Диссертация (1141387), страница 26
Текст из файла (страница 26)
2. Вид высушенных плодов после их разрушенияИзмельченное сырье. При рассмотрении измельченного сырья под лупой(10×) или стереомикроскопом (16×) видны кусочки околоплодников различнойформы, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2,5 мм. Цвет споверхности и на изломе желтоватый. Запах специфический. Вкус водногоизвлечения горьковатый.187Микроскопическиепризнаки.Цельноеиизмельченноесырье.Напоперечном срезе околоплодника видны три слои: экзокарп, мезокарп и эндокарп.Экзокарп представлен слоем наружной эпидермы.Наружнаяповерхностьоколоплодника густо покрыта звёздчато-лучистыми трихомами. Клетки экзокарпамелкие, толстостенные, расположены в 2-4 слоя. Волоски состоят из 4-12заостренных клеток, выходящих из одного основания в разные стороны толщиной6-9 мкм.Мезокарп состоит из крупных, округлых к наружной части и вытянутых сослабо извилистыми стенками к внутренней части околоплодника клеток.
Вверхней части мезокарпа встречаются кубические кристаллы. Проводящиеэлементырасположенывмезокарпеближеквнутреннейповерхностиоколоплодника. Рядом с ними встречаются одиночные склеренхимные клетки илиих группы по 2-3 клетки. В примыкающих к экзокарпию клетках содержатсяхлоропласты, а клетки, примыкающие к эндокарпию, нередко служат местомнакоплениякрахмальныхзёрен.Эндокарппредставлентолстостеннымипористыми клетками, расположенными в несколько слоев и уменьшающимися вразмерах к внутренней части околоплодника.Поверхность эндокарпа ровная, местами с выемками, имеющими размерыклеток 30х50 мкм. Главная часть эндокарпа представлена склеренхимой, клеткикоторойнепосредственнопримыкаюткмезокарпию.Частьэндокарпа,обращённая к полости плода - внутренний эпидермис.
На внутреннем эпидермисеплода имеется губчатый слой – аэренхима. На эндокарпе также имеются трихомы.Они состоят из одной или нескольких длинных заостренных клеток, выходящихиз одного основания. В отличие от трихом экзокарпия они расположеныспорадически.Плодоножка имеет цилиндрическую форму и густо покрыт звезчатымитрихомами.188189Рисунок 3- Стиракс лекарственный околоплодников1 (СЭМ), 2 (ОМ)– поперечный срез экзокарпия и мезокарпия: а–Экзокарпий,б– паренхима мезокарпия, с– эндокарий; 3 (СЭМ) –многочисленные звезчатыетрихомы на поверхности экзокарпа; 4 (ОМ), 5 (СЭМ) – звезчато-лучистыетрихомы; 6 (ОМ)– продольный разрез мезокарпия; 7 (ОМ)– поперечный разрезмезокарпия; 8 (ОМ)– срез мезокарпия: а– сосуды, б– клетки мезокарпия; 9 (ОМ)–крахмальные зёрна в мезокарпе (после окрашивания раствором Люголя): а–крахмальные зёрна; 10 (СЭМ), 11 (ОМ) – поперечный срез эндокарпия; 12 (СЭМ)–эндокарп в плане (трихомы); 13 (ОМ) – поперечный срез эндокарпа (трихомы);14 (СЭМ) – плодоножка покрыта волосками.Определение основных групп биологически активных веществ1.
Тонкослойная хроматографияПриготовление растворов.Раствор стандартного образца (СО PQS). Около 0,05 г (точная навеска)стандартного образца Purified Quillaia Saponin HRS, EP standart растворяют в 2 млметанола, перемешивают. Срок годности раствора 10 сут.Испытуемый раствор. Около 0,6 г (точная навеска) сухого экстрактастиракса лекарственного (СЭСЛ) растворяют в 2 мл метанола, перемешивали втечение 1 мин, затем фильтровали. Срок годности раствора 10 сут.На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоемсиликагеля с флуоресцентным индикатором размером 10 × 20 см на алюминиевойподложке наносят 10 мкл испытуемого раствора (раствора сухого экстрактастиракса лекарственного в метаноле) и 10 мкл раствора стандартного образца (СОPQS).Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, ее помещают в камерупри температуре 20 °С со смесью растворителей: хлороформ-метанол-вода (6:3:1).Пластину вынимают из камеры после прохождения фронта растворителей 15 см,сушатвтечение5дефибринированной крови.минут,затемопрыскиваютрастворомвзвеси190На хроматограмме испытуемого раствора должно обнаруживаться зоныадсорбции белого цвета с Rf около 0,68 испытуемого раствора и Rf около 0,55(сапонины СО PQS).2.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящихсквозь сито с отверстиями диаметром 0,5 мм. Около 1 г измельченного сырьяпомещают в плоскодонную колбу вместимостью 50 мл и прибавляют 20 млспирта этилового 70%. Содержимое колбы нагревают на водяной бане в течение30 мин с обратным холодильником. Колбу с содержимым охлаждают докомнатной температуры, фильтруют через складчатый бумажный фильтр впробирку вместимостью 20 мл.2 мл извлечения помещают в пробирку вместимость 20 мл, прибавляют 8 млводы, перемешивают и энергично встряхивают.
