Диссертация (1141308), страница 18
Текст из файла (страница 18)
Согласнонашим результатам CV находится в интервале от 1,22% до 1,26%. Критериемприемлемости являлся коэффициент вариации для 6 измерений, который долженбыть не более 2%. Он составил 1,26% (табл. 3.6.1.2).127Таблица 3.6.1.2Результаты проверки сходимости методикиДатаиспытанийИзучаемый сбор с содержанием суммы флавоноидов в пересчете налютеолин-7-гликозид 0,43%РезультатыСтандартноеКоэффициент№определенияотклонение Sвариации CV, %1-ый день123456Среднее2-ой день123456Среднее0,420,420,430,420,420,430,4250,005161,220,430,430,430,430,420,420,430,005161,26Воспроизводимость устанавливали по результатам анализа одного образцаразработанного сбора в двух лабораториях в 6 повторностях с содержанием суммыфлавоноидов в пересчёте на лютеолин-7-гликозид 0,43%.
Критерий приемлемостивыражался величиной коэффициента вариации для 6 измерений, который долженбыть не более 2%. Он составил 1,35% (табл. 3.6.1.3).128Таблица 3.6.1.3Результаты проверки воспроизводимости методикиЛаборатория1Среднее2Изучаемый сбор с содержанием суммы флавоноидов в пересчете налютеолин-7-гликозид 0,43%РезультатыСтандартноеКоэффициент№определенияотклонение Sвариации CV, %10,4220,4230,4340,4350,4360,420,4250,005481,35123456Среднее0,420,430,430,430,430,420,430,005161,27Определение линейности проводили на пяти концентрациях СО лютеолин-7гликозида.
Для анализа отвешивали точную навеску 0,02 г СО лютеолин-7гликозида, помещали в мерную колбу (объёмом 25 мл), прибавляли 20 мл 70%спирта этилового и доводили объем раствора тем же спиртом до метки (раствор А).Далее в пять мерных колб вместимостью 25 мл вносили по 1 мл; 2 мл; 3 мл; 4 мл; 5мл раствора А. К растворам во всех пяти колбах прибавляли 2 мл 2% раствораалюминия хлорида (III) и доводили до метки 70% спиртом этиловым,перемешивали. Оптическую плотность каждого из полученных растворовизмеряли на саморегистрирующем спектрофотометре «Helios Alfa» (SpectronicUnicam, Великобритания) при длине волны 402±5 нм в кювете с толщиной слоя 10мм. Критерием приемлемости линейности являлся коэффициент корреляции,величина которого между рядом полученных значений должна быть не ниже 0,98,и совокупность данных можно описать прямой линией.
В эксперименте линейность129метода наблюдается в интервале концентраций 0,32-1,6 мг%, что подтверждаетсявысоким коэффициентом корреляции (r=0,999) (табл. 3.6.1.4, рис. 3.6.1.5).Таблица 3.6.1.4Результаты проверки линейности методикиОптическаяплотность D0,1300,2650,3850,5150,640Концентрация СОy=b×x+aКоэффициентлютеолин-7-гликозида, мгкорреляцииba%0,320,640,960,9990,397 0,0061,281,60Рис. 3.6.1.5 График зависимости оптической плотности от концентраций СОлютеолин-7-гликозида130Специфичность методики подтверждали доказательством того, чтоспособность к светопоглощению флавоноидов при определенной длине волны,сравнивается с аналогичной способностью стандартного образца.
По методикеколичественного определения суммы флавоноидов были получены окрашенныекомплексы изучаемого сбора и СО лютеолин-7-гликозида. Спектры поглощенияполученных комплексов снимали на саморегистрирующем спектрофотометре«Helios Alfa» (Spectronic Unicam, Великобритания) в интервале длин волн от 350до 460 нм. Критерием приемлемости являлась идентичность спектрапоглощения СО лютеолин-7-гликозида с алюминием хлорида со спектромпоглощения сбора с тем же комплексообразователем. Представленные спектрыпоглощения (рис. 3.7.1.1) визуально подтверждают идентичность, что позволяетпризнать специфичность удовлетворительной.Специфичность методики также была доказана методом с добавками.Испытание проводилось на одном образце сбора в 3-х концентрациях сдобавками СО лютеолин-7-гликозида.
