тонгаосуТакже методом ГХ-МС идентифицирован спирт этиловый. Пик этанолана хроматограмме соответствует времени удерживания 3,73 (рис 25).Содержание спирта этилового в образцах препарата стоматофит Аисследованных серий – 48,53±1,07% (относительно 100% площадей пиковвеществ, определяемых в препарате стоматофит А с использованием ГХ-103МС). Данные о количественном содержании спирта этилового в образцахпромышленных серий препарата стоматофит А и статистическая обработкарезультатов представлены в таблице 26.AbundanceTIC: stomat_3.D\data.ms3e+072.5e+072e+071.5e+071e+07150000003.004.005.006.007.008.009.00 10.0011.0012.0013.00Time-->Рис. 25.
– Общий вид хроматограммы препарата стоматофит АВремя удерживания:(1) 3,73 – этанол.Таблица26.Содержание спирта этилового в образцах промышленных серий№ опыта№1№2№3№4№5препарата стоматофит АСодержание спирта этилового, %49,7748,5348,5548,4747,34Метрологические характеристики (Р=0,95; n=5)_xSS2_48,530,85990,73941,07Δx_ε, %2,2104ГХ-МС исследование образцов препарата стоматофит А позволилонаряду с БАВ идентифицировать и количественно определить содержаниеанестезина [53]. Пик анестезина соответствует времени удерживания 5,18(рис. 26).
Содержание анестезина в образцах исследованных серий препаратастоматофит А – 40,12±1,09% (относительно 100% площадей пиков веществ,определяемых в препарате стоматофит А с использованием ГХ-МС). Данныео количественном содержании анестезина в образцах промышленных серийпрепаратастоматофитАистатистическаяобработкарезультатовпредставлены в таблице 27.Abundance1TIC: stomat_3.D\data.ms2.5e+072e+071.5e+071e+0750000003.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.0011.0012.0013.00Time-->Рис. 26. – Общий вид хроматограммы образцов препарата стоматофит АПродолжительность удерживания: (1) 5,18 – анестезин.105Таблица 27Содержание анестезина в образцах промышленных серий препаратастоматофит А№ опыта№1№2№3№4№5Содержание анестезина, %41,3640,0640,1238,8840,18Метрологические характеристики (Р=0,95; n=5)xSS240,120,87780,7706Δx1,09ε, %2,7ГХ-МС анализ может быть предложен в качестве подтверждающегометода оценки качества многокомпонентныхпрепаратов, содержащиханестезин.4.1.2 Сопоставление результатов ГХ-МС анализа образцов модельногоспиртового экстракта из смеси семи видов растительного сырья ипрепаратов стоматофит и стоматофит АПри обобщении экспериментальных результатов ГХ-МС анализа МЭСи промышленных серий препаратов стоматофит и стоматофит А можновыделить типичные соединения для четырех видов растительного сырья:ментол – для мяты перечной листьев; тимол – для травы тимьянаобыкновенного; камфора – для шалфея лекарственного листьев; тонгаосу –для цветков ромашки, определенные во всех исследуемых объектах.Применение метода ГХ-МС позволяет параллельно с идентификацией БАВопределять их количественно [56].
Результаты количественного ГХ-МС106анализа представлены в таблице 28. Содержание БАВ указано относительно100% площадей пиков всех идентифицированных соединений.Таблица 28Количественное содержание ментола, тимола, камфоры и тонгаосу висследованных образцах модельного спиртового экстракта из смеси семивидов растительного сырья и препаратах стоматофит и стоматофит ААнализируемыйСтоматофитСтоматофит АМЭСМентол1,46±0,05%0,48±0,02%1,50±0,05%Тимол0,96±0,03%0,52±0,02%1,02±0,03%Камфора0,89±0,03%0,83±0,03%0,56±0,02%Тонгаосу0,97±0,02%0,71±0,02%4,73±0,07%объектБАВ4.1.3 Валидация ГХ-МС методики определения терпеноидов на примеремногокомпонентногопрепаратарастительногопроисхождениястоматофитВалидацияметодикиГХ-МС,предлагаемойдляанализамногокомпонентных лекарственных препаратов на основе эфирномасличногорастительного сырья с целью определения терпеноидов, на примерепрепаратастоматофитОФС.1.1.0012.15ГФпроводиласьв«ВалидацияXIIIсоответствиисаналитическихтребованиямиметодик»ирекомендациями соответствующих руководств [8, 75].
Для демонстрациипригодности методики ГХ-МС для анализа препарата стоматофит на примерементола, как компонента терпеноидной фракции препарата стоматофит снаибольшимсодержаниемванализируемойследующие валидационные характеристики:пробе,быливыбраны107Специфичность – способность однозначно (достоверно) определятьактивное вещество в присутствии растворяющихся компонентов плацебо,системныхпиков(идентифицируемыхпохроматограмме–смесирастворителей в испытуемом растворе) и основных примесей. Установлено,что соседние пики не мешают идентификации ментола (рисунки 27, 28).Рис.
27. – Хроматограмма терпеноидной фракции препарата стоматофит:1 – α-пинен; 2 – камфенРис.28. – Хроматограмма терпеноидной фракции препарата стоматофит:3 – цинеол; 4 – ментол; 5 – тимол; 6 – камфора108Хроматографическая система считается пригодной, если выполняютсяследующие условия:• пики плацебо, других определяемых компонентов терпеноиднойфракции и пики примесей не мешают идентификации (на рис. 28ближайшие пики терпеноидов не мешают определению ментола).• разрешение пиков R S : ментола и ближайших примесей пробы должнобыть более 1,5.• коэффициенты асимметрии пика ментола должны быть не более 2,0.• эффективность хроматографической колонки должна быть не менее1000 теоретических тарелок.• RSD (относительное стандартное отклонение), рассчитанное по 5хроматограммам раствора ментола, должно быть не более 2% [52, 70].Критериипригодностихроматографическойсистемыиэкспериментальные результаты проверки их выполнения (таблица 29)подтверждаютсоответствиепоказателейпараметрувалидации–специфичность.Таблица 29.Критерии пригодности хроматографической системы иэкспериментальные результаты проверки их выполненияКритерии пригодностиПики плацебо не мешают определениюосновного веществаНа хроматограмме испытуемого раствораразрешение пика ментола R S с любымдругим пиком примеси в пробе должнобыть более 1,5Число теоретических тарелок по пикустандартного образца ментолаКоэффициент асимметрии пика ментолаТ 0,05RSD площади пика ментола, рассчитанноепо 5 хроматограммам раствора сравненияПолученный результатСоответствуетСоответствуетR S (ментол/ примеси) = 2,57350Т 0,05 = 1,80,74%Линейность доказывается, если в выбранном диапазоне концентрацийпоказано прямо пропорциональное соотношение между площадями пиков109опытных образцов растворов, содержащих исследуемые компоненты исодержанием в них изучаемого терпеноида – ментола.Данная зависимость согласно методу количественного определенияимеет линейный характер (рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