Наблюдается образованиеобильной и устойчивой пены (сапонины).2 мл извлечения переносят в две пробирки вместимость 20 мл (мерные, содинаковым диаметром). В одну из пробирок 8 мл раствора кислотыхлористоводородной 0,1Н, в другую - 8 мл раствора натрия гидроксида 0,1Н. Обепробирки интенсивно встряхивают в течение 1 мин. образуются пена, равная вобеих пробирках по объему (тритерпеновые сапонины).2 мл извлечения переносят в фарфоровую чашку диаметром 10 см, помещаютна кипящую водяную баню и выпаривают досуха в вытяжном шкафу.
К сухомуостатку прибавляют 1 мл хлороформа и 5 капель концентрированной сернойкислоты. Появиться желтое окрашивание, постепенно переходящее в красноеокрашивание (тритерпеновые сапонины) [ТУ 9377-075-04868244-2008].ИСПЫТАНИЯВлажность. Цельное сырье, измельченное сырье – не более 4,5%.Зола общая.
Цельное сырье, измельченное сырье – не более 1%.Зола, не растворимая в 10% растворе НСl. Цельное сырье, измельченноесырье – не более 0,1%.191Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито сотверстиями диаметром 3 мм, не более 2%. Измельченное сырье: частиц,проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,25мм, не более 20%; частицразмером более 2 мм не более 15%.Коэффициент водопоглощения.
Измельченное сырье: равный 2,3 мл/г.Коэффициент поглощения этанола 96%. Измельченное сырье: равный 0,73мл/г.Коэффициент поглощения метанола. Измельченное сырье: равный 0,77мл/г.Посторонние примесиДругие части стиракса (листья и ветки). Цельное сырье, измельченноесырье – не более 3 %.Плодоножки. Цельное сырье, измельченное сырье – не более 6 %.Органическая примесь. Минеральная примесь.
Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС «Определениесодержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье илекарственных растительных препаратах».Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определениесодержаниярадионуклидоввлекарственномрастительномсырьеилекарственных растительных препаратах».Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиямиОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственномрастительном сырье и лекарственных растительных препаратах».Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС«Микробиологическая чистота» (Категория 4 А).Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье:экстрактивные вещества– не менее 59%, сумма сапонинов– не менее 7,5 %.192Экстрактивные веществаАналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящихсквозь сито с отверстиями размером 1 мм.
Около 6,0 г (точная навеска)высушенныхоколоплодниковстираксалекарственного(сопределеннойвлажностью W%) помещают в колбу 250 мл, прибавляют 30 мл метанола. Колбувзвешивают и проводят первичную мацерацию сырья в течении 1 ч, после чегосоединяют ее с обратным холодильником и нагревают на водяной бане в течение2 ч. После охлаждения взвешивают колбу с содержимым и восполняютрастворителем потерю в массе. Затем взбалтывают колбу и фильтруютсодержимое.
Эту процедуру повторяют 3 раза, каждый раз прибавляя фильтратобратно в колбу. Фильтраты объединяют, отбирают 10,0 мл и высушивают этипробы досуха при температуре 100 °С, затем охлаждают в течение 30 мин вэксикаторе и взвешивают сухой остаток (m).Содержание экстрактивных веществ в сухом сырье околоплодниковстиракса лекарственного вычисляют по формуле:;где: m — масса сухого остатка, г;W — влажность сырья, %.Сумма сапонинов6,0 г (точная навеска) измельченных высушенных околоплодников стираксалекарственного (с определенной влажностью W%), проходящих сквозь сито сотверстиями диаметром 0,5 мм помещают в патрон из фильтровальной бумаги иопускаютвэкстрактораппаратаСокслета.Экстракциюпроводятсиспользованием экстрагента метанол 100 мл, при температуре 55-60 °С дополного извлечения экстрактивных веществ.
Полученную в колбу-приемниксмесь полностью упаривают на ротационном испарителе в вакууме (230 мБар)при 66°С.193Густой экстракт последовательно обрабатывают этилацетатом и нбутанолом. При подкислении выпадают осадок. Фильтрационный осадокпредставляет собой густую однородную массу серого цвета. Выпавший осадокотфильтруют, отмывают водой и сушат на воздухе при комнатной температуре дополного испарения растворителей.К точной навеске 46,3 мг сухого экстракта стиракса лекарственного(СЭСЛ), добавляют 1 мл DMSO-d6, встряхивают в течение 1 минуты,центрифугироваться в течение 5 минут при 14000 об/мин.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