Критерием приемлемости являласьвеличина относительной ошибки опытов с добавками, которая должнанаходиться в пределах случайной ошибки методики. Величина относительнойошибки опытов с добавками находится в пределах случайной ошибки методики,что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки при определениисуммы флавоноидов и о специфичности данной методики (табл. 3.6.1.6-3.6.1.7).Таблица 3.6.1.6Результаты проверки специфичности методики№Содержаниефлавоноидовв сборе (мг)ДобавленоСОлютеолин-7гликозида(мг)Ожидаемоесодержаниефлавоноидов(мг)1230,750,750,750,030,040,050,780,790,80Полученноесодержаниефлавоноидов(мг)(среднее из 3-хопределений)0,790,810,79Ошибкаабс.,(мг)отн.,(%)+0,01+0,02-0,01+1,28+2,5-1,25131Таблица 3.6.1.7Результаты проверки специфичности методикиn5Р, %95f4Наt (Р,f)2,78основании_Х, %0,472S0,00013результатов,_ΔХ0,0141S0,0114полученныхпри_E, %3,04оценкеметодикиколичественного определения суммы флавоноидов в пересчёте на лютеолин-7гликозид в изучаемом сборе, можно оценить метод положительно по параметрам:правильность,прецизионность(сходимостьивоспроизводимость),специфичность, линейность (табл.
3.6.1.8).Таблица 3.6.1.8Результаты валидационной оценки методики количественного определениясуммы флавоноидов в изучаемом сборе в пересчёте на лютеолин-7-гликозид№п/пПараметрывалидации1Правильность2СходимостьКритерий приемлемостиПроцент восстановления98,0-102%Коэффициентвариации не более 2%Коэффициентвариации не более 2%3Экспериментальныеданные99,93%1-ый день CV=1,22%2-ой день CV=1,26%1-ая лаборатория:CV=1,35Воспроизводимость4Специфичность1. Близостьспектровпоглощения2. Относительнаяошибка опытов с добавкамидолжнанаходитьсявпределахслучайнойошибки методики, чтосвидетельствуетоботсутствиисистематической ошибки.2-ая лаборатория:CV=1,271. Доказанаблизостьспектровпоглощенияокрашенныхкомплексовводно-спиртового извлеченияизучаемого сбора и СОлютеолин-7-гликозида.2.
Относительная ошибкаопытовсдобавкаминаходитсявпределахслучайной ошибки методики,чтосвидетельствуетоботсутствии систематическойошибки.132Продолжение таблицы 3.6.1.8Линейность идиапазон5Коэффициенткорреляции должен быть нениже 0,980,9990,32-1,6 мг%Таким образом, разработана и валидирована методика количественногоопределения суммы флавоноидов в пересчёте на лютеолин-7-гликозид в изучаемомсборе.
Данная методика может быть использована при разработке проектаФармакопейной статьи на комплексный урологический сбор «Фитоурол» иустановлении норм.3.7 Количественное определение основных БАВ в сбореКоличественная оценка содержания основных групп БАВ в сборе являетсяважным этапом фармакогностического изучения. Данный анализ необходим длянаучного обоснования фармакологической активности растительного средства,определения варьирования содержания БАВ в разных образцах сбора, а также дляобоснования стандартизации сбора. Государственная Фармакопея [27, 28] длялистьев брусники предлагает стандартизацию по арбутину, для травы хвощаполевого – по сумме флавоноидов в пересчете на кверцетин, для корней лопуха –по сумме полисахаридов в пересчете на фруктозу и содержанию экстрактивныхвеществ, извлекаемых водой, для плодов укропа огородного – по количествуэфирного масла, а для травы полыни обыкновенной – количественный показательвообщенерегламентируется.Фармакотерапевтическийэффектводногоизвлечения сбора обуславливает сумма всех БАВ компонентов.
Нами былоопределено содержание в сборе экстрактивных веществ, извлекаемых водой,флавоноидов, полисахаридов (инулина), арбутина, эфирного масла, дубильныхвеществ, а также органических кислот.133Определение экстрактивных веществОпределение содержания экстрактивных веществ, извлекаемых водой, визучаемом сборе проводили по методике Государственной Фармакопеи [27, 28].Результаты количественного определения экстрактивных веществ в сбореприведены в табл. 3.7.1.Таблица 3.7.1Результаты количественного определения экстрактивных веществ в изучаемомсборе (n=5, р=0,95)Содержание экстрактивных веществ,%21,223,721,122,723,122,36±1,44№12345Среднее из 5-ти определенийКак видно из табл.
3.7.1, содержание экстрактивных веществ, извлекаемыхводой, в разных образцах изучаемого сбора составляет от 21,1 до 23,7%.Метрологические характеристики методики представлены в табл. 3.7.2.Таблица 3.7.2Метрологические характеристики методики количественного определенияэкстрактивных веществ в изучаемом сбореn5f4Р, %95t (Р,f)2,78_Х, %22,362S1,348S1,161_ΔХ1,44_E, %6,45Среднее содержание экстрактивных веществ, извлекаемых водой, визучаемом сборе составляет 22,36±1,44%.134Определение флавоноидовАнализ исследуемых образцов изучаемого сбора по разработанной намиметодике (см. глава 3, п. 3.6) показал, что в проанализированных образцах сборасодержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид варьирует от0,45 до 0,48% (табл.
3.7.3). Рекомендуем установить норму содержания суммыфлавоноидов в сборе не менее 0,4%.Таблица 3.7.3Результаты количественного определения суммы флавоноидов в пересчете налютеолин-7-гликозид в изучаемом сборе (n=5, р=0,95)№12245Среднее из 5-ти определенийСодержание суммы флавоноидов впересчете на лютеолин-7-гликозид, %0,460,470,450,470,480,466±0,014Метрологические характеристики методики представлены в табл. 3.7.4.Таблица 3.7.4Метрологические характеристики методики количественного определения суммыфлавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид в изучаемом сбореn5f4Р, %95t (Р,f)2,78_Х, %0,4662S0,00013S0,0114_ΔХ0,0141_E, %3,04Среднее содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7гликозид в изучаемом сборе составляет 0,47±0,01%.135Определение арбутинаСогласно нашим ранее проведенным фитохимическим исследованиямизучаемого сбора и данным литературы, было установлено, что одной из основныхгрупп фенольных соединений является фенологликозид арбутин.
Количественноеопределение арбутина проводили методом йодометрического титрования по ГФ XIизд. [29] и методом ВЭЖХ (см. глава 2, п. 2.3.3) [155].Результаты проведенных исследований количественного определенияарбутина в сборе приведены в табл. 3.7.5.Таблица 3.7.5Результаты количественного определения арбутина в изучаемом сборе разнымиметодами (n=5, р=0,95)№12345Среднее из 5-ти определенийСодержание арбутина найденное методом, %ГФ XIВЭЖХ1,390,791,490,761,480,821,350,761,410,801,424±0,07430,786±0,0324Как видно из табл. 3.7.4, содержание арбутина в разных образцах сбораметодом йодометрического титрования колеблется от 1,35 до 1,49%, а методомВЭЖХ – от 0,76 до 0,82%.
Так, сравнение результатов определения арбутинаразными методами показало, что фармакопейным методом результат почти в двараза выше, по сравнению с полученными результатами, найденными ВЭЖХметодом.Метрологические характеристики методик представлены в табл. 3.7.6 и 3.7.7.136Таблица 3.7.6Метрологические характеристики методики количественного определенияарбутина в изучаемом сборе фармакопейным методомn5f4Р, %95t (Р,f)2,78_Х, %1,424S20,00358S0,05983_ΔХ0,0743_E, %5,61Таблица 3.7.7Метрологические характеристики методики количественного определенияарбутина в изучаемом сборе методом ВЭЖХn5f4ТакимР, %95t (Р,f)2,78образом,_Х, %0,786согласно2S0,00068S0,02608проведенным_ΔХ0,0324исследованиям_E, %4,12среднееколичественное содержание арбутина в изучаемом сборе фармакопейным методомсоставило 1,42±0,07%; ВЭЖХ – 0,79±0,03%.Определение полисахаридов (инулина)Определение содержания суммы полисахаридов в пересчете на фруктозу визучаемом сборе проводили по методике ГФ РФ XIII изд.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
